流式淋巴细胞亚群检测技术原理

淋巴细胞亚群检测目录1淋巴细胞的分类2淋巴细胞亚群检测方法3淋巴细胞亚群检测原理4淋巴细胞亚群的免疫功能5淋巴细胞亚群的临床意义T淋巴细胞细胞免疫B淋巴细胞体液免疫NK细胞固有免疫淋巴细胞的分类淋巴细胞占外周血白细胞总数的20%-40%检测方法采用流式细胞术（FCM）是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞(或生物学颗粒)的理化特性进行多参数定量分析和分选的技术FCM检测对象：单细胞悬液或生物颗粒；检测参数：多参数；检测特点：单细胞水平分析；检测速度：高速，最高达上万个细胞/秒；检测结果：精度高、准确性好；可对目标细胞进行分选；荧光抗体直接标记第一抗体荧光二抗间接标记免疫荧光染色主要有两种方法。间接标记的方法难以进行多色标记，而且操作复杂，所以一般首选直接荧光染色检测原理常用荧光素499nm蓝色荧光（Blue）500-549nm，绿色荧光（Green）550-584nm，黄色荧光（Yellow）585-615nm，橙色荧光（Orange）616-700nm，红色荧光（Red）≥700nm，远红外荧光（Far-Red）常用荧光素荧光素分子激发光波长（nm）发射光波长（nm）中文名FITC488525异硫氰酸荧光素PE488575藻红蛋白PerCP490675多甲藻叶绿素蛋白APC633660别藻青蛋白PE-Cy5488670藻红蛋白-花青素5PE-Cy7488755藻红蛋白-花青素7黏附因子表面受体细胞因子分泌到胞外的细胞因子胞内抗原核酸含量核内抗原免疫荧光染色FCM可检测下列细胞成分：表面标记物胞浆标记物核内标记物可溶性成分联合CD45的四色方案第一种是用CD45/CD3/CD4/CD8做四色标记，主要可以检测T3细胞、T4细胞、T8细胞这三种不同的亚群CD45-FITCCD4-RD1CD8-ECDCD3-PC5联合CD45的四色方案第二种是用CD45/CD3/CD19/CD16和（或）CD56做第二管的标记，用于检测T3细胞、B细胞和NK细胞CD45-FITCCD56-RD1CD19-ECDCD3-PC5检测目的相互协作共同参与1功能比例数量T、B细胞相互作用主要检测项目淋巴细胞总T细胞T4细胞T8细胞NK细胞B细胞总T淋巴细胞CD3+T4细胞CD3+CD4+CD8-T8细胞CD3+CD8+CD4-B细胞CD3-CD19+NK细胞CD3-CD（16+56）+淋巴细胞的免疫标志总T细胞增高提示体内的T细胞免疫功能增强见于临床某些自身免疫性疾病（如SLE）、重症肌无力、慢性活动性肝炎、甲状腺功能亢进、淋巴细胞性甲状腺炎、器官移植排斥反应、T细胞性白血病等总T细胞降低提示体内的T细胞免疫功能减弱见于某些白血病、应用免疫抑制剂药、放疗过程中、先天性细胞免疫缺陷、艾滋病、多发性骨髓瘤、传染性单核细胞增多症，以及过劳等造成机体免疫功能处于相对较低的其他一些情况T细胞的三个功能性亚群效应分子亚群TCR配体作用靶目标应答类型表面表达分泌性CD4+抗原肽+胞内感染的CD40LIFN-,GM-CSF,TNF-细胞免疫Th1II类分子巨噬细胞FasLIL-3,TNF-,IL-2CD4+抗原肽+抗原特异性CD40LIL-4,IL-5,IL-10,IL-13,体液免疫Th2II类分子B细胞GM-CSF,TGF-CD8+抗原肽+感染病毒的FasL穿孔素,粒酶，IFN-,-细胞免疫CTLI类分子靶细胞TNF-,TNF-T4细胞增高提示体内存在细菌等病原微生物感染，主要见于临床各种细菌性感染性疾病。