脂质体

脂质体制备技术概述1、组成与结构理化性质及其特点2、口服肠溶胰岛素脂质体3、紫杉醇长循环脂质体4、脂质体的现状与未来一、概述脂质体（liposomes,或称类脂小球）是一种类似生物膜结构的双分子层微小囊泡。分类：1、单室脂质体：有一层类脂质双分子层构成2、多室脂质体：由基层脂质双分子层将被包含的水溶性药物的水膜隔开形成不均匀的聚合体结构与组成结构：双分子层（与胶束区别）组成：磷脂及附加剂磷脂分子形成脂质体时，两条疏水链指向内部，亲水基在膜的内外表面上。构成的囊泡将水相介质与外界隔离。特点载药脂质体特点：1、靶向性2、缓释性3、降低药物毒性4、提高药物稳定性制备脂质体的材料磷脂类：卵磷脂、脑磷脂、大豆磷脂胆固醇：调节脂质体的膜流动性脂质体的修饰长循坏脂质体免疫脂质体糖基脂质体温度敏感脂质体PH敏感脂质体二、紫杉醇长循环脂质体（一）修饰以聚乙二醇（PEG）作为修饰材料。PEG的表面被柔顺而亲水的PEG链部分覆盖，极性PEG基增强了脂质体的亲水性，减少血浆蛋白与脂质体的相互作用，降低被巨噬细胞吞噬的可能，延长在循环系统的滞留时间，因而有利于肝脾以外的组织或器官的靶向作用。紫杉醇长循环脂质体到达作用部位后，发挥一系列的抗肿瘤作用。其作用机制主要有以下三种：1细胞毒性作用：紫杉醇属于有丝分裂抑制剂,它可以诱导和促进微管蛋白聚合,抑制微管解聚。正常微管在4℃低温或Ca存在下可发生解聚。由于微管过于稳定,从而抑制纺锤体的形成,使染色体不能向两极移动,使肿瘤细胞阻滞于G2/M期,最终阻止有丝分裂的完成,因而对多种肿瘤具有较强的细胞毒作用。（二）作用机制2诱导细胞凋亡作用凋亡凋亡是正常细胞在有关基因控制下的程序性死亡方式,肿瘤细胞正是失去了这种正常控制而呈现无限制的增殖现象。紫杉醇能下调胞浆IkB-a水平,激活NF-kB并促进其转移至细胞核参与调控下游基因。研究发现,紫杉醇可激活或调节多种与凋亡相关基因或蛋白,如Bcl家族、P53、P21、Fas/Fas配体及半胱天冬酶(Caspase)家族等,可诱导细胞出现典型的凋亡形态学改变。目前尚不清楚紫杉醇诱导细胞凋亡的信号传导途径以及有丝分裂阻滞和凋亡之间的关系。但研究凋亡的重点已转移到凋亡过程中一系列细胞内具有关键作用的蛋白质如何被特异性酶降解。凋亡发生机制中关键环节之一是Caspase激活,已有研究表明在紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡的过程中Caspase-3和Caspase-8起着重要作用。紫杉醇在体外可以抑制人血管内皮细胞的增殖,在体内可以抑制鸡胚尿囊膜血管的新生,其抑制作用在3.5～14nmol/L的浓度下获得并呈剂量依赖性,当紫杉醇的浓度低于1nmol/L时,对血管和内皮细胞无明显影响。同时,在试验所选定的浓度下,紫杉醇在体外未能抑制肿瘤细胞的增殖;而在CAM体内试验中,以CAM胚胎10g计算,即使在最高浓度14nmol/L下,只等效于0.24μg/kg,相当于70kg成人16.8μg紫杉醇的剂量,远远低于常规化疗剂量,提示紫杉醇对新生肿瘤血管的抑制机制与其细胞毒作用无关,是在非细胞毒浓度下表现出的特点。3抗血管生成作用(1)由于含有亲水基团（PEG）而能阻止血液中许多不同组分特别是调理素与其结合，从而降低与单核吞噬细胞系统的亲和力，可在循环系统中稳定存在并使半衰期延长，增加肿瘤组织对它的摄取。(2)由于癌增长部位及感染、炎症部位病变引起毛细血管的通透性增加，含有紫杉醇的长循环脂质体能增加药物在这些部位的聚集量.(3)由于紫杉醇长循环脂质体的缓释直接作用于病变部位，增强了治疗效果。此种增加药物的治疗指数的机制称为“被动靶向”。紫杉醇长循环脂质体的体内作用特点力扑素是国际首次上市的脂质体剂型的紫杉醇.与其它紫杉醇产品相比，力扑素具有以下优势：1、避免了紫杉醇制剂因溶媒引发的超过敏反应；2、显著降低外周循环毒性反应；3、明显提高机体对紫杉醇的耐受性；4、显示储库效应和被动靶向效应；力扑素能明显提高患者对紫杉醇的耐受性，小鼠静脉给药的LD50比紫杉醇注射液大一倍.