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动物传染病的诊断与鉴别技术刘金华1、动物传染病的特征与非传染病的鉴别2、动物传染病的临床诊断3、传染病的实验室诊断4、常见家禽疫病的鉴别诊断5、常见猪病的鉴别诊断主要内容1、传染病特征与非传染病的鉴别传染病的概念•由特定病原微生物引起的，有一定潜伏期和临床表现并具有传染性的疾病。•动物传染病不仅对养殖业危害严重，而且人畜共患的传染病给公共卫生安全带来威胁。传染病的特征•传染病是由病原微生物引起的。•传染病具有传染性和流行性。•被感染动物有一定的临床表现和病理变化。•感染动物机体可出现特异性的免疫学反应。•传染病耐过动物可获得特异性的免疫力。•传染病的发生具有明显的阶段性和流行规律。疾病传染病非传染病中毒病营养代谢病中毒病•毒物：生物的：植物毒如生物碱、毒蛋白；植物的加工制品、酒精、棉子饼等；真菌素毒、主要是发霉饲料；动物毒如蛇毒、蜂毒。化学的：化学杀虫剂、农药、鼠药；化学元素：氟、铅等；亚硝酸盐；医药物如抗生素、驱虫剂、呋喃类。物理的：有毒气体如CO、NH3。中毒病发病特点•突然有大批畜禽同时或相继发生相同的疾病、饲喂相同饲料均可发生，开始的病畜多为身体健壮、抢食的个体。•无传染性，无流行性，体温不高或有时稍高。•停喂或改换饲料可停息或不再发展。•某些中毒病呈有一定的区域性、季节或时间性，这是和引起中毒的原因，条件有关。如吃有毒植物，则依牧地植被、有毒植物分布地区为转移；饲料中毒常决定于地区的饲料来源、组成、调制方法和饲喂习惯等。•中毒疾病用抗菌素治疗无效，但可防止继发感染。营养代谢病•糖、脂和蛋白质代谢障碍。•矿物质和水、盐代谢紊乱。•维生素缺乏症。•微量元素缺乏症和过多症。营养代谢病的特点•无传染性，致病性不高。•一般发病慢，从缺某物质后几周或几个月突然发病。症状出现以后，有多个动物发病或死亡，具有群发病的性质，很易于传染病混淆。•发病率高，病势凶猛，具有地方性如碘、铜的缺乏，幼畜或高产的或生长快的动物表现最为明显。•一般早期诊断困难。•造成经济损失大，出现症状以后，治疗费用大，治疗缓慢。排除非传染病的方法1、过细地调查、了解和搜集有关的病史，发病经过，可能的致病因子等资料。2、仔细检查饲料的质量、饲料管理的方法、饲料环境条件、地区植被中有无中毒的植物以及采食情况等。3、全面地进行系统的临床检查。4、死亡动物的尸体解剖组织病理学诊断。5、实验室检查：（1）血、尿、粪常规的检查，血液生化的检查。（2）毒物检查与中毒病的复制。（3）饲料组成与饲料配合比例，维生素、微量元素、矿物质等的检查。6、将各方面的材料综合分析、去粗取精，去伪存真，以排除非传染性的治病因子。2、动物传染病临床诊断发病流行情况调查与分析寻找区分传染性和非传染性疾病的线索区别细菌性疾病和病毒性疾病：发病动物的用药史和用药时间动物群接种疫苗的种类及接种时间动物品种、数量，感染动物数量、年龄和性别首发病例和续发病例的日期分析可疑疾病的范围及流行情况调查传染病的传染来源探讨疫病传播的途径和方式了解防疫措施实施前后疫病发展动态临床症状诊断•患病动物通常表现出一系列的临床，利用感官或借助一些简单的诊疗器械如体温计、听诊器等，直接检查和记录患病动物的异常表现。•具有特征临诊症状如破伤风、猪气喘病易作出诊断。临床症状诊断的局限性非典型病例和混合感染病例，一般只能进行推测性的诊断。处于发病初期病例、慢性感染和隐性感染动物很难得出诊断结论。病理解剖学诊断•多数患病动物会表现出特有的病理剖检变化，这是传染病的重要特征之一，也是重要的诊断依据。•通过鉴别病理变化可以证实临床检查的结果，同时可根据某些特征性病理变化直接得出快速的诊断。典型猪瘟病理解剖学诊断局限性•有些病理变化不具有特征性，病理解剖学诊断只能作为缩小可疑疾病范围的手段，难以得出确切诊断。•发病早期患病动物或非典型化发病动物往往没有典型病理变化形成。