动物实验基本操作技术

动物实验基本操作技术实验动物的捉拿和固定方法实验动物的给药方法实验动物的麻醉方法实验动物的编号方法实验动物的去毛方法实验动物的取血方法实验动物的处死方法一、实验动物的捉拿和固定方法1.小鼠捉拿时先用右手将鼠尾抓住提起，放在较粗糙的台面或鼠笼上，在其向前爬行时，右手向后拉尾，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和头颈部皮肤，将其固定于左手手心中，拉直四肢并用左手无名指压紧尾和后肢，右手即可作注射或其他实验操作。取尾血及尾静脉注射时，可将小鼠固定在金属或木制的固定器上。2.家兔•一手抓住兔颈部的被毛与皮肤，另一手托其臀部或腹部，使其躯干的重量大部分集中在手上。兔手术固定台实验动物的编号方法1.染色法2.耳缘剪孔法3.挂牌法4.烙印法1、染色法：浅色动物3～5％苦味酸溶液（黄色）0.5%中性红或碱性品红溶液（红色）2％硝酸银溶液（咖啡色，涂后光照10分钟）煤焦油乙醇溶液（黑色）甲紫（龙胆紫）溶液（紫色）小鼠的编号方法•编号原则：先左后右，从上到下2、耳缘剪孔法（穿耳孔法）：小型动物3、挂牌法：耳标签、项圈、腿圈，中、大型动物4、烙印法：中、大型动物二、实验动物的给药方法1.注射法给药：家兔耳缘静脉注射大、小鼠尾静脉注射2.摄入法给药：家兔、大鼠、小鼠灌胃法3.涂布法给药摄入法给药•自动口服给药•强制灌胃给药：大鼠小鼠家兔•经直肠给药小鼠、大鼠灌胃法器械：灌胃器由注射器和特殊的灌胃针构成。小鼠灌胃针长4～5cm直径1mm大鼠灌胃针长6～8cm直径1.2mm小鼠灌胃法•按正确方法用左手抓取和固定动物。使腹部朝上，颈部拉直。•固定后，右手持持接灌胃针的注射器吸取药液（或事先将药液吸好），将针头从口角插入口腔内，然后用灌胃针头压其头部，使口腔与食管成一直线，再将灌胃针头沿上腭壁轻轻进入，转动针头刺激动物吞咽，然后沿咽后壁慢慢插入食道。若动物挣扎厉害，应退出后灌胃针，待动物安静后重新插入。切不可强行插入，以免损伤食道或误入气管导致动物死亡。•当感觉有落空感时表明灌胃针可能进入胃内，向外抽动注射器活塞，感觉有负压说明灌胃针未插入气管，此时可将药液灌入。•成年小鼠插管深度一般是：3cm•小鼠灌胃量：•0.1～0.25ml/10g体重大鼠灌胃法•成年大鼠插管深度一般是：5cm•大鼠灌胃量：1～2ml/100g体重兔灌胃法器械：•灌胃管（特制胃管或导尿管）•开口器（木质纺锤状）兔灌胃法操作方法：1.固定：动物取直立或平卧体位，固定动物头部。直立位需2人合作，一人取坐位，将兔的躯体和下肢夹在两腿之间，左手紧握双耳固定头部，右手抓住前肢，将兔固定于竖立体位。另一人将开口器横放于兔口中，让动物咬住开口器，即可开始插入灌胃管。兔灌胃法操作方法：2.插管：将灌胃管由开口器的中央孔插入，沿上颚壁推进约15cm。插管过程中可将灌胃管的另一端放于一杯清水中，若连续有气泡，说明插入呼吸道，应立即拔出灌胃管，重新操作；若无气泡，说明没有插入气管，即可开始注药。沿上颚壁推进约15cm检查插入部位兔灌胃法•操作方法：3.给药：灌注药后可用少量清水将灌胃管里的药全部冲入胃内，以保证灌入药的剂量准确。灌胃完毕后，先退出胃管，后退出开口器。兔灌胃法关键词：固定，插入（沿上颚壁），检查家兔耳缘静脉注射•将动物固定于实验台上，剪去耳缘部位的被毛，用乙醇轻轻擦拭，耳缘静脉即清晰可见。