380-第三章 中药制剂的检查

第三章中药制剂的检查制剂通则检查一般杂质检查特殊杂质检查微生物限度检查§1中药制剂杂质检查杂质：指能危害人体健康或影响药物质量的物质。杂质的分类一般杂质（如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐）特殊杂质杂质来源中药材原料中带入生产制备过程中引入贮存过程中引起的中药制剂自身理化性质的改变§1中药制剂杂质检查杂质的限量检查杂质限量：指药物中所含杂质的最大允许量，通常用%或ppm来表示。杂质限量检查及计算方法取一定量与被检杂质相同的纯物质或其它对照品配制成标准溶液，与一定量供试药物的溶液，在相同处理条件下，比较反应结果，从而确定杂质限量是否超过规定。%100样品量杂质最大允许量杂质限量%100%100SCVLSCVL）样品量（）标准溶液的浓度（）标准溶液的体积（）杂质限量（注射用双黄连（冻干）中砷盐限量检查取本品0.4g，加2%硝酸镁乙醇溶液3ml，点燃，燃尽后，先用小火炽灼使炭化，再在500～600℃炽灼使完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水21ml使溶解，依法检查（中国药典2000版附录ⅨF）。如果标准砷溶液（1µgAs/ml）取用量为2ml，杂质限量的计算如下：百万分之五%0005.0%1004.0100.12%100)()/()(6gSmlgCmlVL§1中药制剂杂质检查杂质的限量检查不用标准溶液，直接在供试品溶液中加入试剂进行检查。肉桂油中重金属检查取肉桂油10ml，加水10ml与盐酸1滴，振摇后，通硫化氢气使饱和，水层与油层均不得变色。§2一般杂质检查方法重金属检查法重金属：在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。重金属检查法基本原理CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S↑Pb2++H2S→PbS↓+2H+pH3.5§2一般杂质检查方法重金属检查法检查方法方法适用范围检查方法第一法适用于供试品不经有机破坏，在酸性溶液中显色的重金属限量检查。甲管：标准铅溶液（1µg/ml）+醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml+水或各药品项下规定的溶剂稀释成25ml；乙管：供试品溶液25ml；甲管硫代乙酰胺试液各2ml→摇匀→放置2分钟→同置白纸上,自上向下透视→乙管中显出的颜色不得比甲管更深。乙管第二法适用于供试品需灼烧破坏，取炽灼残渣项下遗留的残渣，经处理后在酸性溶液中显色的重金属限量检查。取炽灼残渣项下遗留的残渣→加硝酸0.5ml→蒸干至氧化氮蒸气除尽→放冷→加盐酸2ml→置水浴上蒸干→加水15ml→滴加氨试液至对酚酞指示液显中性→加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml→微热溶解→移置纳氏比色管中→加水稀释成25ml；另取配制供试品溶液的试剂→置瓷皿中蒸干→加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml→水15ml→微热溶解→移置纳氏比色管中→加标准铅溶液一定量→用水稀释成25ml；以上两管溶液，照上述第一法检查。§2一般杂质检查方法重金属检查法检查方法方法适用范围检查方法第三法适用于检查能溶于碱而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）的药品中的重金属。甲管：标准铅溶液适量+氢氧化钠试液5ml+水20ml+硫化钠试液5滴，摇匀；乙管：供试品适量+加氢氧化钠试液5ml+水20ml溶解→置纳氏比色管中+加硫化钠试液5滴，摇匀；两管比较，乙管颜色不得比甲管深。第四法适用于有色溶液或重金属限量低的品种。用微孔滤膜过滤，使重金属硫化物沉淀富集成色斑后与一定量标准铅溶液获得的色斑进行比较检查。§2一般杂质检查方法重金属检查法注意事项方法灵敏度适用于含铅量在10µg-30µg之间。标准铅液的用量以20µg（相当于标准铅溶液2ml）为宜。