海洋放线菌对大黄鱼病原弧菌的拮抗作用和抗菌谱

≥∂海洋放线菌对大黄鱼病原弧菌的拮抗作用和抗菌谱王军鄢庆枇苏永全梁桂洪麦添成厦门大学海洋学系!厦门大学亚热带海洋研究所集美大学水产生物技术研究所!水产学院提要在大黄鱼Πσευδοσχιαεναχροχεα病原弧菌的拮抗放线菌筛选和人工诱变基础上,选择出对溶藻弧菌ςιβριοαλγινολψτιχυσ和副溶血弧菌ς.παραηαεµολψτιχυσ同时具有较强拮抗作用的株放线菌∀采用琼脂块法测定株放线菌的抗菌谱并检测株放线菌分别在固体和液体培养液中的拮抗作用∀结果表明株放线菌的抗菌谱均较窄在固体和液体培养基中对种病原弧菌都有较强的拮抗作用∀关键词大黄鱼Πσευδοσχιαεναχροχεα病原弧菌放线菌拮抗作用抗菌谱国家高技术研究发展计划资助项目222号∀第一作者王军出生于年硕士副教授目前主要从事海水养殖病害及种质资源研究∀通信地址福建省厦门市厦门大学海洋与环境学院∞2¬∏2¬收稿日期22修回日期22放线菌是自然环境中常见的一类丝状原核微生物能产生多种抗生素∀在医药和农业领域中利用放线菌进行病害防治已有报道≈但国内在筛选海洋放线菌进行水产养殖疾病的防治方面尚未见报道本文在大黄鱼病原弧菌的拮抗放线菌筛选和人工诱变基础上≈进一步对溶藻弧菌和副溶血弧菌同时具有较强拮抗作用的株放线菌进行抗菌谱和拮抗作用的深入研究以期为大黄鱼养殖病害探索一条生物防治的新路∀材料与方法1.1试验菌株病原菌溶藻弧菌和副溶血弧菌从福建省连江县厦宫乡新辉养殖渔排的患病大黄鱼分离并经回归感染确认为大黄鱼弧菌病病原≈∀拮抗放线菌在大黄鱼病原弧菌拮抗放线菌的筛选和人工诱变≈的基础上挑取对溶藻弧菌和副溶血弧菌同时具较强拮抗作用的株放线菌编号分别为和∀1.2指示菌大肠杆菌Εσχηεριχηιαχολι)!金黄色葡萄球菌(Σταπηψλοχοχχυσαυρευσ)!枯草杆菌(Βαχιλλυσσυβτιλισ)!嗜水气单胞菌(Αεροµονασηψδροπηιλα)!沙蚕弧菌(ςιβριονερεσισ)!坎普氏弧菌(ς.χαµπβελλιι)!河流弧菌(ς.φλυϖιαλισβιοτψπε和河流弧菌ς.φλυϖιαλισβιοτψπε等购自中国科学院微生物研究所∀1.3培养基高氏一号!营养肉汤和×≤≥琼脂配制≈∀1.4固体培养基中放线菌抗菌活性测定用琼脂块法≈测定放线菌对株供试病原弧菌的抗菌活性将被测放线菌菌株制备成菌悬液稀释至适当的浓度后涂布高氏一号平板培养∗后用打孔器将各小菌落取下并移至培养箱中ε培养成熟然后再移至涂布有病原弧菌的营养琼脂平板上培养∗测定抑菌圈大小∀1.5液体培养基中放线菌抗菌活性测定将种病原弧菌各自与株拮抗放线菌分别制成菌悬液取每种菌悬液分别接入装有肉汤的三角瓶中ε水浴振荡培养并从培养和等个不同时间的三角瓶中各取出少量菌液分别涂布于×≤≥和高氏一号培养基上在ε下培养后用平板菌落计数法测定病原弧菌和放线菌的浓度以不加拮抗放线菌的病原弧菌培养液为对照∀1.6抗菌谱的测定以大肠杆菌!金黄色葡萄球菌!枯草杆菌!嗜水气单胞菌!沙蚕弧菌!坎普氏弧菌!