小鼠MouseMusmusculus-动物试验技术平台

1小鼠（Mouse,Musmusculus）属于啮齿目（Rodentia）、鼠科（Muridae）、小鼠属（Mus）。~95%的实验动物为啮齿类动物，其中~90%为小鼠和大鼠。选择小鼠作为实验模型的原因：易于饲养；繁殖能力强；繁殖周期短；背景知识较为清晰、全面；与人类有相同的器官，并发挥相似功能；可作为人类疾病模型；大量自发基因突变品系，；成熟的规模化培育技术。常用近交系（inbredstrain）：BALB/c—白色毛发，红眼C3H—杂色，深棕色毛发，毛发末梢有黄色条纹C57B1/6—黑色毛发DBA—棕色毛发，最老的近交系129，FVB—常用于转基因操作常用远交系（outbredstrain）ICR—白色毛发BlackSwiss—黑色毛发SwissWebster—白色毛发基因型鉴定小鼠尾尖（5mm）可获得足够量DNA用于基因型鉴定。（小鼠小于21天时，无需麻醉。小鼠大于21天时，需麻醉。）鼠耳打孔或剪脚趾标记获得的组织可用于基因型鉴定。小鼠毛发、唾液、粪便也可用于基因型鉴定。基本生理知识非常敏锐的听觉，对高频噪音非常敏感；2非常敏锐的嗅觉；不同品系的小鼠视力有所差别；成年小鼠体重约为20-40克。成年雄性小鼠比成年雌性小鼠体型、体重略大；心跳约为300次/分钟；呼吸约为100次/分钟；平均寿命为1-3年；小鼠有16颗牙齿，包括2颗上门牙、2颗下门牙，左右各有3颗上侧及下侧臼齿；小鼠的门牙可不断生长。门牙只在外侧有珐琅质，小鼠通过碾磨上下侧门牙保持门牙的锋利；雌性小鼠有5对乳腺，包括3对胸部乳腺，2对腹部乳腺；乳腺组织延伸至雌性小鼠身体的背侧。可经常在小鼠的体侧或背部发现乳腺癌肿瘤；雄性小鼠的脾脏约比雌性小鼠的脾脏大50%。行为学小鼠通常较为温顺；小鼠对声音非常敏感，其行为受到外界声音极大的影响（进行小鼠动物实验时应尽量保持安静！！）；小鼠通过排泄物中的信息素与其它小鼠交流，小鼠对信息素非常敏感；静止时，小鼠通常四足着地，并通过视觉与听觉感知外部环境变化；睡觉时，小鼠身体通常卷曲，将头部埋于身体下部，多只小鼠通常紧挨聚集在一起；小鼠夜间活动活跃。小鼠清醒时非常活跃，常见行为包括在笼具内走动、移动笼具内物品，及理毛；小鼠清醒时代谢非常旺盛；小鼠通常不会呕吐；脱毛现象：同笼具内占统治地位的小鼠有时会吞噬其它小鼠的毛发，导致其它小鼠明显的脱毛现象。这通常是无害的，将占统治地位的小鼠移出单独饲养后，其它小鼠的毛发会再度长出。应与打斗、皮肤疾病等引起的脱毛现象予以区分。在笼具内提供充足的玩具/做窝材料可以防止此类脱毛现象；同笼具内雌性小鼠通常不会互相打斗；同笼具内雄性小鼠经常会发生打斗现象，在笼具内提供充足的玩具及做窝材料有时可以防止此类现象。应密切观察此类小鼠，必要时应分开单独饲养。性成熟前（出生或断奶时）即同笼具饲养的雄性小鼠发生打斗的可能性会大大降低。性成熟雄性小鼠一旦分开饲养后，不应再在同一笼具内饲养。3性成熟及繁殖雄性小鼠肛门与生殖器之间的距离是雌性小鼠的两倍，通常可用于区分雄性及雌性小鼠；雌性小鼠可见乳腺，雄性小鼠的乳腺不明显；可以采用两种交配模式：一雄一雌或一雄多雌。绝对不允许一雌多雄或多雄多雌；性成熟期为40-60天；交配期可至12-18个月。年老小鼠的产仔数量可能会下降；雌性小鼠有发情期（每4~5天）；怀孕期为19-21天；产仔量为4-12只。不同品系的小鼠产仔量有显著区别。通常近交系、转基因和基因敲除小鼠的产仔量较少。仔鼠应于21-28天（体重10-12g）时断奶；雌性小鼠在分娩后24小时内易再度怀孕。雌性小鼠再度分娩前，前次仔鼠应断奶，分笼，以避免笼具过度拥挤，并使母鼠可以全身心照顾新生小鼠；阴道栓是检测交配成功很好的指标；笼具内必须提供充足材料供繁殖期及哺乳期小鼠做窝；新生小鼠为粉红色，无毛发；新生小鼠眼睑及耳道是闭合的，外耳没有充分发育；出生后不久，应透过新生小鼠皮肤在腹部左侧看到白点，称为奶点。