反应条件硫代乙酰胺试液与重金属反应的最佳pH值是3.5，硫代乙酰胺试液加入量以2ml时呈色最深，最佳显色时间为2分钟。有色供试液的处理供试品在加硫代乙酰胺试液以前如带色，可用稀焦糖液或加常用的指示剂调整标准溶液，使两者颜色一致。其他离子的干扰Fe3+---加抗坏血酸。当使用盐酸超过1.0ml、氨试液超过2ml，以及用硫酸或硝酸进行有机破坏，或加入其他试剂进行处理者，对照溶液应取同样量试液蒸干后，依法检查。铁盐供试品，可利用Fe3+在比重为1.103-1.105的盐酸（盐酸9ml与蒸馏水6ml的混合液）中成为HFeC162-，可用乙醚提取而除去，再将酸性溶液加氨试液使呈碱性后，用氰化钾作为微量铁盐的掩蔽剂，再加硫化钠试液测定。§2一般杂质检查方法重金属检查法注意事项前处理需将药品灼烧破坏，使有机物分子中的重金属游离。灼烧时炽灼温度必须控制在500～600℃。其他标准铅溶液应在临用前精密量取标准铅贮备液新鲜稀释配制硫化钠试液应采用分析纯的硫化钠配制，贮存在棕色瓶中可保存1～2个月。含有Pb2+的中性或弱酸性溶液，如需过滤，可加入对酚酞呈微碱性的饱和醋酸铵溶液，温热后用直径较小的定量滤纸滤过，或者选用玻砂漏斗过滤。如供试品本身能生成不溶性硫化物时，影响重金属的检查，可加入适当的掩蔽剂。§2一般杂质检查方法砷盐检查：药品中微量砷（以As计算）的限量检查古蔡氏法基本原理①AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2O②AsH3+2HgBr2→2HBr+AsH(HgBr)2(黄色)（溴化汞试纸）AsH3+3HgBr2→3HBr+As(HgBr)3(棕色)※As(V)反应慢，须将As(V)还原成As(III)初生态的氢§2一般杂质检查方法砷盐检查：古蔡氏法AsO43-+2I-+2H+→AsO33-+I2+H2OAsO43-+Sn2++2H+→AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+→2I-+Sn4+4I-+Zn2+→[ZnI4]2-Sn2++Zn→Sn+Zn2+促进反应向右进行形成锌锡齐，有利于反应平稳的进行§2一般杂质检查方法砷盐检查：古蔡氏法古蔡氏法检查砷装置A:100ml标准磨口锥形瓶B:中空的标准磨口塞C:导气管(外径8.0mm，内径6.0mm)，全长约180mmD/E:具孔（孔径6.0mm）的有机玻璃旋塞HgBr2试纸醋酸铅棉60mg(装管高度6-8cm)§2一般杂质检查方法砷盐检查：古蔡氏法标准砷斑的制备①A瓶：标准砷溶液(1µg/ml)2ml+盐酸5ml+水21ml+KI试液5ml+酸性SnCl2试液5滴，室温10min②A瓶＋锌粒2g，接导气管C③25℃-40℃水浴45min检查法§2一般杂质检查方法砷盐检查古蔡氏法注意事项方法灵敏度约为0.75µg(以As计)。2ml标准砷溶液（相当于2µgAs）所形成的砷斑色度适中，清晰，便于辨认。酸度及各种试液用量反应液的酸度相当于2mol/L的盐酸液。含KI浓度为2.5%，SnC12浓度为0.3%，加入锌粒以2g为宜。反应温度和时间:25～40℃，时间为45分钟。锌粒选用2mm左右粒径(能通过一号筛)的为宜。汞试纸的选择选用质量较好，组织疏松的中速定量滤纸；溴化汞试纸一般宜新鲜制备。采用醋酸铅棉花吸收除去H2S。2000版药典规定称取60mg醋酸铅棉花，装管高度约80mm。§2一般杂质检查方法砷盐检查：古蔡氏法注意事项中药制剂的前处理：常用酸破坏法、碱破坏法及直接炭化法等使有机砷游离出来，以氢氧化钙破坏法较为常用。干扰物质：如硝酸、磷、锑化合物或硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐、碘、氯、汞、银、镍、钴、铜、铁、铋等的干扰。其他A所用仪器、试液等的影响B同一套仪器应能辨别出标准砷溶液1.5ml与2.0ml所呈砷斑的深浅。C标准砷溶液应于实验当天配制，标准砷贮备液存放时间一般不宜超过一年。D砷斑不稳定，反应应保持干燥及避光，并立即比较。E配制成的酸性氯化亚锡试液3个月后不宜使用。§2一般杂质检查方法砷盐检查：二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）基本原理※既可做限量检查，又可做含量测定。