河流弧菌和河流弧菌作为指示菌用琼脂块法检测放线菌的抗菌谱≈∀∞÷°∞≥≥快报海洋科学年第卷第期结果2.1拮抗放线菌的抗菌谱为检测所选株放线菌对其它菌株的拮抗效果采用大肠杆菌等株指示菌进行抗菌谱试验∀由于筛选拮抗菌的主要目的是为了抑制病原弧菌的生长所以在抗菌谱试验中选择的菌株以弧菌最多∀在其它菌株中大肠杆菌是2肠道菌的代表金黄色葡萄球菌代表球菌枯草杆菌代表杆菌而嗜水气单胞菌则是水产养殖中极为常见的病原菌∀表可以看出株放线菌的抗菌谱都比较窄所有放线菌株都对坎普氏弧菌具有拮抗作用此外和菌株对沙蚕弧菌!和菌株对金黄色葡萄球菌和嗜水气单孢菌也产生拮抗作用而和菌株还分别对生物型河流弧菌和枯草杆菌的生长产生抑制作用可见在株放线菌中菌株抗菌谱是最窄的∀2.2放线菌在固体培养基中对病原弧菌的拮抗作用表可见在大黄鱼病原弧菌拮抗放线菌的筛选和人工诱变的基础上所选择的株放线菌在琼脂培养基中对供试验的株大黄鱼病原弧菌均有明显的拮抗作用但它们都有各自的抑菌特点其中菌株对溶藻弧菌拮抗效果较好对副溶血弧菌的拮抗作用稍差∀而菌株则相反对副溶血弧菌的拮抗效果较好对溶藻弧菌拮抗效果稍差∀菌株和菌株对两种病原弧菌的拮抗效果都比较明显∀2.3放线菌在液体培养基中对病原弧菌的拮抗作用虽然所选的株放线菌在固体培养基试验中对病原弧菌的拮抗作用很明显但为了更贴近实际生产使本试验结果更具有应用价值故选用了肉汤作为液体培养基分别检测了株放线菌在液体培养基中对株病原弧菌的拮抗作用∀对溶藻弧菌的拮抗作用图!图分别为菌悬液在肉汤培养液中溶藻弧菌和株放线菌的生长情况∀从图可见与对照组溶藻弧菌的生长速度相比个试验组中溶藻弧菌的生长均受到明显的抑制其中对溶藻弧菌生长的抑制效果最强的是菌株和菌株和分别次之这与固体培养基的试验结果有所不同∀在琼脂试验中抑菌作用最好的号菌株在液体培养基中的抑菌效果较弱而在琼脂试验中抑菌作用较弱的号在液体培养基中表现出较强的抑菌效果导致这种差异的主要原因可能与不同菌株的拮抗菌在营养肉汤中生长速率不同有关∀菌株在固体培养基上对溶藻弧菌的拮抗作用较强其在营养肉汤中的生长速率也最快因此在液体培养基中菌株对溶藻弧菌表现出的拮抗作用也最强菌株虽然在固体培养基上对溶藻弧菌的拮抗作用最强但其在营养肉汤中的生长速率较慢故其在液体培养基中对溶藻弧菌的拮抗效果也较弱图!图∀对副溶血弧菌的拮抗作用图可看出和溶藻弧菌的结果一样各混合菌悬液试验组中副溶血弧菌的生长均受到放线菌明显的抑制而原本对溶藻弧菌抑制作用较弱的菌株和对副溶血弧菌的抑菌作用强于菌株和菌株这与用琼脂块法测得的株放线菌对副溶血弧菌的拮抗作用完全吻合表∀与溶藻弧菌拮抗试验不同的是混合菌悬液中株放线菌在肉汤培养液中的生长速度相近菌株和菌株在液体培养基中略快的生长速度并没有使得它们对副溶血弧菌的拮抗作用强于菌株和菌株图!图∀∞÷°∞≥≥快报≥∂图营养肉汤中放线菌对副溶血弧菌的抑制效果)))副溶血弧菌的生长ƒ×ς.Παραηαεµολψτιχυσ∏∏∏)))×∏√ς.Παραηαεµολψτιχυσ图营养肉汤中放线菌对副溶血弧菌的抑制效果)))放线菌的生长ƒ×ς.Παραηαεµολψτιχυσ∏∏∏)))×∏√图营养肉汤中放线菌对溶藻弧菌的抑制效果)))溶藻弧菌的生长ƒ×ς.αλγινολψτιχυσ∏∏∏)))×∏√ς.αλγινολψτιχυσ图营养肉汤中放线菌对溶藻弧菌的抑制效果)))放线菌的生长ƒ×ς.