HILIC for Pharm. and Biomed. Analalysis_Chinese_Dr

HILIC在药物分析中的应用江文博士,MerckSeQuantAB高效液相色谱在药物分析上的应用•高效•高选择性•高灵敏度•高通量分析•应用领域广泛Page2HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantABHPLC成为药物分析中：最主要，最常用分析仪器高效液相色谱的应用范围•药物成份分析•药物杂质分析•药物代谢及动力学分析•生物标记•临床诊断•中药现代化•药物纯化Page3LC/MSLC/MS/MSHILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantABHPLC时代Page4TheChangingFaceofPharmaceuticalAnalysis”-SándorGörög.TrendsinAnalyticalChemistry,26(2007),12-17•JournalofPharmaceuticalandBiomedicalAnalysis杂志里65%文章使用HPLC•美国药典50%药物纯度检验使用HPLC75%的药物配方检验使用HPLC•LC/MS(MS)占主导地位HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB不同高效液相色谱分析模式的使用Page5*RonaldE.Majors，CurrentTrendsinHPLCColumnUsage，Jun1,2007，LCGCNorthAmerica反向离子交换正相体积排斥手性分离亲水作用疏水水作用亲和HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB极性和亲水性化合物的色谱分析方法Page6反相正相离子亲水作用水溶性有机溶剂高有机相低的缓冲盐浓度,不使用离子对试剂与质谱检测良好的兼容性和灵敏度HILIC最直接了当的色谱方法！事倍功半？事半功倍？HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB沉淀简单的样品前处理离心进样HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB水杨酸(SalicylicAcid)•常用做杀菌剂，防腐剂和角质软化剂•合成阿司匹林（Aspirin)的原料Page8HILIC-DayChina,May19,2009,BeijingDr.WenJiang,MerckSeQuantABHILIC分析水杨酸(SalicylicAcid)•色谱柱:4种不同的HILIC柱，250x4.6mm,5µm,分别为120,80，200，93埃的孔径•流动相:85/15乙腈/20mM乙酸铵pH6.8•流速:1.5mL/min•样品:(1)salicylamide,(2)salicylicacid-水杨酸,(3)4-aminosaliclyicacid,(4)acetylsalicylicacid,and(5)3,4-dihydroxyphenylaceticacid溶在90/10乙腈中•检测:UV228nmPage9YMC-AminoTosoh-AmideSeQuant-ZIC®-HILICWaters-Silica*Y.GuoandS.Gaiki,J.Chromatogr.A,1074(2005)71-80HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB达菲(Oseltamivir)及代谢物•奥司他韦（Oseltamivir）是一种作用于神经氨酸酶的特异性抑制剂，其抑制神经氨酸酶的作用，可以抑制成熟的流感病毒脱离宿主细胞，从而抑制禽流感病毒。•OP在体内水解成具有活性的OC代谢物Page10N.Lindeg°ardha,b,∗,W.Hanpithakponga,Y.Wattanagoona,P.Singhasivanona,N.J.Whitea,b,N.P.J.Daya,b,JournalofChromatographyB,859(2007)74–83HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB比OP更亲水Oseltamivir(OP)Oseltamivircarboxylate(OC)快速、灵敏分离从血样中萃取的Oseltamivir(OP)andoseltamivircarboxylate(OC)•色谱柱:ZIC-HILIC50x2.1mm,5µm,200ÅZIC-HILIC保护柱14x1mm,5µm•流动相:A.乙腈,1%乙酸B.10mM乙酸梯度洗脱85%60%Ain1.90min•流速:0.5mL/min•Detection:API5000triple-QMS(ABI/MDSSciex)operatedinthepositiveionmode.•Injection:2.5µLOseltamivir1ng/mLOseltamivircarboxylate10ng/mLHILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB乙酰胆碱(Acetylcholine)•乙酰胆碱是中枢神经系统、交感神经的节前纤维和副交感神经系统中的化学传导物质。