用左手食指和中指夹住静脉近心端，拇指和小指夹住耳缘部分，以左手无名指和小指放在耳下作垫，待静脉充盈后，右手持注射器使针头尽量由静脉远心端刺入，顺血管方向平行、向心端刺入约1cm。•注射完毕抽出针头，用棉球压迫注射部位数分钟，以免出血。三、实验动物的麻醉方法全身麻醉法：吸入法，注射法局部麻醉法：浸润麻醉，表面麻醉（一）全身麻醉法1、吸入法麻醉药：乙醚氯仿三氟乙烷2、注射法麻醉药：巴比妥类药物氯胺酮乌拉坦水合氯醛（一）全身麻醉法（二）局部麻醉法1%盐酸普鲁卡因局部浸润麻醉0.02～2％盐酸可卡因表面麻醉麻醉药物应用原则：依据动物体重计算麻醉药物的剂量；依据动物生命体征变化控制给药速度；掌握宁少勿多、分阶段给药的方式。针对不同的动物，选择不同的麻醉药物、实施不同的麻醉方法。麻醉具体操作：家兔全身麻醉麻醉剂：1.5%戊巴比妥钠，2ml/kg前1/2快速推入，使动物能顺利、快速地渡过兴奋期；后1/2速度宜慢，且边注射边注意观察动物的生命体征变化，当确定已达到麻醉效果时，即停止给药，不必急于将剩余的麻醉药物全部推入。给药方法：耳缘静脉注射麻醉成功标志角膜反射迟钝或消失肢体肌肉松弛疼痛反射消失呼吸变深变慢机能实验学常用手术方法一、常用手术器械二、常用手术插管技术气管插管术颈动脉插管术颈静脉插管术动物实验常用手术器械眼科剪眼科镊组织镊止血钳组织剪粗剪刀眼科剪眼科镊组织镊止血钳组织剪粗剪刀粗剪用于蛙类实验中的剪骨、肌肉和皮肤等粗硬组织以及家兔等实验动物的剪毛。剪毛时，剪毛剪自然落下逆毛方向一次次将毛剪下即可，加力下压或一手提起被毛，均易剪破皮肤。剪下的毛应集中放入加有清水的污物盒内，避免到处飞扬。手术剪用于剪线和剪开、分离组织。有直、弯、尖头、圆头、大、小之分，根据不同用途选用。手术操作中用于沿组织间隙进行分离和剪断组织者称组织剪，一般为弯形，尖端较钝圆；用于剪断缝扎线、引流物或敷料等用品者称剪线剪，为直形。眼科剪主要用于剪血管或神经等柔软组织，眼科剪也有直头与弯头之分，正确的执剪姿势与手术剪相同，即用拇指与无名指持剪，食指置于手术剪上方。手术刀由刀片和刀柄组成，可分为大、中、小号不同类型。大号——切开皮肤；中号——切割脏器组织；小号——切割特殊部位。安装：先用持针器（或直型止血钳）夹住刀片，左手握住刀柄，按刀片上的空隙对准刀柄上的槽隙，顺势推入即可。持弓式持弓式手术刀握持方法执笔式：即以持笔的手法握住刀柄，适用于小范围内的组织切开，随意性强，可作垂直或水平切割。持弓式：右手中指、无名指按压在手术刀柄的外侧缘，拇指放在刀柄内侧缘，食指按压在刀片后1／3处。适用于切开皮肤。组织镊组织镊和眼科镊。组织镊—钳夹组织，分离组织和筋膜。眼科镊—分离血管。使用手法：以食指、中指放于器械的外侧缘，拇指放于内侧缘，集3指的力量实施操作动作，而且适用于左右手的同时操作。止血钳止血和分离组织。使用方法：以拇指、中指（或无名指）分别套人止血钳的套扣内，控制止血钳展开的力度，以食指放在止血钳的关节部位，控制止血钳的方向和钳夹组织部位的准确性。切忌左右手分别抓住止血钳的套扣部位，用两手的合力进行止血或分离组织。缝合针有圆针和角针两种，圆针用于缝合组织结构；角针边缘锋利，除具有穿刺功能外，还具有切割的作用；缝合针需配合持针器同时使用。探针包括金属探针和玻璃分针；用于对精细部位的分离和游离等操作。