AsH3C2H5NSSHC2H5CSSAgAg63+AsC2H5NC2H5CSS+NCSSC2H5NC2H5C3+6红色胶态银§2一般杂质检查方法砷盐检查：二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）检查方法Ag-DDC5ml目视检测分光光度计,λ=510§2一般杂质检查方法砷盐检查：二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）注意事项吡啶(DL=0.5µgAs/30ml)有机碱液的选择三乙胺(0.75-7.5µg范围内,A∝C)温度和时间：25～40℃水浴，45min§2一般杂质检查方法铁盐检查法硫氰酸盐法(CP)原理Fe3++6SCN-→[Fe(SCN)6]3-检查方法供试品标准铁溶液方法灵敏度20-50µgFe3+/50mlH++H20至25ml,+稀HCl4ml,+(NH4)2S2O850mg,+H20至35ml,+30%NH4SCN3ml,+H20至50ml§2一般杂质检查方法铁盐检查法巯基醋酸法（EP）2Fe3++2HS·CH2COOH→2Fe2++HOOCCH2-S-S-CH2COOH+2H+Fe2++2HS·CH2COOH→Fe(S·CH2COOH)2+2H+Fe(S·CH2COOH)2+2OH-→[Fe(S·CH2COO)2]2-+2H2O§2一般杂质检查方法硫酸盐检查法SO42-+Ba2+→BaSO4(白色混悬液)（pH~1，25-30℃，+25%BaCl2)※适宜的浓度范围：100-500µgSO42-/50ml氯化物检查法Cl-+Ag+→AgCl(白色混悬液)（5mlHNO3/50ml，30-40℃，置暗处反应)※适宜的浓度范围：50-80µgCl-/50ml§2一般杂质检查方法干燥失重：药品在规定的条件下，经干燥后所减失的重量，包括水分及其他挥发性成分。检查方法常压恒温干燥（烘干法）--受热较稳定的中药制剂恒重：连续2次干燥后的重量差异不超过0.3mg干燥剂干燥–受热易分解或挥发的供试品硅胶，五氧化二磷，硫酸等干燥剂减压干燥—熔点低、受热不稳定及较难赶除水分的供试品§2一般杂质检查方法水分测定法烘干法—不含或含少量挥发性成分的供试品甲苯法--含挥发性成分的供试品减压干燥--含挥发性成分的贵重药品干燥剂：P2O5气相色谱法--散剂、颗粒剂、丸剂、片剂等各类型中药制剂中微量水分的测定费休法甲苯法装置§2一般杂质检查方法炽灼残渣检查法(硫酸灰分,EP)700℃－800℃+硫酸※取样量由炽灼残渣限量决定,一般1~2g※缓慢灼烧※将残渣留作重金属检查时,500℃－600℃灰分测定总灰分500℃－600℃灰烬+盐酸溶解过滤滤渣灼烧(+10%NH4NO3)酸不溶性灰分有机物→炭化，分解非挥发性无机杂质→硫酸盐§3特殊杂质检查方法特殊杂质：指在该药品的生产和贮存过程中，根据其来源、生产工艺及药品的性质有可能引入的杂质。大黄流浸膏中土大黄苷的检查取本品适量，加甲醇2ml，温浸10分钟，放冷，取上清液10µl，点于滤纸上，以45%乙醇展开，取出，晾干，放置10分钟，置紫外灯（365nm）下检视，不得显持久的亮紫色荧光。CHCHOHOCH3OHOgluOHOOHOHO大黄素土大黄苷§4农药残留量的检查常用农药有机氯类：艾氏剂、六六六、氯丹、DDT、狄氏剂等有机磷类：三硫磷、氯硫磷、蝇毒磷、内吸磷、敌敌畏、乐果等苯氧羧酸类除草剂：2，4-D；2，4，5-T氨基甲酸酯类：西维因（甲萘威）二硫代氨基甲酸酯类：福美铁、代森锰、代森钠、福美双等无机农药：磷化铝、砷酸钙、砷酸铅植物性农药：烟叶和尼古丁；除虫菊花提取物和除虫菊酯（合成除虫菊酯）；毒鱼藤根和鱼藤根其他：溴螨酯、氯化苦、二溴乙烷、环氧乙烷、溴甲烷。§4农药残留量的检查农药残留量的测定供试品的制备残留农药的提取提取溶剂：乙腈、丙酮提取方法：索氏提取法和振荡提取法样品纯化—液-液分配+柱层析分离检测方法—色谱分离法§4农药残留量的检查农药残留量的测定检测方法薄层色谱法气相色谱法和液相色谱法吸附剂展开剂显色剂有机氯农药硅胶G、氧化铝、硅胶GF254己烷、庚烷等硝酸银显色剂、芳胺类显色剂、荧光显色剂有机磷