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中国药科大学生命科学与技术学院岛津LC-20A型液相色谱系统的使用和维护一、系统配置系统组成：本系统由2个LC-20AT溶剂输送泵分为A,B泵、手动进样器、C18填料色谱柱、SPD-20A紫外－可见检测器、N2010工作站等组成。二、准备工作流动相准备：使用前应待检样品的检验方法准备所需的流动相（水使用纯净水，其他有机溶剂要求色谱纯，无机盐缓冲液浓度一般低于20mmol/L）用合适的0.45μm滤膜过滤（有机相和水相分别选用各自的专用滤膜，有机相用尼龙，水相用纤维素），超声脱气20min以上待用。1、色谱柱准备：根据待检测样品的需要选用合适色谱柱，柱进出口方向应与流动相流向一致（检查柱上“FLOW”流向）2、样品溶液配置：配置样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适0.45μm的样品过滤器过滤后待用。如检测中发现检测峰拖尾严重，可稀释后使用。严禁使用未经处理的浑浊溶液进样。3、检查仪器各种部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。三、开机、参数设定及平衡系统1、接通电源，依次开启稳压电源、A泵、B泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，启动工作站软件。2、排气泡或更换流动相的操作方法（操作时虑头必须全部浸入流动相中，否则，可能带入气泡。更换流动相时，须先把泵关掉，等柱压为零再拿出虑头更换。）2.1.将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；2.2.逆时针转动A/B泵的排液阀180o，，打开排液阀；2.3.按A/B泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；2.4.将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。1中国药科大学生命科学与技术学院2.5.如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。2.6.如按以上方法不能排尽气泡，从柱人口处拆下连接管，放入废液瓶中设流速为5ml/min，按pump键停泵，重新接上柱并将流速重设定为规定值。3、参数设定3.1、波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需波长值，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。3.2、流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出。3.3、流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按[conc]键，用数字键输入流动相B的浓度百分数，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。3.4、梯度设定3.4.1.在A泵显示初始屏幕时，按[edit]键，[Enter]键；3.4.2.用数字键输入时间，[Enter]键，重复按[func]键选择所需功能（FLOW设定流速，BCNC设定流动相B的浓度），按[Enter]键，用数字键输入设定值，按[Enter]键，3.4.3重复上一步设定其他时间步骤；3.4.4用数字键输入停止时间，重复按[func]键直至拼命显示STOP，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。4、平衡系统4.1.按《N2010色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件，输入实验信息并设定各项方法参数。4.2等度洗脱方式4.2.1按A泵的[pump]键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。4.2.2.检查各管路连接处是否漏夜，如漏夜应予以排除4.2.3.观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断2中国药科大学生命科学与技术学院为柱前管路仍有气泡，进行气泡排除操作4.2.4.观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min,噪声为0.001mV时，可认为系统已经达到平衡状态，可以进样。4.3.梯度洗脱方式4.3.1以检查方法规定的梯度初始条件，按4.6.2项下方法平衡系统。4.3.2在进样前运行1~2次空白梯度。方法：按A泵的[run]键，prom..run指示灯亮，梯度程序运行；程序停止时，prom.run指示灯灭。4.4如果使用前色谱柱只能中保存的流动相为纯甲醇或纯乙睛，而新流动相中含有缓冲盐时，应先用纯水冲洗色谱柱十分钟左右再使用流动相，以免盐析出损坏系统。4.5.如系统为正相或反相交换使用，应先将所有管路用异丙醇清洗后再换新流动相使用。四、检测1、进样前按检测器[zero]键调零2、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。3、每次进样量要基本一致，进样针里不可有气泡，如有，及时赶去。4、在进样阀处于“Inject”状态时，插入进样器，迅速旋转至load状态，注入样品，旋回inject位置，进样结束。5、至样品检测结束，在N2010色谱工作站软件上计算结果。五、清洗系统关机1、手动进样器清洗：用注射器吸20ml超纯水后套上冲洗头，将冲洗头轻轻顶在进样口上（不宜用力过大，否则容易损坏进样口），使进样阀保持在load位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。2、色谱柱清洗：继续以分析中使用流动相冲洗10分钟以上，待基线平稳后关闭检样器，冲洗色谱柱。3中国药科大学生命科学与技术学院3、如果流动相不含缓冲盐，可以用甲醇：水＝70：30（或用纯甲醇）直接冲洗30分钟以上后把流速设为零，然后关闭所有仪器设备，顺序为：先退出工作站软件，再依次关闭系统控制器、检测器、自动进样器、柱温箱、泵；4、如流动相含缓冲盐可先用纯水冲洗20～30分钟后再用甲醇：水＝70：30（或用纯甲醇）冲洗30分钟以上，流速设零后再关闭仪器各部分电源，然后关闭总电源离开实验室。4