有时，在实施血管插管技术时，切开血管壁后往往借助于探针先将切口挑起，然后插入导管。支架用于蛙类及哺乳类手术中换能器及刺激电极等的固定与位置调节。由底座及支架杆构成，支架上附有万向节，可在各个方向上调节。哺乳类手术器械气管插管急性动物实验时插入气管，以保证呼吸道畅通，一端接气鼓或呼吸换能器可记录呼吸运动。分为金属插管和玻璃插管。哺乳类手术器械动脉夹动脉夹分大、中、小三种型号及直、弯两种，用于夹持动脉，暂时阻断动脉血流。使用时动脉夹的尖端套有塑料管，以防止夹持动脉时对血管造成损伤。哺乳类手术器械动脉插管用于在急性动物实验时插入动脉。可用金属、玻璃以及塑料等不同材料制成，常用细塑料管自行拉制而成。在哺乳类动物实验中，插管一端插入动脉，另一端接压力换能器以记录血压，插管内充满肝素以防止插管内血液凝固，插管腔内不可有气泡，以免影响结果。哺乳类手术器械三通管用于改变实验中液体流动方向，以便输液、给药或描记血压。可随意将三个通道中的任何两个通道口相通，另一个不通；也可使三个通道同时都通或都不通。哺乳动物手术器材清单金属用品玻璃用品消耗品手术剪1把气管插管1个纱布眼科剪1把动脉插管1根棉签血管钳4把尿道插管1根丝线手术镊1把玻璃分针1根动脉夹1个注射器1支（1ml/5ml）手术刀1把三通管一个动物实验常用插管技术气管插管术颈动脉插管术颈静脉插管术导尿管插管术插管技术的基本步骤1.动物称重、麻醉、固定。2.插管部位皮肤去毛、备皮。3.皮肤切开。4.皮下组织结构的分离。5.目标器官或组织结构的游离。6.导管的插入或固定。家兔颈部神经和血管的解剖位置迷走神经交感神经减压神经气管插管术1、麻醉固定、颈部皮肤去毛、备皮2、在颈前区正中作一约5-7cm的切口3、钝性分离皮下组织、肌肉，游离出气管，穿线备用。4、在甲状软骨下方第3-4个环状软骨上作一倒“T”形切口，插入“Y”形气管插管，并用线固定好。颈动脉插管技术1、颈正中作一约5-7cm的切口2、钝性分离皮下筋膜3、分离一侧颈总动脉，穿双线备用。4、结扎远心端，在距结扎线约2-3cm处用动脉夹夹闭颈总动脉近心端。5、在靠近结扎线处用眼科剪剪一“v”形切口，切口大小约为动脉口径的1/3~1/2。6、将压力换能器与动脉插管连接好并充满肝素，向近心端插入动脉插管，用线结扎牢固。三通的使用：进入BL－410/420系统。选择“实验项目”→选择“循环实验”→“兔动脉血压调节”实验模块；7、打开换能器开关，观察并记录动脉血压。或选择“输入信号”→选择“通道”→“压力”→点击“开始”实验按钮，即可在屏幕上观察到正常的血压曲线。动脉插管注意事项动脉插管和血压换能器内注满肝素生理盐水以排气抗凝。压力换能器与动物心脏等高。动脉插管与颈总动脉呈一条直线，方向一致。掌握好三通管的方向。结扎固定牢固。颈静脉插管技术１、由颈正中剪开一约６cm的口。2、钝性分离皮下筋膜。3、辨认、分离一侧颈外静脉。4、穿双线，远心端结扎，近心端用动脉夹夹闭。5、用眼科剪剪一约静脉口径1/3~1/2的小口，向近心端插入静脉插管。6、结扎、固定静脉插管颈静脉插管术尿道插管术•尿道插管是最常用的尿液收集办法，可用于反映较长时间内尿量变化的实验。常用于雄性家兔。•将动物固定于手术台上（可轻度麻醉）。取一根粗细合适的导尿管，在其头端约12cm涂上液体石蜡减小摩擦。将导尿管从尿道口缓缓插入，当导尿管插入膀胱后，即可见尿液从管中流出，用线或胶布固定。