动物实验

实验一小白鼠不同用药方式及采血方式和内脏结构的观察一、实验目的1.了解小白鼠的特点、品种及应用。2.学习暴露和熟悉小白鼠内脏的结构及取材的方法。3.学习和掌握小白鼠不同的用药方式:灌胃，腹腔注射、皮下注射、肌肉注射，尾静脉注射。4.学习和掌握小白鼠不同采血方法及血液指标的测定。眼内眦静脉采血，尾尖采血，腹主动脉采血，断头取血，股动脉取血，摘眼球取血。二、试剂与器材•器材：小鼠灌胃针、4＃针头、4＃头皮针、1ml注射器、组织剪、组织镊、眼科镊、棉球、大剪刀•试剂：N.S、酒精特点小白鼠应用鉴别品种简介三、实验内容给药采血处死编号标记捉持与固定（一）捉持与固定双手法：用右手提起小鼠尾部，放在实验台上，当其向前爬行时，左手抓住两耳及头颈部皮肤，再置小鼠于左手心，拉直四肢并用手指夹住肢体固定。右手可行注射或其它操作。★1单手法：难度较大，但速度快。左拇指和食指抓住尾巴，用小指、无名指和手掌压住鼠尾根部，再移动拇指、食指及中指抓住头部皮肤而固定在手掌中。（二）给药方法灌胃ig小鼠固定后，使腹部朝上，颈部拉直，右手用带灌胃针头的注射器吸取药液（或事先将药液吸好），将针头从口交插入口腔，再从舌背进沿上腭进入食道。若遇阻力，应退出后再插，切不可用力过猛，防止损伤或误入气管导致动物死亡。灌胃量一般不超过0.25ml/10g。腹腔注射法ip抓鼠方法同上，右手持注射器（5～6号针头），从耻骨联合上一侧向头端以30度角刺入腹腔（应避开膀胱）。可先刺入皮下2～3mm，再刺入腹腔，以防药液外漏。针头刺入部位不宜太高太深，以免刺破内脏。注射量一般为0.1～0.25ml/10g。★2皮下注射法sc：一般两人合作。一人左手抓住小鼠头部皮肤，右手拉住鼠尾；另一人左手提高背部皮肤，右手持住注射器（针头号同上），将针头刺入提起的皮下。若一人操作，左手小指和手掌夹住鼠尾，拇指和食指提起背部皮肤，右手持注射器给药。一般用量为0.05～0.25ml/10g。★3肌肉注射法：两人合作时，一人抓鼠方法同上，另一人左手拉直一侧后肢，右手持注射器，注射部位多选后腿上部外侧（针头号同上）。如一人操作，抓鼠方法类似腹腔注射，只是药液注射在肌肉内。每腿的注射量不宜超过0.1ml。★4尾静脉注射法iv：将小鼠置于待置的固定筒内，使鼠尾外露，并用酒精或二甲苯棉球涂擦，或插入40℃～50℃温水中浸泡片刻，使尾部血管扩张。左手拉尾，选择扩张最明显的血管；右手持注射器（4～5号针头），将针头刺入血管，缓慢给药。如推注有阻力而且局部变白，说明针头不在血管内，应重新插入。穿刺时宜从近为尖部1/3处静脉开始，以便重复向上移位注射。一般用药量为0.1～0.2ml/10g，不宜超过0.5ml/10g。★5×√毒理学认为,同种动物接触外源化学物不同给药途径的吸收速度快慢顺序是:静脉注射腹腔注射皮下注射肌肉注射灌胃•（三）采血方法采血方法1.割（剪）尾采血当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾。将尾部毛剪去后消毒，然后浸在45℃左右的温水中数分钟，使尾部血管充盈。再将尾擦干，用锐器（(刀或剪刀）割去尾尖0.3～0.5cm，让血液自由滴入盛器或用血红蛋白吸管吸取，采血结束，伤口消毒并压迫止血。也可在尾部作一横切口，割破尾动脉或静脉，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.3～0.5ml。2.鼠尾刺血法大鼠用血量不多时（仅做白细胞计数或血红蛋白检查），可采用本法。先将鼠尾用温水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7号或8号注射针头，刺入鼠尾静脉，拔出针头时即有血滴出，一次可采集10～50mm3。如果长期反复取血，应先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐渐向近心端穿刺。3.