器官移植发生排斥反应支气管哮喘SLE活动期某些免疫增强药物的有效结果注意:昼夜变化（傍晚的峰值可为上午的两倍）T4细胞降低提示体内存在病毒等病原微生物，主要见于临床各种病毒感染性疾病，以HIV感染时减少最为明显T4细胞减少也可见于γ免疫球蛋白缺乏症、胸腺发育不良、严重联合免疫缺陷病、严重创伤、大手术等T8细胞主要功能：特异性直接杀伤靶细胞两条途径：一是分泌穿孔素、颗粒酶及淋巴毒素等直接杀伤靶细胞二是通过Fas/FasL途径诱导细胞凋亡。杀伤特点：连续性杀伤特异性杀伤MHC限制性T8细胞增高提示体内存在病毒或胞内寄生菌等病原微生物感染主要见于HIV、HBV、CMV、EB等病毒感染也可见于结核杆菌感染等T8细胞降低移植排斥反应可见于γ免疫球蛋白缺乏症胸腺发育不良严重联合免疫缺陷病糖尿病等T4/T8细胞比值增高是T4淋巴细胞增高或T8淋巴细胞减少所致见于某些自身免疫性疾病，如SLE、多发性硬化、器官移植排斥反应、自身免疫性溶血性贫血等T4/T8细胞比值降低是T4细胞减少或T8细胞增高所致见于艾滋病、再生障碍性贫血、某些白血病、传染性单核细胞增多症、免疫缺陷综合征、某些病毒感染、恶性肿瘤、结核病等一般来说，导致T4/T8比值倒置，以全身性、侵袭和破坏机体免疫系统的感染引起的倒置变化幅度最大临床抗感染治疗有效时，可以观察T4/T8细胞比值的逐步恢复T4/T8细胞比值临床意义器官移植受者免疫功能监测个体化免疫治疗疗效判断受者需要的是一种恰当的免疫抑制，将免疫功能控制在较低的一个范围内。需要经常性监测受者的免疫功能，T4/T8细胞比值是非常好的一个监测指标当受者T4/T8细胞比值出现小于0.2的情况时，必须立即停用免疫抑制药，等待免疫功能的适当恢复T4/T8细胞比值与肿瘤恶性肿瘤患者术前T4/T8细胞比值低，手术后比值恢复正常当发生癌转移时,T3、T4细胞数明显减少的同时T8细胞数明显增多T4/T8比值明显降低,提示恶性肿瘤患者晚期细胞免疫功能更低,预后更差①产生抗体②提呈抗原③免疫调节B细胞的功能B细胞增高提示机体体液免疫功能被增强此时体内高亲和力抗体的产生也增加见于临床各种细菌性感染B细胞增高也见于B细胞白血病B细胞减少见于原发及继发性免疫功能低下，临床可出现反复发作的呼吸道及消化道感染见于严重病毒性感染、使用免疫抑制剂制药等情况见于原发性B细胞缺陷病（如性联无丙种球蛋白血症）和重症联合免疫缺陷（T细胞同时缺如）体液免疫功能不良者则减少在生命垂危时可呈现极度减少自然杀伤细胞表面标记CD3-、CD56+、CD16+表面受体（1）杀伤细胞活化受体（KAR）结合靶细胞表面糖类配体，促使NK发挥杀伤作用。（2）杀伤细胞抑制受体（KIR）识别自身细胞表面MHC-I类分子，产生抑制信号无须致敏即直接杀伤靶细胞,抗感染与抗肿瘤,免疫调节NK细胞作用及效应机制抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ADCC）天然细胞毒性NK细胞介导的凋亡NK细胞产生的细胞因子NK细胞受体NK细胞通过ADCC作用杀伤病毒感染的靶细胞NK细胞杀伤靶细胞电镜图NK细胞NK细胞是机体抗某些病毒、细菌、寄生虫、真菌感染的重要免疫因素，NK细胞异常在病毒感染时尤其突出。NK细胞减少见于萨科奇病毒、脑心肌炎病毒、流感病毒、EB病毒、HSV-Ⅰ型等感染。NK细胞也参与Ⅱ型超敏反应和移植物抗宿主反应，IL-2治疗后外周血NK细胞数量增加。NK细胞NK细胞与肿瘤性疾病的发生、发展和转归密切相关一般而言，肿瘤患者NK细胞数量较正常人减少，且减少的程度与肿瘤病情的严重程度密切相关，病情好转，NK细胞数量回升因此，NK细胞数量是肿瘤临床病情判断、疗效监测的指标。淋巴细胞亚群检测适用人群肿瘤病人化疗过程中活动期的自身免疫病患者器官移植患者血液病患者（白血病）免疫功能低下患者（幼儿/老人/免疫抑制剂/抗精神药物/放化疗等）急慢性肝炎患者呼吸道感染患者胰岛素依赖型糖尿病患者谢谢大家！