3、实验室诊断实验室诊断•动物传染病确诊的主要手段•发现传染源最重要的方法•确定各种传播因素的作用•确定动物群易感性的重要方法（血清学）•传染病爆发和扑灭过程中具有重要意义•流行病学监测的重要方法样品采集•传染病的实验室诊断必须从动物群或其周围环境中采集样品，而疫病的种类和类型不同，采集的样品及其方法有很大差异，因此，采样时应了解其方法和注意事项。•活体动物采样应避免对动物产生不必要的损伤，采样过程中的应注意做好生物安全防护措施。血样采集•血样可用于培养或直接检查细菌、病毒或原虫，也可用于抗体检测。•血样分为抗凝血样、不抗凝血样和血浆。血样采集•采血应尽可能做到无菌，大型哺乳动物（牛、羊）可尾静脉或颈静脉采血；猪一般前腔静脉采血；禽类通常选择翅静脉采血；小型动物可耳静脉或心脏采血。•抗凝血样采完后立即振荡混匀；制作血清样品应室温静置1-2h，1000r/min离心10min，吸出血清。粪便样品采集•应选新鲜粪便。•可采集直肠或泄殖腔粘膜拭子，刮取黏膜表面时应小心，拭子应置于适当的培养基中运送。例如：用于流感病毒分离的泄殖腔棉拭子保存运输培养基：MEM培养基加入抗生素使其终浓度分别为，青霉素（2×107IU/L），链霉素（1×107IU/L），庆大霉素（100mg/L）、制霉菌素（100mg/L），多粘霉素B（100mg/L），磺胺（1000mg/L）。皮肤样品采集•有水泡病变的疾病，直接在病变部位采样，水泡液应取自未破裂的水泡；检查体表寄生虫或真菌应以解剖刀刮取深层皮屑；当怀疑有马立克氏病时，采集禽类新鲜的羽毛根部（成熟型MDV存在于羽毛囊上皮）。生殖道和精液样品采集•可取阴道或包皮冲洗液做样品，或合适的拭子采取，也可采集宫颈或尿道拭子。•通常需要专门运输培养液和条件。鼻液样品采集•可用棉拭子采取，有时拭子需要先用样品保存液润湿一下，以减少拭子对动物呼吸道损伤。•拭子与分泌物接触1分钟以上，置于合适的样品保存液，4℃送实验室。乳液采集•清洗和擦干乳头后采样，弃去头把奶液，采集以后的奶液装满试管。•用做血清学试验的奶不要冻存、加热、或强力震动。•必要时，做细菌学检查的奶样可冻存。尸检样品采集•采样人员应具备尸检技术和病理学知识，以便选择最适器官和最有价值的病灶进行采样。•采样前要备足盛样品容器、标签、记录纸。•如果检查人畜共患病，尸检应在生物安全室进行，做好个人防护措施。尸检样品采集•供微生物学检查的样品采集后应冷藏运输，如果样品24h内能送达实验室，可以在保温瓶中运送，如果48h内不能运送样品，应冷冻保存。但长时间-20℃冻存对病毒分离不利。•供组织病理学检查的组织块厚度不能超过0.5cm，置于至少10倍于组织样品体积的10%福尔马林缓冲液。样品标记•送检样品应将样品信息和病史资料一起送达实验室。这些信息包括：畜主姓名和通讯地址疑似疾病的种类样品种类、要求检测项目以及运输用的培养基动物品种、数量，感染动物数量、年龄和性别引进动物的时间、地点首发病例和续发病例的日期临床症状和病理剖检记录发病动物的用药史和用药时间动物群接种疫苗的种类及接种时间送检样品的清单和运送说明等样品包装和运输•确保样本包装安全，到达实验室时状况完好，运输途中无渗漏或交叉污染。•样品应以最快的方式交送实验室，如不能在48h内送达实验室，样品应低温保存运送，所用的容器需要垫上足够的缓冲材料，防止样品的包装容器损坏。样品长期保存•样品库：可以保存组织样品、血清样品、菌毒种等。其中贮存血清样品可能最有意义，可以利用保存的血清样品进行回顾性调查，比较现在和过去的疫情。•血清库：是保存血清样品的场所，每份血清样品要充分说明并编号，采取适当的保存方法减少血清免疫学和其他生化特性的丧失。实验室诊断的常用方法•实验室诊断经常使用的方法：病原学诊断、免疫学诊断、分子生物学诊断和病理组织学诊断等。•实际应用过程中，这些方法常交叉使用，互相取长补短。