断头取血采血者的左手拇指和食指以背部较紧地握住大（小）鼠的颈部皮肤，并作动物头朝下倾的姿势。右手用剪刀猛剪鼠颈，约1/2～4/5的颈部前剪断，让血自由滴入盛器。小鼠可采用约0.8～1.2ml；大鼠约5～10ml。4.眼眶静脉丛采血采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部（大鼠采血需带上纱手套），应防止动物窒息。当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈（3-4cm）硬质玻璃滴管（毛细管内径0.5-1.0mm），使采血器与鼠面成45℃的夹角，由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。刺入深度，小鼠约2-3mm，大鼠约4-5mm。当感到有阻力时即停止推进，同时，将针退出约0.1-0.5mm，边退边抽。若穿刺适当血液能自然流入毛细管中，当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。若技术熟练，用本法短期内可重复采血均无多大困难。左右两眼轮换更好。体重20-25g的小鼠每次可采血0.2-0.3ml；体重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可适用于某些生物化学项目的检验。如只进行一次取血，可采用摘眼球法，右手取一眼科弯镊，在鼠右或左侧眼球根部将眼球摘去，并将鼠倒置；头向下，抽取血液。★65.心脏采血鼠类的心脏较小，且心率较快，心脏采血比较困难，故少用。将动物仰卧置于台面，下针的位置位于剑状软骨突下方，约与腹部呈15至30度角向胸腔缓缓推入，一发现有血液流入针筒，即固定针头开始缓慢抽血。若做开胸一次死亡采血，先将动物作深麻醉，打开胸腔，暴露心脏，用针头刺入右心室，吸取血液。小鼠约0.5～0.6ml；大鼠约0.8～1.2ml。6.颈动静脉采血先将动物仰位固定，切开颈部皮肤，分离皮下结缔组织，使颈静脉充分暴露，可用注射器吸出血液。在气管两侧分离出颈动脉，离心端结扎，向心端剪口将血滴入试管内。7.腹主动脉采血最好先将动物麻醉，仰卧固定在手术架上，从腹正中线皮肤切开腹腔，使腹主动脉清楚暴露。用注射器吸出血液，防止溶血。或用无齿镊子剥离结缔组织，夹住动脉近心端，用尖头手术剪刀，剪断动脉，使血液喷入盛器。8.股动（静）脉采血先由助手握住动物，采血者左手拉直动物下肢，使静脉充盈。或者以搏动为指标，右手用注射器刺入血管。体重15～20g小鼠采血约0.2～0.8ml，大鼠约0.4～0.6ml。（四）编号标记方法动物在实验前常常需要作适当的分组，那么就要将其标记使各组加以区别。标记的方法很多，良好的标记方法应满足标号清晰、耐久、简便、适用的要求。常用的标记法有染色、烙印、号牌等方法。一、颜料涂染皮毛标记编号：这种标记方法在实验室最常使用，也很方便。使用的颜料一般用3-5%苦味酸溶液（黄色），标记时用毛笔或棉签蘸取上述溶液，在动物体的不同部位涂上斑点，以示不同号码。编号的原则是：先左后右，从上到下。另外，3-5％苦味酸溶液（黄），2％硝酸银溶液（咖），0.5％中性品红溶液（红）。鼠尾标记编号：用苦味酸溶液涂鼠尾部。二、烙印法用刺数钳在动物耳上刺上号码，然后用棉签蘸着溶在酒精中的黑墨在刺号上加以涂抹，烙印前最好对烙印部位预先用酒精消毒。三、号牌法用金属制的牌号固定于实验动物的耳上，大动物可系于颈上。（五）处死方法脊柱脱臼法：用左手拇指和食指捏住小白鼠头的后部，并用力下压，右手抓住鼠尾，用力向后上方拉，将脊髓与脑髓拉断，即可使颈椎脱臼，瞬间死亡断头法：实验者戴上棉纱手套，用右手握住大鼠头部，左手握住背部，露出颈部，助手用剪刀在鼠颈部将鼠头剪掉。小鼠处死法相同。击打法：右手抓住鼠尾，提起，用力摔击其头部，鼠痉挛后立即死亡。用小木锤用力击打鼠头部也可致死。急性大失血法：可采用鼠眼眶动脉和静脉急性大量失血方法使鼠立即死亡。尾静脉空气注射法：尾iv约0.4ml空气