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第九章种子健康测定•种子健康测定（seedhealthtesting）的目的是测定种子样品的健康状况，并由此推测一批种子的健康状况。通常种子健康状况是以种子带病和种子虫害率表示。第一节种子健康测定的意义第二节种子病害测定第三节种子虫害测定第四节种子健康测定的程序第一节种子健康测定的意义1.了解种子的健康状况，确定种子的利用价值2.防止危害性病虫的传播•健康测定的内容：病害，虫害第二节种子病害测定常用的病害测定方法有1)肉眼检验、2)过筛检验、3)洗涤检验、4)滤纸培养检验、5)琼脂培养检验、6)离体胚检验、7)漏斗法检验……一、肉眼检验•借助肉眼或低倍放大镜进行检验。•适用于有较大病原体或种子外表有明显症状的病害。如小麦线虫病虫瘿、腥黑穗病菌瘿、小麦赤霉病、水稻稻瘟病、玉米粒腐病、甘薯黑斑病、马铃薯晚疫病等。•检验方法是从送验样品中分出一半种子作试样，放在白纸或玻璃板上，检出病原体或病粒，称其重或计其粒数，按下列公式计算感染病害百分率。病害感染率=病粒或病原体的数量（g）/试验样品的重量（g）×100%二、过筛检验•适用于较大病原体，其形状、大小与种子不同，可用筛子分离。如菌瘿、病核、虫瘿及赤霉病粒等。•检验方法是从送验样品中分出一半种子作试样，用规定孔径的筛子过筛，不同作物种子所用筛孔不同取筛子按孔径大小叠好（孔径上层大，下层小），将试样倒人上层筛内，筛理2min，最好用电动筛选器进行。然后将各层筛上物倒入白瓷盆内，摊成薄层用肉眼或10～15倍扩大镜检查。将底层的细小筛出物倒于黑底玻板上，用50～60倍双目扩大镜检查，拣出病原体并称重，计算病原体含量百分率。三、洗涤检验（洗涤+显微镜检测）•多用于种子表面带病而肉眼看不见的种子病害，如麦类腥、黑穗病、稻粒黑粉病、稻干尖线虫病、棉花、红麻炭疽病等。•从送验样品中分取试样两份，每份3g，分别倒人小三角瓶内，注入蒸馏水10ml，加以剧烈振荡（用定时振荡器），光滑种子振荡10min，粗糙种子振荡10min，将悬浮液倒入离心管内，用每分钟1000转速度离心5min，吸去上清液，留1ml悬浮液于管底，稍加振荡，立即用清洁细玻棒将悬浮液分别滴在5～10片载玻皮上，盖上盖玻片，逐片用放大40～500倍的显微镜检查，每片检查10个视野，记载病原体种类及每视野的孢子数，并计算每粒种子孢子负荷量。四、滤纸培养检验•适用的病害有稻瘟病、稻胡麻叶斑病、麦类斑点病、雪腐病、镛刀菌、小麦颖枯病、大豆荚枯病、各种作物炭疽病等。可根据种子上的特有症状或种子上的分生孢子和菌丝体鉴别。（－）稻瘟病取试样400粒，置于2～3层湿润滤纸上，培养皿直径9cm，每皿置25粒种子，在22℃昼夜光照12h条件下培养7天检查。在12～50倍放大镜下检查每粒种子上的分生孢子。稻瘟病则在颖壳土产生小形的不明显的灰至绿色分生孢子，着生在密集而纤细的分生孢子梗上，它通常很少覆盖整粒种子。如有怀疑可用200倍显微镜检查核实，典型的生分孢子为倒梨形、透明、基部具短齿、分二隔，常有尖锐的顶端。（二）菜豆炭疽病取试样400粒，预先用1％有效氯的次氯酸钠浸种10min，然后将每50粒种子置于35×45cm的双层湿滤纸上，再用一层湿滤纸覆盖，纸巾纵向折叠二次，并用聚乙烯薄膜覆盖，于20℃黑暗培养7天。检查时剥去种皮，观察子叶边缘清晰的黑色斑点，用25倍立体显微镜观察，记录有分生孢子盘的种子数，在分生孢子盘上长有具隔膜的黑色刚毛。五、琼脂培养检验•适用于潜伏在种子内部的病原菌，如玉米干腐病、小麦斑点病、亚麻灰霉病、豌豆褐斑病等。（－）豌豆褐斑病取试样400粒，用次氯酸钠消毒。