αλγινολψτιχυσ∏∏∏)))×∏√讨论弧菌是海水环境中的正常菌群广泛分布在自然海区中≈一般情况下不会引起养殖动物发生病害∀溶藻弧菌和副溶血弧菌是海洋弧菌中的优势菌≈数量较大而且有的菌株具有相当强的毒性≈∀因此由溶藻弧菌和副溶血弧菌引起的水产养殖动物疾病屡见不鲜∀如果能抑制致病菌的生长繁殖限制其数量就可以有效降低由条件致病菌引发疾病的发病率∀放线菌是一类很常见的拮抗微生物利用放线菌进行农作物的病害防治时有报道≈而国内尚未见到将拮抗性放线菌用于海水养殖弧菌病防治的研究报道∀本课题组系统地对取自厦门地区浅海滩涂海泥中的放线菌进行分离!诱变≈!固体和液体培养液中拮抗作用检测以及抗菌谱测定等多项试验证实了经筛选和诱变后一些试验放线菌对溶藻弧菌和副溶血弧菌同时具有了较好的拮抗作用特别是在液体培养基∞÷°∞≥≥快报海洋科学年第卷第期ΤΗΕΑΝΤΙΒΙΟΤΙΧΡΑΝΓΕΣΟΦΑΝΤΑΓΝΙΣΜΑΧΤΙΝΟ2ΜΨΧΕΣΦΟΡΠΑΤΗΟΓΕΝΙΧςιβριοΦΡΟΜΠσευδοσχιαεναχροχεαΑΝ∆ΤΗΕΙΡΙΝΗΙΒΙΤΟΡΨΑΧΤΙςΙΤΙΕΣ•∏≠±2≥≠2∏∏2×2∆επαρτµεντοφΟχεανογραπηψΙνστιτυτεοφσυβτροπιχαλΟχεανογραπηψ,ΞιαµενΥνιϖερσιτψΙνστιτυτεοφΑθυαχυλτυρεΒιοτεχηνολογψΦισηεριεσΧολλεγε,ϑιµειΥνιϖερσιτψΡεχειϖεδ:ƒΚεψΩορδσ:Πσευδοσχιαεναχροχεα,ςιβριοαλγινολψτιχυσ,ς.παραηαεµολψτιχυσΑβστραχτ∏ςιβριοαλγι2νολψτιχυσς.παραηαεµολψτιχυσΠσευδοσχιαεναχροχεα∏√√ςιβριο∏∏×∏∏√ςιβριοσ∏√∏√本文编辑刘珊珊中拮抗菌所表现出对病原菌显著抑菌作用的试验结果表明利用拮抗放线菌进行水产养殖弧菌病害的生物防治可能实现∀本试验所取得的另一个重要试验结果为所分离!诱变得到拮抗效果较好的株放线菌的抗菌谱都很窄也即是它们对病原性溶藻弧菌和副溶血弧菌同时具有较强的拮抗作用对其他供试菌没有拮抗作用或拮抗效果较弱其中菌株和的抗菌谱非常窄仅对部分弧菌有拮抗作用∀拮抗菌抗菌谱的宽窄直接关系到其在养殖生产上的应用性理想的拮抗微生物应该只对病原微生物起作用而对养殖水体中其他有益菌没有拮抗作用∀本试验筛选出的株放线菌基本满足海水养殖弧菌病防治的要求可以进一步进行其对养殖动物的安全性以及拮抗菌在养殖生产中的应用效果等方面的研究∀参考文献鄢庆枇!王军!苏永全等∀大黄鱼病原弧菌拮抗放线菌的筛选与人工诱变台湾海峡21∗杨智源!郑忠辉∀海洋放线菌细胞毒抗肿瘤活性物质的初筛选中国海洋药物18∗吴连举!杨依军∀利用土壤拮抗性微生物防治人参锈腐病中国生物防治15∗鄢庆枇!苏永全!王军等∀网箱养殖大黄鱼弧菌病研究集美大学学报自然科学版6∗祖若夫!胡宝龙!周德庆∀微生物实验教程∀上海复旦大学出版社∀2高尚德!陈旭仁!吴以平∀中国对虾养成期间虾池水体和底质中细菌含量的变化水产学报18∗2×2°×≤≥ΑρτεµιαχψστσΑθυαχυλτυρε194∗∗∏°≤≤≠≤∏≤≠εταλ∂∏ςιβριοπαραηαεµολψτιχυσ∏∏ΗαλιοτισδιϖερσιχολορσυπερτεξταΛεττερσινΑππλιεδΜιχροβιολογψ31∗∞÷°∞≥≥快报