实验3 化脓性球菌的分离鉴定

化脓性球菌的分离鉴定微生物学实验三微生物学教研室郭棵棵THIRDMILITARYMEDICALUNIVERSITYCOLLEGEOFBASICMEDICALSCIENCESTHIRDMILITARYMEDICALUNIVERSITYCOLLEGEOFBASICMEDICALSCIENCESTHIRDMILITARYMEDICALUNIVERSITYCOLLEGEOFBASICMEDICALSCIENCESTHIRDMILITARYMEDICALUNIVERSITYCOLLEGEOFBASICMEDICALSCIENCESTHIRDMILITARYMEDICALUNIVERSITYCOLLEGEOFBASICMEDICALSCIENCESTHIRDMILITARYMEDICALUNIVERSITYCOLLEGEOFBASICMEDICALSCIENCES（综合性试验）录像：消毒灭菌操作：1.紫外线杀菌实验（普通平板1块/3人）2.抗生素敏感试验（普通平板1块/3人）3.化脓性球菌分离鉴定（一）——接种血平板材料：1.抗生素纸片（青霉素、链霉素、庆大霉素、黄连素1套/6人）2.大肠杆菌、敏感金葡菌（1支/6人）3.脓汁标本（乙型链球菌、致病性金葡菌各1支/6人）4.普通平板、血平板、黑纸片等实验内容了解：各种消毒灭菌的方法及应用无菌操作技术掌握：1.化脓性球菌分离鉴定的方法和步骤2.紫外线杀菌的原理3.抗生素敏感实验的方法[教学目标][重点难点]重点：化脓性球菌分离鉴定——接种血平板难点：化脓性球菌分离鉴定——接种血平板消毒与灭菌概念：消毒(disinfection):杀死物体上病原微生物，并不一定能杀死含芽孢的细菌和非病原微生物。用以消毒的药品称为消毒剂。灭菌(sterilization):杀灭物体上所有微生物的方法。防腐(antisepsis):防止或抑制细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时称为消毒剂，低浓度时为防腐剂。无菌(asepsis):不含活菌的意思。防止细菌进入人体或其他物品的操作技术，称无菌操作。热力灭菌法湿热灭菌法：巴氏消毒法、流动蒸汽消毒法、煮沸法、间歇蒸汽灭菌法、高压蒸汽灭菌法干热灭菌法：焚烧、烧灼、干烤（170℃/2h）电磁波辐射杀菌法紫外线电离辐射滤过除菌法超声波杀菌干燥物理消毒灭菌法：化学消毒灭菌法：使用消毒剂原理：1.使菌体蛋白质变性或凝固：酚类、醇类、重金属盐等。如石炭酸、来苏、洗必泰2.干扰细菌的酶系统和代谢：氧化剂，如过氧化氢，高锰酸钾，过氧乙酸等3.损伤细菌细胞膜：表面活性剂，如新洁尔灭二、抗生素敏感试验随着抗生素的广泛应用，耐药变异菌株日益增加（尤其是金葡、肠道杆菌），给医疗工作带来了不少的困难。为正确使用抗生素，临床上常在分离致病细菌的同时做药物敏感试验，以了解该细菌对常用各种抗生素的敏感性。药敏试验的常用方法：纸片法操作：贴纸片敏感金葡结果分析：如果细菌对药物敏感，则在药片周围有抑菌圈形成，敏感度越高抑菌圈直径越大：20mm：极度敏感15-20mm：中度敏感10-15mm：轻度敏感10mm:不敏感无抑菌圈：耐药抑菌圈直径化脓性炎症是临床上常见病，除了病原性球菌外，其他微生物也可以引起化脓性感染。常见的标本有脓汁、咽拭子、痰、血液、脑脊液等。本次实验是以脓汁标本进行病原性球菌的分离鉴定三、化脓性球菌分离鉴定（一）化脓性球菌分离鉴定步骤脓汁血平板菌落葡萄状排列链状排列血浆凝固酶试验甘露醇发酵试验血清肉汤管接种划线法37℃24h革兰染色成对排列操作：1.接种血平板（1块/人）三线法接种分离单个菌落1.临床上耐药性菌株感染，如何确定其治疗用药？2.抗生素耐药性实验的结果是如何判定？思考题高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌法的杀菌效果最好，运用广泛。压力为15磅/寸2，30分钟可杀死一切芽胞，达到灭菌的目的。（温度可达121℃)优点：1.能够达到较高的温度。2.穿透力强。3.蒸气遇冷物凝成水时可放出汽化热，迅速提高冷物的温度。4.高压蒸气不会使物品过分潮湿，避免了水煮的缺点。1.高压的整个过程必须有专人守侯，并随时排气以防压力表显示错误及其它原因引起高压锅内压力剧增而导致爆炸。2.高压完毕需等待高压锅内压力降低至零时方可打开取物。注意事项：波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用，其中以265-266nm最强，这与DNA的吸收光谱范围一致。紫外线主要作用于DNA，使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成双聚体，从而改变DNA的分子构型，干扰DNA的复制与转录，导致细菌的死亡或变异。紫外线杀菌原理:1.穿透力弱，一般玻璃、纸、布、尘埃、水蒸气均能阻挡。2.适用于空气、物体表面的消毒。3.有效距离在2米左右（紫外灯的安装）4.紫外线对人的眼睛、皮肤有损害作用。注意事项:操作步骤：1.取普通平板（1块/3人）2.取大肠杆菌斜面培养物在平板上密集划线3.用灭菌镊子取无菌黑纸片夹放到平板正中4.将平板放到紫外线下照射30分钟5.放37℃孵箱培养6.观察结果7.注意操作中始终保持无菌操作划线、盖纸、照射紫外线杀菌实验操作电离辐射β射线和γ射线；产生自由基或毒性基团，干扰DNA合成,导致酶系统功能紊乱等;γ射线有较高穿透力；常用于一次性医用塑料制品的消毒；也用于食品消毒，不破坏其营养成分。滤过除菌：物理阻留；用于不耐高温的血清、抗生素、药液等的除菌。