药物分析维生素类药物的分析

第九章维生素类药物的分析TheAnalysisofVitamines概述维生素是维持人体正常生理机能所必需的生物活性物质。如果人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏症，而影响人体的正常生理机能。例如:VA缺乏—夜盲症VB1缺乏—脚气病脂溶性：VA、VD、VE、VK等水溶性：B族（VB1、VB2等）、VC、烟酸、叶酸、泛酸等按溶解性分类§9.1维生素A的分析一、结构与性质VA含有共轭多烯醇侧链的环已稀(有多种异构体)CH2OR6543219'8'7'6'5'4'3'2'1'R=HVA醇VA1R=—COCH3VA醋酸酯R=—COC15H31VA棕榈酸酯VA为油状物,存在于鱼肝脏中,称鱼肝油,不溶于水.有人工合成的.国际单位IU=0.344微克维生素Ａ醋酸酯；IU＝0.300微克维生素Ａ醇换算：1g维生素Ａ醋酸酯相当于：611029070000.344/gIUgIU1g维生素Ａ醇相当于：611033300000.300/gIUgIUCH2OHCH2OR6543219'8'7'6'5'4'3'2'1'CH2VA1:VA2:(去氢VA)VA3:(去水VA)二、鉴别试验1、三氯化锑反应VA在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中显蓝色，渐变成紫红色。（P245）注意:在水中三氯化锑水解,必须在绝对无水中进行!2、紫外吸收光谱VA的无水乙醇溶液在326nm有最大吸收。VA(5个共轭双键)在盐酸中加热,生成6个共轭双键的去水VAVA在326nm有一个吸收峰去水VA在350-390nm有三个吸收峰（P247）3、TLC：确认醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，例：VA和其标准品用环己烷溶解展开剂：环己烷—乙醚（80：20）板：硅胶G显色：磷钼酸为显色剂Rf：VA醇0.１VA醋酸酯0.4５VA棕榈酸酯0.7三．含量测定维生素Ａ中含有稀释用油和其它杂质，所测得的吸光度不是维生素Ａ独有的吸收．对测定有影响。即在三个波长处测得吸光度，进行校正后再计算。称为三点校正法原理：吸光度是维生素A和杂质吸收之和，测得A值需校正。（最大吸收为328nm)１．紫外分光光度法－三点校正法测定波长吸光度吸光度比值吸光度比值差计算值规定值3000.5553160.907(326)3281.000(329)3400.8113600.299方法:(1)分别测300、316、328、340、360nm吸光度，求出各波长吸光度与328nm吸光度比值，各比值与P249表中数据对比；(2)若比值不超过±0.02可直接用测得A值；(3)若比值超出±0.02则A需校正：A（校正）=3.52(2A328-A316-A340)(4)计算：1%1100cmAECLA:吸光度;C:浓度(g/mL);L:溶液厚度(cm);求效价：每g供试吕中所含维生素A的国际单位1%1/1900cmIUgE求百分含量：1900%100%100ADWWL标示量标示量A：吸光度（校正后的吸光度）D：稀释倍数；1900：以环已烷为溶剂时的换算因子；L：比色池厚度；W：取样量；§9.2维生素B1的分析一、化学结构与性质维生素B1:氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接成的季铵类化合物.白色结晶,溶于水,显酸性.学名:氯化4-甲基-3-[（2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基）甲基]-5-（2-羟乙基）噻唑的盐酸盐俗名:盐酸硫胺二.鉴别试验1.硫色素荧光反应：维生素B1在碱性溶液中，与铁氰化钾氧化成硫色素，在正丁醇中显蓝色荧光VB1专属反应，用于鉴别和含量测定。2、沉淀反应：碘化汞钾-------淡黄色沉淀碘--------红色沉淀VB1硅钨酸--------白色沉淀苦味酸--------扇形白色结晶三.含量测定1、非水溶液滴定法：（Ch.P收录）VB1分子中含有已成盐的伯胺和季铵基团，在非水溶液中，在醋酸汞存在下，均可被高氯酸滴定。溶剂：冰醋酸/醋酸汞指示剂：喹哪定红-亚甲蓝混合指示液滴定剂：高氯酸（0.1mol/L)终点：天蓝色摩尔比：VB1：高氯酸=1：2VB1摩尔质量=337.27滴定度T=0.1×(1/2)×337.27=16.86mg/ml2、紫外UV（中国药典）VB1片：方法与片剂含量测定相同(246nm)VB1注射液：与液剂相同。（246nm)1%1100%100cmADWEW标示量1%1%100%100cmADEV标示量标示量§9.3维生素C的分析一、化学结构OCOHHCH2OHOOHOH123456**1、具有内酯结构。碱性下可水解。2、具有烯二醇基。还原性，能够被氧化成去氢抗坏血酸。3、结构与糖类相似，具有糖性质。溶于水，酸性，旋光性。OOHOHOHCCH2OHHOHOOHOHCHOOHCH2OHHOOHOHOHCCH2OHHHOOOHOHCHOCH2OHHOHD(-)-异抗坏血酸L(+)-异抗坏血酸L(+)-抗坏血酸D(-)-抗坏血酸4、具有4种光学异构体。