Page12HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB乙酰胆碱(Acetylcholine)•色谱柱:ZIC-HILICcolumn150x2.1mm,3.5µm/200Å•流动相:70/30乙腈/10mM甲酸铵pH4•流速:0.2mL/min•样品:用10mM甲酸(pH4.0)/乙腈(30:70)微量透析液•检测:ESI-MS/MSHILIC-DayChina,May19,2009,BeijingDr.WenJiang,MerckSeQuantABPage13BoqiangFu,XinyanGao,ShiPingZhang,ZongweiCaiandJincanShenRapidCommun.MassSpectrom.2008;22:1497–1502HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB吗啡(Morphine)•吗啡以口服形式为主的镇痛药•以糖化物出现在代谢产物Page14HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB吗啡(Morphine)•色谱柱:ZIC-HILIC50x4.6mm,5µm/200Å•流动相:70/30乙腈/5mM乙酸铵，pH4•流速:0.2mL/min•样品:(a)空白羊的血样（用乙腈做蛋白沉淀)(b)添加3.1ng/mM3G，2.0ng/mL吗啡，D3-M3G，D3-morphine羊的血样(c)注射10min10mg/kg吗啡后，在55分钟后提取的羊的血样•测定的浓度分别为：1350ng/mLM3G(2)，320ng/mLmorphine(4)，D3-M3G(1)andD3-morphine•检测:ESI-MS/MSPage15HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB吗啡(Morphine)及代谢物Separationofmorphine-6-glucuronide[I],morphine-3-glucuronide[II],andmorphine[III]•色谱柱：ZIC-HILIC50x4.6mm,5µm,200A•流动相:70/30乙腈/5mM乙酸铵•流速:0.5mL/min•检测:UV212nm•进样:5µL（溶在流动相）morphine-3-glucuronideHILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB顺铂(Cisplatin)•顺铂（Cisplatin，CDDP）是一个含铂的抗癌药物，对肉瘤、恶性上皮肿瘤、淋巴瘤及生殖细胞肿瘤都有治疗功效。Page17HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB顺铂(Cisplatin)•色谱柱:ZIC-HILIC150x2.1mm,3.5µm•流动相:70/30乙腈/10mM甲酸铵pH4•流速:0.2mL/min•样品:分别用80%DMF,1,4-dioxane,或乙丙醇/20%25mM甲酸铵，pH6.5..•检测:UV305nmPage18HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB新霉素(Neomycin)•氨基糖苷类抗生素是具有氨基糖与氨基环醇结构的一类抗生素，在临床主要用于对革兰氏阴性菌、绿脓杆菌等感染的治疗，1960年代到1970年代曾经非常广泛地使用。Page19HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB新霉素(Neomycin)•色谱柱:ZIC-HILIC100x2.1mm•流动相:A：5/95/0.2,v/v/vB(95/5/0.2,v/v/v)乙腈/2mM乙酸铵/甲酸•流速:0.6mL/min•样品:空白血样中添加500ng/ml.amikacin,kanamycin,paromomycin,gentamicin,tobramycin,andneomycin•检测:MSPage20hR.Oertela,V.Neumeisterb,W.KirchaJournalofChromatographyA,1058(2004)197–201HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantAB可替宁(Cotinine)•可替宁是尼古丁的代谢产物，它在人体内的含量直接与烟草的饲入量成正比，是很好的活性生物标记Page21HILICDayChina/Taiwan,May19Beijing，May22TaipeiDr.WenJiang,MerckSeQuantABHILIC/MS/MS分析可替宁(Cotinine)Column:ZIC®-HILIC150x1.0mm,5µm60Aequippedwitha5x1mmguardcolumnEluent:Lineargradientfrom80/20/0.05acetonitrile/water/formicacidto60/40/0.05in12min.Flowrate:30µL/minDetection:MS,ESIinpositivemode,Capillaryvoltage4kV,Ionsourcetemperature:130°CDesolvationtemperature:200°CCollisiongas:ArCollisioncellpressure4x10-3mbarMRM[177]+[80]+forcotinineMRM[180]+[80]+forD3-cotinineCon