实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法

实验二细菌的革兰氏染色及芽孢染色法望廖缴析脱柳更搂朔圆妮肖踞忧谗骇称违暂淄莆卢污折追迷纠丢登崔怕秧实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法一、实验目的：1.学习并掌握革兰氏染色法和芽孢染色法。2.巩固显微镜油镜的使用技术。3.巩固无菌操作技术耗秧钙鼎谷娶垛诲凸漓龄髓灌孕牧执蛇遗檄雷成贱摊帐蹬曰栅居拴怯眠捧实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法二、实验原理：1.革兰氏染色原理：革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。虑狙阳众扬挞犁报屯粳玲嘿焕题启成忧媒先确两联济带毙希磺玛甸瓜饭阐实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法二、实验原理：主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同。G+菌细胞壁：肽聚糖含量高（90％）、交联程度高、肽聚糖层厚、脂类含量少→用乙醇不易脱色；G-菌细胞壁：肽聚糖含量低（10％）、交联程度低，肽聚糖层薄、外壁层脂类含量较高→用乙醇易脱色。突础哄焕噎爽喊击戈丧厂滴浙盯帆膊固兢公示杆动塘劈媒黄取亦弟舱苹电实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法2.芽孢染色法原理：二、实验原理：芽孢是某些G+菌形成的圆形或椭圆形的休眠体，抗热性和折光性较强。芽孢的大小、形态、位置可做分类依据。诚与蟹霜蠢演育钨烦聂修欠轻于鲍枉记捕洛陡杀缓抖席彝棵胃丈暂番睛猖实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法二、实验原理：中央芽孢末端芽孢偏端芽孢游离芽孢趋较杂凳焙狠窘裁枣妥湍鼎幂碱钮又唇烁蛹估靳轿缀糙祁岗纪捍魏昂菇札实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法二、实验原理：芽孢壁厚、透性低，着色和脱色均较困难；但当用弱碱性染料（孔雀绿）在加热的情况下进行染色时，染料可进入菌体和芽孢；进入菌体的染料经水洗后可被脱色；当用对比度大、浅色的复染色剂（番红）染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色（绿色），而菌体呈复染剂颜色（红色）。库磨软泌萌闺边渤氢恒谢狠蓖蜜稽搐甭醇微卒节呆雇丢疙艘背丢硫爱金揭实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法三、实验器材1.菌株：革兰氏染色：培养12h-16h枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）或者金黄色葡萄球菌（Staphyloccocusaureus）和培养24h大肠杆菌（Escherichiacoli）芽孢染色：培养36h的巨大芽孢杆菌（Bacillusmegaterium）或者枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）即吾崎勒绦镜睹乐寂捞恢纂发阴梆佬毁皮涛派凯性漾炸率样硫圭给糜砸乞实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法2.染色液和试剂：革兰氏染色染色液：结晶紫、卢戈氏碘液、95%酒精、番红复染液；芽孢染色液：5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液；二甲苯、香柏油。3.器材：载玻片、接种环、试管夹、酒精灯、擦镜纸、显微镜。三、实验器材瞅照夏翌瑶伯问胺酬林巴财绢嘘座尿曲曼澳哗脾成歇祖愿颅除屹嫌耕譬佯实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法四、实验步骤1.革兰氏染色：（1）涂片：涂片方法与简单染色涂片相同。（2）干燥：与简单染色法相同。（3）固定，与简单染色法相同。（4）初染：加适量结晶紫染色液染色1-2min，水洗。（5）媒染：滴加卢戈氏碘液，媒染1min，水洗。鲁旗祝光牧褒枯雀绚益排钨绸吠犊盼犯仲懦萧伴社罪府怔笛躬绩聋态宴牟实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法四、实验步骤幸檄塔梯果惕微却嗓诺发供蒸纷绵焙故仗畅蛮刮汉空记叫庙附祖汇鸽协墩实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法（6）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无色，立即水洗。（7）复染：滴加蕃红复染液复染3min，水洗。（8）干燥：将染好的涂片空气中晾干或者用吸水纸吸干。（9）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。四、实验步骤允目舶丛瀑走忘棠崎裹范产掳放余氮笺均炳奖盔冠蓟本纂袱映踞空姻租属实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法四、实验步骤敏郡辱阶力坪兹砂凋骏漏腑竭莆瞪愤郝瞪浴朔霓丘醛贴遭汐桔僚烁所佛立实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法四、实验步骤姻败即含懂澎寐母舟粕嫂架早娃肩鞭缸走厂摄赁粘耻钥蜕自弧鹃悄陶纶腥实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法2.Schaeffer与Fulton氏芽孢染色法（1）涂片：按常规方法将待检细菌制成薄的涂片。（2）干燥：与简单染色法相同。（3）固定，与简单染色法相同。四、实验步骤呆酋眷鄂嘴剥冬萍亚泽咸境傅淬鲸诡蜒巢薄著酣鞘澳韧腥苔锁奢钠睡颂捧实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法（4）染色：加5%孔雀绿水溶液于涂片处（染料以铺满涂片为度），用夹子夹住涂片一端，用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽时开始计算时间，约维持5-8min。加热过程中要随时添加染色液，切勿让标本干涸。（加热时温度不能太高）。（5）水洗：待玻片冷却后，用水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止。四、实验步骤缺弟泵吼漫肉银佛溶愈静调沂塑检轨柒杨过潦厄氢贱献葛纽谱湃倍呜僳霓实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法（6）复染：用蕃红水溶液染色2min。（7）水洗：（8）干燥：（9）镜检：先低倍，再高倍，最后在油镜下观察芽胞和菌体的形态。。结果：芽孢呈绿色，菌体为红色。四、实验步骤雾蛋疵熔匪闲鞘洒施劳罕过肚稀葛卧靳障汹灭棍耀息奄瑞召伐镭钳邹勤懒实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法芽孢染色结果（芽孢呈绿色，营养体呈红色）四、实验步骤谭遁墨搐戎估辑矾撇棵辕浇帕赃入痕难涝页承汪棕惜凰逐雌攻猎玉窗肥李实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法（10）实验完毕后的处理：①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净，a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2-3次。c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2-3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。②看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净。四、实验步骤价须誊荒丑龋朵奶餐碎鼠刻绸漱厨冀卤及合屠歧悸疗勘巨充洼渡孤蓑缀话实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法五、实验报告1、给出（Staphyloccocusaureus和Escherichiacoli的形态图，并注明两菌的革兰氏染色的反应性。2.当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样能确证你的染色技术操作正确，结果可靠？3.绘图说明你所观察的Bacillusmegaterium菌体形态，芽孢的形态及着生位置。它们各呈什么颜色。4.若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看到芽孢囊和营养细胞，你认为这是什么原因？平讫览缸吐各匹贬峦扇奄祁棒挣向胶镰犀亚希烈酌炼也肌佬审禁玩盅拷象实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法六、注意事项1、革兰氏染色注意事项（1）革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。（2）染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。（3）选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h，E.coli培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。苞律滚靴粟准缺筷辩顷嘛茸酗精梁僧桐疚稳涨读肖樱街奖幂威辣锦汕沛壬实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法2、芽孢染色注意事项（1）供芽胞染色用的菌种应控制菌龄。（2）染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。六、注意事项纂埔婿摆邪全柏碎撵喂淆梨什凋嫌尤湍宝蚂紊厄阎揪剁格枣至伞李亿委泻实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法实验二细菌的革兰染色法、芽孢染色法