其中生理活性最强的是L（+）-抗坏血酸二、鉴别试验1、硝酸银反应（中国药典）烯二醇基具有还原性，可被硝酸银氧化成去氢抗血酸，同时生成黑色的银。OHOH]O[OO（黑色）AgAgNOVC32、与2，6-二氯靛酚（染料）反应VC被还原为无色的酚亚胺3.糖的性质VC的结构很象糖结构，具有糖的性质VC+三氯化醋酸或盐酸----水解----脱羧------戊糖----失水----糠醛-----（加吡咯，加热）----蓝色4、紫外分光光度法（英国药典）VC在盐酸溶液中，243nm最大吸收。OCOHHCH2OHOOHOHHI2OCOHHCH2OHOOOHI2三．含量测定1.碘量法（Ch.P收录）VC在醋酸条件下，被碘定量氧化。加入淀粉指示剂，蓝色不褪为碘过量（30S内）。由消耗碘量计算含量。操作：（P265）样品新沸放冷的水，稀HAc淀粉0.1mol/L碘终点颜色：无色→蓝色1ml0.1mol/L碘液，1ml8.806mgC6H8O6加入新沸放冷的水为了减少水中溶解氧的影响。酸性：使VC在空气中氧化速度减慢。VC注射液中常加有亚硫酸盐如NaHSO3作为抗氧剂.OCOHHCH2OHOOHOHOHClClNOHOCOHHCH2OHOOOOHClClNHOH终点的颜色是溶液由无色变为红色。氧化型（红色）还原型（无色）++2、2,6-二氯靛酚滴定法酸性下直接用2,6-二氯靛酚滴定，用滴定剂自身的颜色变化指示终点，不需要另外的指示剂。3、高效液相色谱法HPLCP276§9.4维生素DVD是一类抗佝偻病维生素的总称,有片剂,注射剂,胶囊等.一、结构（P268）开环麦角甾烯醇，又称麦角骨化酸。VD2，VD3无色针状结晶，旋光性，不溶于水。二、鉴别试验1、显色反应VD2醋酐+浓硫酸黄--红--紫--绿VD3醋酐+浓硫酸黄--红—紫/蓝绿—绿VD2或VD3三氯化锑橙红色---粉红色2、维生素D2和D3的区分VD2乙醇+硫酸红色VD3乙醇+硫酸黄色三、含量测定高效液相色谱法，药典收录。OCH3CH3CH3CH3CH3CH3CH3H3COCH3CO1458名称：消旋α-生育酚醋酸酯（α-异构体生理活性最强）母核：苯骈二氢吡喃衍生物，苯环上有一乙酰化的酚羟基侧链：脂肪烷烃性质：不溶于水，油状，微黄色液体。§9.5维生素E（称为生育酚）一、结构：苯并二氢吡喃醇衍生物，二、鉴别试验1、硝酸反应：（药典收录）VE在硝酸条件下,水解生成生育酚.生育酚被硝酸氧化为邻醌结构的生育红.VE+HNO3----水解生成生育酚-----生育红（橙红色）2、水解后氧化反应：VE在碱性条件下水解，得α—生育酚，在联吡啶和三氯化铁试液的作用下，反应产生血红色配离子。VE+KOH–α生育酚（加入三氯化铁）--生育醌+铁配合物（血红色）3、UV吸收：VE的0.01%无水乙醇液：λmax=284nmλmin=254nm4、红外光谱（中国药典）三、杂质检查检查游离生育酚:ChP2005铈量法：用Ce(SO4)2(0.01mol/L)滴定，指示剂：二苯胺终点：亮黄→灰紫消耗Ce(SO4)2液不得超过1.0ml。1、铈量法（中国药典）原理：VE用硫酸加热回流，水解成生育酚，用硫酸铈定量地氧化为对一生育醌，过量的硫酸铈氧化二苯胺指示剂而指示滴定终点。终点：亮黄→灰紫，需作空白试验。四、含量测定2、气相色谱法：Chp20053、高效液相色谱法日本药局方（JP13）练习题：维生素AD胶丸中维生素A的含量测定已知：平均胶丸重为0.0815g维生素A的标示量为10000IU/丸取样：ml25ml2ml100g1279.0测定数据如下表，求：维生素A的标示百分含量。波长吸收度比值规定值比值差3000.3740.5740.5550.0193160.5840.8960.907-0.013280.6521103400.5340.8190.8110.0083600.2110.3390.2990.04%1cm1E首先要求样品的。计算吸收度比值和吸收度比值差。（填于上表）655.0)534.0584.0652.02(52.3A328（校正）%5.0100652.0652.0655.0由此可知，应该用测得的328nm处的吸收度计算。然后计算校正吸收度与未校正吸收度相差的百分数由结果知，需计算校正吸收度。72.631010232.0652.0E%1cm1)g/IU(121068190072.631900Eg/IU%1cm1%7.98%100100000815.0121068100%wg/IU100%/IU%标示量标示量丸标示量维生素A的标示含量维生素A醋酸酯胶丸含量测定:取内容物39.1mg,加环己烷溶解并稀释成100ml，在下列五个波长处测得吸收度A值如下：测定波长(nm)测得吸收度A值吸收度比值差值规定值计算值3000.3740.5553160.5920.9073280.6631.0003400.5530.8113600.2280.299已知：平均胶丸内容物重为0.08736g;维生素A的标示量为3000IU/丸试求：维生素A的标示百分含量？维生素A醋酸酯胶丸的含量测定，取内容物W，加环己烷溶解并稀释至10ml，摇匀，精密量取0.1ml,再加环己烷稀释至10ml，使其浓度为9~15IU/ml。已知内容物平均重量为80.0mg,每丸标示量为10000IU。试计算取样量（W）的范围是多少？