溶液配制

上表为MS培养基配方1号母液NH4NO341.25g定容至500mL，为50倍母液，取20mL/L。KNO347.5gMgSO4•7H2O9.25g2号母液CaCl2•2H2O22g（或CaCl216.6g）定容至500ml，为100倍液，取10ml/L。3号母液KH2PO48.5g定容至500ml，为100倍液，取10ml/L。4号母液Na2-EDTA1.865g定容至500ml，为100倍液，取10ml/L,pH=5.5(8点1MNaOH)说明：将两种药品分别在约230ml重蒸水中加热搅拌，待其完全溶解后混合两种溶液，再加热30min左右，使Fe与EDTA稳定螯合，调pH值至5.5，加重蒸水定容至500ml，盛于棕色瓶中。FeSO4.7H2O1.39g5号母液KI41.5mg定容至500ml，为100倍液，取10ml/L。H3BO3310mgMnSO4.4H2O（MnSO4.H2O）1115mg（845mg）ZnSO4.7H2O430mgNa2MoO4.2H2O12.5mgCuSO4.5H2O1.25mgCoCl2.6H2O1.25mg6号母液烟酸25mg盐酸吡哆醇（B6）25mg盐酸硫脂素（VB1）5mg甘氨酸100mg7号母液肌醇5g注：配制每种母液时，都应按药品顺序依次溶化后再加入后一种药品。每种母液分别贴上标签，注明母液编号，倍数，配制日期，于4度冰箱中冷藏，4度下可保存2月，如有霉菌或沉淀时不能使用。加完母液，蔗糖30g/L，定容，调pH值至5.8。加琼脂糖7-8g/L。细菌培养基YEB培养基（A4，R1000，C58C1）牛肉浸膏（beefextract）5.0g/LMgSO4储备液：2×10-3MMgSO4.7H2O（4.9296g/50ml）固体培养基：Agar12-15g/LpH=7.2酵母粉（yeastextract）1.0g/L蛋白胨（peptone）5.0g/L蔗糖5.0g/LMgSO4溶液5ml/LLB培养基（E.coli）HB101酵母浸出液（yeastextract）5g/LAgar12-15g/LpH=7.0蛋白胨（tryptone）10g/LNaCl10g/LYEP培养基（A.t）LBA4404酵母浸出液10g/LAgar12-15g/LpH=7.0蛋白胨10g/LNaCl5g/L高压灭菌，不加抗生素,倒平板之前加相应抗生素。注：应在培养接种前1-2h从冰箱中取出平板（细菌），细菌在37℃温育时会“发汗”，导致细菌克隆在平板表面交互扩散而增加交叉污染的机会，为避免这一问题，可拭去平皿内部的冷凝水，并把平板倒置于37℃温育，2小时方可使用，也可快速甩一下平皿除去冷凝水。植物激素母液配制1.0.05%2.4-D50mg2.4-D加入2-5ml95%乙醇中微热溶解，冷后定容至100ml，棕色瓶中备用。0.05%NAA，GA，IAA配法同2.4-D0.05%6-BA50mg6-BA以少量HCl（0.5N）微热溶解，冷却室温定容至100ml。？0.05%6-FA（KT）0.05%KT0.05%ZT（玉米素）配法同6-BA。实验室常用抗生素配制氨苄青霉素(Amp)水溶超滤贮存浓度50mg.mL-1羰苄青霉素(Cab)水溶超滤贮存浓度50mg.mL-1四环素(Tet)溶入乙醇超滤贮存浓度5mg.mL-1卡那霉素(Kan)水溶超滤贮存浓度10mg.mL-1氯霉素(Cm)溶入乙醇超滤贮存浓度34mg.mL-1利福平（Rif）溶于甲醇超滤乙酰丁香酮（AS）溶于DMSO超滤-20℃避光保存链霉素（Str）水溶超滤头孢霉素（Cef）水溶超滤潮霉素（hygr）将原溶液超滤，不需配制100mg/ml卡那霉素(sigma)：取100mg定容至1ml,用0.22um微孔滤膜过滤除菌。常以10-50ug/ml为工作浓度，100ug/ml用于培养细胞的杀菌。IPTG:1g溶于5ml引物稀释：干粉离心后根据管体所注明的量溶于灭菌去离子水中，制成浓度为100μmol/L的贮存液，再将引物贮存液稀释10倍后使用。PEG6000：如50%PEG6000，取50gPEG6000固体，加适量水用搅拌器搅拌，定容至100ml。DEPC水：剧毒，致癌，通风厨中操作,戴好口罩手套。1mlDEPC原液+999ml二蒸水，振荡过夜至溶解。可以重复使用。75%乙醇：用于DNA、RNA：需用DEPC水配制，DEPC水高压灭菌去DEPC25ml+75ml无水乙醇；普通：用天平称量，水比重为1，无水乙醇比重为0.785。杀菌：95%医用乙醇加水，用酒精计配制。0.1MCaCl2:0.22μm微孔滤膜过滤除菌组培用6-BA（索莱宝，园艺所用上海致化）:取0.025g,加入适量水，滴入3-4滴NaOH（不要加太多）使固体粉末溶解，定容至25ml。组培用NAA：1mg/ml。组培用NaOH：10g定容至100ml。提质粒用SDS碱裂解溶液Ⅰ：50mM葡萄糖，25mMTris-HCl(pH8.0)，10mMEDTA(pH8.0)(如配制50ml,则需葡萄糖0.4504g、1MTris-HCl(pH8.0)1.25ml、0.5MEDTA1ml)。高压蒸汽灭菌15min，4℃保存。提质粒用SDS碱裂解溶液Ⅱ：0.2NNaOH，1%（m/v）SDS。（如配制1ml，则需2NNaOH100,10%SDS100μl,定容至1ml）。现用现配，室温使用。提质粒用SDS碱裂解溶液Ⅲ：100ml中有5M乙酸甲60.0ml,冰乙酸11.5ml，H2O28.5ml。配制50ml时需5M乙酸甲30.0ml（14.721g定容至30ml）,冰乙酸5.75ml，H2O14.25ml。保存于4℃，用时置于冰浴中提前预冷。