在培养皿内放人麦芽或马铃薯葡萄糖琼脂，每皿置10粒种子，于20℃黑暗培养7天，用肉眼检查种子外盖满的大量白色菌丝体。对有怀疑的菌落可用25倍扩大镜下观察，根据菌落边缘的波状菌丝体确定。（二）亚麻灰理病取试样400粒。培养皿内放人含有2％琼脂和1％麦芽汁的麦芽琼脂，每皿放10粒种子，于20℃黑暗培养7天。于第5天和第7天用肉眼观察幼根，其上存在软腐，并为大量灰色菌丝体覆盖。如有怀疑可用200倍显微镜检查，根据有分隔的带状菌丝和分生孢子梗的簇生分枝来确定。六、漏斗法检验•此法专用于水稻干尖线虫病。水稻干尖线虫病只在叶尖上形成尾巴状物，而不形成虫瘿，种子带病时不易看出，可用漏斗法检查。•检验方法：将一漏斗夹在支架上，于漏斗上放一钢丝网或纱布，漏斗下部装有胶管及夹子。取一定量的水稻种子剪碎，放人铜丝网或纱布中然后加水于漏斗内，使样品浸于水中，冬季应将漏斗及样品置于28℃恒温箱内，经24h后，用离心管装在漏斗管下端，打开夹子，取出底部少量溶液（此处浓度最高，含线虫最多），进行离心，用显微镜检查有无线虫及其含量。•对不同的病害，用不同的方法：1.对较大的病原体过筛肉眼2.对种子外表有明显症状的肉眼3.表面带菌但看不见的洗涤滤纸培养4.种子内部的病原菌琼脂培养5.胚内病菌离体胚培养第三节种子虫害测定•常用的虫害测定方法有肉眼检验、过筛检验、剖粒检验、染色检验和比重检验。一、肉眼检验•害虫自由活动在种子堆中或种子受害虫损伤后有明显特征的适用。•从送验样品种分出一半种子作试样，把种子倒在预先用酒精擦净的瓷盘内或玻璃桌上。冬季则须将种子放在18～25℃加温20～30min，使害虫恢复活动，进行逐粒观察，将害虫及受害种子拣出，然后计算虫害种子百分率及每千克种子中害虫的头数。二、过筛检验•凡是成虫或幼虫散布在种子中间的害虫适用。三、剖粒检验•凡是隐藏在种子内部的害虫，如蚕豆象、豌豆象等适用。四、染色检验•应用染料或化学试剂处理种子，使被虫害种子的孔口更明显，易于鉴别。•（－）高锰酸钾染色法检查米象、谷蠹为害的孔口。先将送验样品中的杂质除去称取试样15g，倒入铜丝筛中，浸于30℃水中lmin，再移到1％高锰酸钾溶液中，浸45～60s，立即取出用清水洗涤，马上倒在白色吸水纸上，用扩大镜检查，被害种子表面有直径为0.5cm突起的黑色斑点。如再用过氧化氢和硫酸混合液（100ml的1％硫酸加1ml3％过氧化氢）洗涤则黑色斑点更为明显，结合剖粒检验查出害虫头数，并换算成每千克种子中的种子害虫头数。（二）碘或碘化钾染色法•凡豆象为害的种子适用。•从送验样品中取试样50g，放于铜丝筛中或用纱布包好，浸于1％碘化钾或2％碘酒中，经1～1.5min取出移于盛有0.5％氢氧化钠的溶液中，浸30s立即检查。豆粒表面有1～2mm直径的黑色圆形斑点的，为豆象感染过的种子，结合剖粒检验，计算每千克种子的害虫头数。五、比重检验•凡被米象、谷骚、豆象和麦蛾为害过的种子比重轻，可浮于一定浓度的液面上。•取试样100g，倒人饱和食盐溶液中（在20℃条件下，100ml水中溶人35g食盐），充分搅拌10～15s，放置2min，将浮在上层的种子取出，结合剖粒检验，计算出每千克种子害虫头数。•对不同的虫害：1.对活动在种子堆内的害虫肉眼过筛2.对虫损伤后有明显症状的肉眼3.对虫损伤后症状不明显的染色4.对种子内的害虫比重，剖粒，X射线第四节种子健康测定的程序（病害）一、未经培养的种子样检验1.直接检查2.洗涤检查3.剖粒检查二、培养后检查（适应于种子内部带菌的）1.吸水纸法2.沙床法3.琼脂糖法•方法：无菌培养后观察种子表面的发霉情况三、结果报告包括1.病原菌种类2.感染种子数的百分率•种子健康测定方法简单，但需要一定的病理学•和昆虫学知识，同时需要一定的经验。