（紫杉醇注射液为33mg/kg，紫杉醇脂质体为69.8mg/kg.)表明其耐受性明显提高，为临床用药加大剂量、提高疗效提供了空间。动物药动学实验表明：（三）、制备紫杉醇长循环脂质体的材料紫杉醇（主药）磷脂（脂质体的基础物质）胆固醇（脂质体“流动性缓冲剂”）PEG（四）、制备方法薄膜分散法将磷脂、胆固醇等脂质及紫杉醇溶于氯仿中，然后将氯仿溶液在烧瓶中旋转蒸发，使其在内壁上形成一薄膜；将磷酸盐缓冲液加入烧瓶中不断搅拌，即得脂质体。目前，美国Enˉdorex公司研制的口服胰岛素脂质体（Orasome），已进入临床试验阶段三、肠溶胰岛素脂质体（二）脂质体通过胞吞作用进入小肠粘膜细胞小肠粘膜细胞小肠特点：胰岛素是大分子药物，小肠无法直接吸收。而脂质体是一种类似于生物膜的磷脂双分子层的载体，它可以和小肠粘膜细胞膜通过胞饮和胞吞作用而融合，使得包裹在脂质体内部的大分子药物胰岛素被小肠粘膜细胞吸收，再通过胞吐作用释放到血液中，发挥降血糖的作用。脂质体包裹胰岛素后，能防止酶的降解作用!此外，脂质体通过与肠道细胞膜融合或者表面吸附，增加了胰岛素进入细胞的途径，有助于胰岛素的稳定与吸收（三）口服肠溶胰岛素脂质体材料和制备方法材料壳聚糖(chitosan)是甲壳素经脱乙酰作用后得到的一种天然的带正电荷的多糖,在自然界为仅次于纤维的最丰富的多聚物,具有亲水性、生物适应性、生物降解性和低毒等特点,可以作为脂质体的稳定组分,同时还可作为吸收促进剂。但是,壳聚糖作为一种弱碱,需一定量的酸才能使葡糖胺结构单元展开并转变为带正电荷的溶液状态。在pH中性时,壳聚糖分子将失去电荷并从溶液中沉淀出来,因而壳聚糖作为吸收促进剂的潜在用途在大肠、结肠和直肠等碱性环境中受到限制。N－三甲基壳聚糖盐酸盐(N－trimethylchitosanchloride,TMC)具有壳聚糖相同的生物学性质,即使在中性pH值也能溶解和有效地降低跨上皮细胞电阻,打开肠上皮细胞间的紧密结,通过细胞旁路增加亲水性大分子的转运。海藻酸盐是一种无毒、可生物降解的带负电荷共聚物,具有生物粘附性,能延长肠道转运时间,增加药物吸收,同时也能有效地保护胃肠道粘膜。在低pH环境,海藻酸盐能缩聚,其包裹成分不释放,但包封率低。药物经脂质体包裹后,再用海藻酸盐包封,可使脂质体粘合在肠道或增加制剂的转运时间,从而有助于药物吸收,提高生物利用度。脂质体的内水相能保护胰岛素的结构和构象,而外部亲脂层有助于改善跨生物屏障吸收。脂质体药物模型制备壳聚糖纯化取食品级壳聚糖5g溶解于1%醋酸400mL中,过滤,用NH4OH将滤液调至中性,过滤,用水反复洗涤,然后冷冻干燥。NH2壳聚糖脂质体的制备用逆相蒸发法制备胰岛素脂质体混悬液。将适量磷脂和胆固醇溶于乙醚10mL中。称取胰岛素4mg溶于0.05mol·L-1HCl0.5mL,再加入pH7.4PBS2.5mL,然后与乙醚液混合,振摇,浴式超声仪超声5min,所得乳剂在旋转蒸发仪上减压蒸去有机溶剂,探针式超声0.5min,加壳聚糖或海藻酸钠溶液在10℃水浴旋转孵化60min即得包覆的胰岛素脂质体混悬液。电镜观察脂质体包裹药物A:Uncoatedliposomes(×50000);B:Chitosan2coatedliposomes(×75000);C:Sodiumalginate2coatedliposomes(×100000)（Transmissionelectronphotomicrogramsofcoatedinsulinliposomes）脂质体的发展前景一、脂质体作为药物载体抗癌药物脂质体抗寄生虫和真菌药物脂质体多肽及酶类药物脂质体二、脂质体作为疫苗载体三、脂质体用于免疫诊断四、脂质体用作基因治疗和核酸免疫中的DNA载体脂质体存在的问题传统的脂质体(磷脂双层载体)制剂能通过减少药物清除,减小分布容积(Vd)和定向转移分布来改变药物的生物学分布,从而有利于药物向毛细管穿透性已增加的疾病组织分布但脂质体的释放仍存在不少缺陷.如脂质体颗粒能够快速地被汇集进入肝脾肾脏和网状内皮系统,在循环中易于渗漏药物除此之外,脂质体还能诱导补体激活,导致清除增加以及发生心血管和血液不良事件的风险