奶点是新生小鼠得到充分照顾和健康状况良好的重要指标；如母鼠受到惊吓，或幼鼠健康状况欠佳，母鼠可能会吃掉部分或全部的幼鼠。母鼠分娩后数天内不应打扰，如外界噪音、移动笼具、换笼等；如确需其它母鼠代乳，幼鼠应用代乳母鼠笼具内垫料擦拭以去除原母鼠/笼具气味，并与代乳母鼠一同移至新的笼具；幼鼠在2-3天时长出毛发；幼鼠耳朵于3-4天时张开；幼鼠眼睛于12-14天时张开。小鼠饲养操作时应保持安静！小鼠对尖锐的噪音非常敏感。轻柔的背景音乐有助于小鼠保持良好状态。笼具鞋盒型笼具—铺有垫料，最为常用独立通风笼具（IVC）--可以更好地保持动物饲养环境，防止病原体传染4实验动物平台工作人员应定期按照标准程序更换笼具。实验动物平台工作人员及科研人员应经常检查笼具卫生状况，必要时笼具应提前更换。实验动物平台工作人员应定期按照标准程序打扫并消毒动物饲养间。确保饮水瓶畅通、无泄漏。移动笼具时，应取出饮水瓶或掉转饮水瓶方向，避免饮用水撒至笼具内。饲料饲料及饮水通常稳定、持续供应。通常应提供可维持数天的饲料和饮水；一般情况下饲料中无需添加额外营养成分，但对健康状况欠佳的小鼠和幼鼠可额外提供维生素等。饲料高压灭菌会破坏一部分维生素，应添加复合维生素。饲料通常为4-5克的紧密颗粒，同时可以帮助小鼠磨损门牙。成年小鼠日消耗约为3-6克。非颗粒状或粉末状的饲料通常只在需检测食物摄取量，或需添加其它食物添加剂时使用。动物抓取熟练掌握抓取小鼠是后续操作的基础。实验人员可以用以下方法进行操作：用拇指和食指或镊子夹起小鼠尾巴的根部；（注意：小鼠的尾尖对温度敏感，应避免接触小鼠的尾尖部分。）或用拇指和食指或镊子夹起小鼠颈后的皮肤。（注意：小鼠颈后的皮肤较为松弛，如不能限制小鼠头部转动，小鼠可能会反咬。同时应注意不应影响小鼠的正常呼吸。）幼鼠可以用手掌环握的方式，或抓住幼鼠颈后的皮肤进行操作。利用手掌环握方式时，应同时抓取一部分垫料。动物标识笼卡标识内容应醒目、清晰。应包括课题组、研究人员/联系人姓名、联系方式、实验方案编号、品系、性别、动物编号等；特殊需求应使用不同于普通笼卡（如颜色）的卡片清晰标明需求，如病鼠、孕鼠、分笼、特殊饲料、限制饮水等；小鼠标识剪耳法或耳标法：小鼠无需麻醉；刺身法：小鼠必须实施麻醉。5如何减少动物紧张情绪？应尽量每天同一时间进行维护工作；尽量减少人员进出；工作时保持安静；使用nestlets。如何辨别动物是否不适？小鼠有自残行为；好斗—触碰时是否试图撕咬？焦虑—小鼠是否表现出不安？外观—小鼠的毛发应整齐，有光泽。小鼠的毛发是否散乱、无光泽、油腻，或脱毛？协调性—小鼠是否表现出摇晃、不能保持平衡？体重/脱水—饲料摄取量和/或饮水量是否有明显改变？情绪—小鼠是否表现出昏睡或对外界漠不关心？牙齿—小鼠的牙齿是否排列整齐？运动—小鼠是否移动缓慢或无停歇地移动？身体姿态—小鼠是否表现出弓背？排泄物—是否有异常（量）的尿液和/或粪便？常见疾病和预防预防严格按照标准操作程序进行操作保证只在超净台中打开笼具专人负责，避免各房间间交叉污染尽可能减少不必要的操作日常病理检测常见疾病一、病毒性疾病（一）小鼠肝炎病毒（Mousehepatitisvirus,MHV）1.属冠状病毒。自然宿主为小鼠，也易感染免疫缺陷小鼠。发病时无明显症状或表现出昏睡、毛发粗刚、厌食，有时有神经系统症状。通过飞沫或经口传播。2.感染小鼠肝炎病毒将导致免疫系统异常，抑制淋巴细胞增殖、抑制小肠淋巴组织Peyer’sPatch中B细胞免疫球蛋白的分泌，从而可能影响相关的研究。3.控制方法：A.清除受感染小鼠；B.对所有新生小鼠实施安乐死，暂停繁殖，6成年小鼠应至少隔离6-8周；C.如确有必要，应实施剖腹产以防止感染。（二）仙台病毒（Sendaivirus）1.属RNA病毒中的副黏液病毒科。可导致小鼠最常见的呼吸器官疾病，通常呈潜伏性感染，不产生明显的临床症状。2.