病原与抗体检测•病原本身检测•病原特有的蛋白质检测•病原特有的核酸片段检测•抗体检测（一）病原本身检测•针对病原本身，包括寄生虫的肉眼或显微镜观察、细菌的显微镜观察、病毒的电子显微镜观察、病原的分离鉴定等。涂片镜检或电镜检查•选择具有明显病变的组织、器官或血液、组织液涂片、染色镜检。本方法对一些具有特殊形态的病原微生物如炭疽杆菌、巴氏杆菌等引起的疾病可作出迅速诊断。附红细胞体炭疽杆菌细菌的分离鉴定•通过适宜的人工培养基或培养技术，将细菌、支原体、真菌等病原体从病料中分离出来，可根据不同的形态特征、培养特性、生化特性等作出鉴定。支原体形成的“煎蛋样”菌落大肠杆菌菌落（麦康凯琼脂）金黄色葡萄球菌溶血现象病毒的分离鉴定•病毒的分离通常采用细胞培养或鸡胚培养的方法。•分离的病毒一般都需要对病原的生物学特征、病原的蛋白质或病原的核酸进行分析鉴定。MDCK细胞感染流感病毒DF-1细胞感染白血病病毒（二）病原特有的蛋白质成分检测•病原特有的蛋白质检测通常采用免疫学检测技术，把病原特有的蛋白质当做抗原，用与其对应的抗体进行检测。•主要包括免疫组化技术、胶体金试纸条检测免疫组化技术•用标记的特异性抗体（抗原）对组织细胞内抗原（抗体）分布进行检测的方法。根据标记物不同分为免疫荧光组化技术、免疫酶组化技术、免疫电镜技术。免疫荧光组化免疫酶组化（三）病原特有的核酸片段的检测•利用分子生物学技术，建立对动物疫病病原基因的检测方法，用于动物疫病特异性快速诊断和病原基因变异与进化分析。•分子生物学检测技术主要有核酸探针技术、聚合酶链式反应(ＰＣＲ)、基因序列分析、等。（四）抗体检测•原理：对应的抗原（蛋白质）来检测样品中是否含有抗体。•种类：免疫沉淀反应免疫凝集反应血凝抑制试验中和试验补体结合试验固相免疫试验免疫沉淀反应•琼扩试验：某种抗原和对应的抗体分别自琼脂凝胶两个孔向外扩散，在相互接触的地方，由于抗原和抗体结合而形成肉眼可见的沉淀线。免疫凝集反应•细菌凝集试验：某种细菌作为抗原与对应抗体接触后，由于抗原抗体较强的结合力，使得原本分散的细菌被抗体交织成紧密的网状结构，形成肉眼可见的凝集。应用最广泛的是鸡白痢平板凝集试验。血凝抑制试验•流感、新城疫病毒等一些病原具有吸附某些动物红细胞的特性，这些病原与红细胞混合后，使得红细胞发生凝集，这种凝集可以被特异抗体抑制。中和试验•中和试验往往是针对病毒病的。某动物如果自然感染某种病毒，或人工接种疫苗，一段时间后此动物血清一般含有针对此病毒的特异性抗体。用其血清和此病毒按照一定比例混合后，可以使病毒失去感染细胞能力。是血清抗体检测的“金标准”之一。补体结合试验•抗体和特异性抗原结合后，抗体尾部隐藏的补体结合位点暴露出来，从而能够结合补体。补体结合到抗体上，能够发生相应的肉眼可见的生化反应。•血清抗体检测的“金标准”之一，但对技术要求较高。固相免疫试验•典型例子：酶联免疫吸附试验（ELISA）。•ELISA：抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。•用于临床检验的ELISA主要：双抗体夹心法测抗原、间接法测抗体、竞争法测抗体等ELISA原理示意图病理组织学诊断•经典诊断方法之一，主要通过显微镜观察组织切片中特征性显微病变和特殊结构，借以诊断不同的传染病。目前病理组织学诊断对某些病仍是最主要和可靠的诊断方法，例如狂犬病和牛海绵状脑病。狂犬病病毒在大脑神经元胞浆中形成的内基氏小体海绵状脑病4、家禽疫病的鉴别诊断一、引起体表外观异常的疾病冠症状和病变（一）发绀1新城疫冠和肉鬓常见充血和淤血斑，呈暗红或暗紫色。2禽霍乱冠和肉鬓发绀，呈黑紫色。3禽流感冠和肉鬓发绀（二）苍白1鸡传染性贫血全身性贫血，冠、肉鬓苍白。2蛔虫病冠苍白，雏鸡生长发育不良，成年鸡生产性能降低。3绦虫病贫血，有时可见粘膜黄染。4营养不良贫血，生长发育停止，发病慢，病程长，多为群发。（三）苍白萎缩淋巴白血病群病鸡消瘦苍白，成年大冠鸡则可见冠萎缩。（四）小结节鸡痘冠见大小不等的结节，皮肤无毛处亦可见。肉鬓