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酶联免疫技术与食品安全快速检测姓名:陈超学号：201423104001目录ELISA概述ELISA的常用方法ELISA的应用一、ELISA概述酶联免疫吸附试验(ELISA)：是在免疫荧光和组织化学基础上发展起来的新技术。主要是利用抗原与抗体的高特异性反应，通过合适的载体，使酶标抗原或抗体与待测样品反应，形成酶标抗原抗体复合物，在相应的酶底物参与下，复合物上的酶催化底物使之水解成有色物质。一定条件下，呈色物质与待测物的含量直接相关，因此可以根据呈色物质颜色的深浅，对待测样品进行定性定量分析。基本步骤（以双抗体夹心法为例）包被：将Ab包被到酶标板上,进行洗涤封闭：封闭酶标板上的非特异结合位点加样：将标准品、样品、阴性及空白对照样品加入酶标板，洗涤加酶标抗体：加入酶标记的二抗，洗涤显色：加入底物，在酶作用下发生显色反应检测：检测有色溶液在490nm波长下的OD值结果分析：绘制标准曲线，分析受检样品浓度常用的标记酶有：辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化物酶、碱性磷酸酯酶等。这一类酶通常满足以下条件：具有较高的催化专一性和活性与抗原抗体偶联后不影响自身酶活性和抗原抗体的免疫活性催化反应的信号产物易检测价廉易得对人体无害二、ELISA的常用方法夹心法间接法测抗体竞争法双抗体夹心法测抗原双抗原夹心法测抗体竞争法测抗原竞争法测抗体（1）双抗体夹心法A.将抗体吸附于固相表面;B.加待检抗原，形成抗原-抗体复合物;C.加酶标抗体;D.加底物。底物的降解量与抗原量成正比。此法常用于检测抗原（2）间接法A.将抗原吸附于固相载体表面；B.加抗体,形成抗原-抗体复合物;C.加酶标二抗；D.加底物。测定底物的降解量与抗体量成正比。此法常用于测定抗体（3）竞争法测定抗原A.将抗体吸附在固相载体表面;B.同时加入酶标抗原和待测抗原，竞争结合抗体；C.加底物。底物降解量与未知抗原量成反比。此法既可用于检测抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体限量的抗体酶标抗原待测抗原酶标多于样品显色程度深样品多于酶标显色程度浅显色程度与待测物含量成反比包被加底物显色三、ELISA快速检测技术在食品安全检测中的应用实例水产品中残留氯霉素的测定氯霉素，是一种广谱抗菌素。氯霉素对骨髓造血机能有抑制作用，可引起血小板减少性紫癜、粒细胞缺乏症、再生障碍性贫血，腹胀、腹泻、食欲减退，口腔粘膜充血、疼痛、糜烂、口角炎和舌炎等。另外还可引起视神经炎、视力障碍、多发性神经炎、神经性耳聋以及严重失眠。检测原理：竞争法测抗原即游离氯霉素与氯霉素酶联记物竞争氯霉素抗体结合位点具体方法：酶标板包被有针对兔IgG（氯霉素抗体）的羊抗体。加入氯霉素抗体、氯霉素酶联记物、氯霉素标准或样品溶液。氯霉素抗体与固定的羊抗体结合。游离氯霉素与氯霉素酶联记物竞争氯霉素抗体结合位点。没有结合的氯霉素酶联记物在洗涤步骤中被除去。结合的氯霉素酶联记物将无色的酶底物转化为蓝色的产物，加入反应终止液后使颜色由蓝变成黄色。用酶联分析仪于波长450nm下进行吸光度测定。ELISA是测定水产品中氯霉素含量的一种好方法。由于酶的专一性催化作用，酶标板上多份样品同时检测，故操作简单，灵敏度，精密度较高，是测定水产品中氯霉素含量的一种好方法。目前用于食品安全性检测的方法有很多，常见的有：ELISA检测技术微生物学方法薄层色谱法气象色谱法高效液相色谱法PCR技术核酸探针技术（1）高灵敏度，可达到10亿万分之一甚至更低（2）高特异性（3）宽适用范围，可测定各类食品（4）低检测费用（5）易商品化应用前景