感染途径：由呼吸道进入体内，在上呼吸道复制后进入气管及小支气管中。仔鼠或某些品系小鼠，如DBA/2感染仙台病毒常发生肺炎。3.临床症状：皮毛粗刚、呼吸困难和气管啰音。4.预防及控制：避免让感染动物进入动物房内，定期对供应商作健康质量监控，隔离。（三）小鼠肺炎病毒（Pneumoniavirusofmice,PVM）1.自然宿主：小鼠、大鼠和仓鼠。属于副黏液病毒属的肺病毒。小鼠常见的感染（感染率50%），通常无临床症状。2.病变：引起慢性鼻炎，间质性肺炎。3.控制：使用剖腹产及良好的屏障系统。（四）鼠痘Mousepox（缺肢畸形ectromelia病毒）1.属正黏液病毒属。宿主为小鼠。鼠痘是非常严重的疾病，具高度传染性及死亡率。传染途径：直接接触和媒介物：如小鼠组织，小鼠血清，转移性小鼠肿瘤。2.有抵抗力的品系（不明显的感染）：C57BL/6和C57BL/10；易感染的品系（表现明显临床症状）：BALB/c、DBA/2、CBA和C3H。3.临床症状：可呈现急性、慢性或隐性等型。包括面部水肿、皮下丘疹、脚、面部、耳和尾巴皮肤糜烂，或者是四肢和尾巴坏死腐脱。急性会导致小鼠死亡。4.控制：(1)对引进的小鼠和小鼠组织作隔离及检测。(2)消除感染的小鼠和组织，以及消除房舍内的污染。(3)停止繁殖，怀孕期间子宫内的感染，导致剖腹产可能无法完全避免污染。（五）乳鼠流行性腹泻（EpidemicDiarrheaofMice，EDIM）1.EDIM病毒属呼肠孤病毒科轮状病毒属，为双链RNA病毒,其外壳上具有区别于其它轮状病毒的特异性抗原。EDIM病毒对热敏感，pH3～9条件下稳定，无血凝素，对乙醚、氯仿、脱氧胆酸盐和胰酶有抵抗力。EDIM病毒不能在鸡胚中生长，也不能在体外细胞培养中传代。2.小鼠是EDIM病毒的唯一自然宿主，小鼠对本病的易感程度随日龄的增长及免疫力的提高而下降，一般15日龄内的小鼠最为易感。C3H对其敏感，而C57BL7则具有相对的抵抗力。EDIM通过消化道和呼吸道传播，是一种高度接触性传染病。3.EDIM主要高发于第一胎15日龄以内的乳鼠。乳鼠感染后早期腹泻、脱水、消化不良、皮肤皱缩、肩背皮肤上有干燥白色痂皮，有时皮肤发绀，透过腹壁可看到胃内充满白色乳汁，身体粘附黄色稀便。后期粪便变干而阻塞肠道，可能引起直肠嵌塞而死亡。乳鼠可正常吃奶，但因消化不良而积于胃中。症状轻微时2～5天可自行康复。成年小鼠呈隐性感染并不断向外排毒。4.预防采用剖腹产技术可建立无EDIM病毒的种子群。饲养室应安装高效空气过滤装置，进入饲养室的垫料、饲料、用具等应彻底消毒。一旦发生本病，应立即淘汰整个鼠群，焚烧尸体。饲养室应彻底消毒后重新引种建群。（六）淋巴球性脑膜脉胳膜炎病毒（LymphocyticChoriomeningitisVirus,LCMV)1.淋巴球性脉络丛脑膜炎病毒属沙状病毒科（Arenaviridae），为单链RNA病毒。2.病毒会由尿液、唾液及乳汁中排出。被病毒感染的动物所污染的垫料及其他的病媒（如寄生虫等）为潜在传染源。3.小鼠感染多为隐性无症状，发病小鼠出现伴随大量淋巴细胞浸润的脑脊髓膜炎和肝炎。4.感染LCMV会干扰实验结果：(1)造成生化物质的污染（肿瘤，细胞系，病毒种株－白血病和狂犬病）；(2)造成小鼠体液免疫和细胞免疫下降；(3)在感染初期诱发天然免疫细胞的活性；(4)增加其它病原体的感染力。5.预防：(1)针对新进无症状动物以及内部具感染风险的动物族群进行周期性的血清学监测。(2)尽量避免过密饲养，给予良好的饲养环境。（七）其它小鼠也容易受到其他病毒感染，如K病毒、泰氏脑脊髓炎病毒、小鼠腺病毒等。这些病毒在健康小鼠体内呈隐性感染，无明显临床症状。但是这些病毒仍会对研究造成影响。一般应做定期血清学ELISA检验或病理学检查。二、霉浆菌性和细菌性疾病（一）霉浆菌症（Murinemycoplasmosis）1.又称慢性鼠类肺炎。为革兰氏阴性菌