第八章--免疫学检测

第八章临床常用免疫学检测第一节血清免疫球蛋白检测免疫球蛋白（Ig）是具有抗体活性或无抗体活性而在化学结构上与抗体相似的球蛋白。因此，一切抗体都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白不一定都是抗体。Ig存在于机体的血液、体液、外分泌液和淋巴细胞膜上。根据免疫球蛋白功能和理化性质将其分为5类IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。一．免疫球蛋白G检测（IgG）IgG是人体含量最多和最主要的Ig（75%），是唯一能够通过胎盘的Ig，属于再次免疫应答抗体，正常情况成人高于儿童，女性略高于男性。[参考值]IgG：7.6-16.6g/L[临床意义]1.IgG增高：见于慢性感染、慢性肝炎、自身免疫性疾病、多发性骨髓瘤等2.IgG减低：见于各种免疫缺陷病，重链、轻链病肾病综合症、病毒感染、甲亢等二．免疫球蛋白A检测（IgA）正常人血清中IgA含量占血清总Ig的10%-15%IgA分为血清型IgA与分泌型（SIgA）两种。SIgA的免疫功能更重要，具有保护黏膜的功能，与局部感染、炎症、肿瘤等病变密切相关。[参考值]IgA：0.7-3.5g/L[临床意义]1.IgA增高：见于IgA型MM、慢性炎症、类风关、肝硬化、肾病等。2.IgA减低：见于呼吸道感染、非IgA型MM、重链、轻链病、、自身免疫病、原发和继发性免疫缺陷病。三．免疫球蛋白M检测（IgM）IgM是分子量最大的Ig（10%），以五聚体形式存在，它不能透过血管璧，主要分布在血管内，有防止败血症的发生的重要作用。人体感染之后，IgM是出现最早的抗体。[参考值]IgM：0.5-2.6g/L[临床意义]1.IgM增高：见于初期病毒感染、自身免疫病、肝硬化等2.IgM减低：见于IgA型MM、先天性免疫缺陷病、肾病综合症、免疫抑制剂治疗后等四．免疫球蛋白E检测（IgE）IgE是血清中最少的一种Ig。与变态反应、寄生虫感染及皮肤过敏有关[参考值]IgE：0.5-2.6g/L[临床意义]1.IgG增高：IgE型MM、重链病、肝病、自身免疫病、各种过敏性疾病、寄生虫感染等2.IgG减低：先天性和获得性丙种Ig缺陷病、恶性肿瘤、长期可的松治疗。血清免疫球蛋白（Ig）测定临床意义1.Ig减低见于各类先天性和获得性体液免疫缺陷、联合免疫缺陷的病人及长期使用免疫抑制剂的患者。2.Ig单项增高仅有某一种Ig增高而其他Ig不增高。主要见于免疫增殖性疾病。①浆细胞病；②过敏性疾病。3.Ig多项增高表现为IgG、IgA、IgM均增高。常见于各种慢性感染、慢性肝病、肝癌、淋巴瘤以及系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病。第二节血清补体检测补体(complement，C)是存在于人血清与组织液中的一组经活化后具有酶活性的糖蛋白，可被抗原抗体复合物或其他因素激活。激活后的补体表现出复杂的生物效应，既参与防御、免疫调控的正常免疫应答，也参与对组织的免疫损伤。补体含量的测定，对一些疾病的诊断、疗效观察具有重要意义。一、总补体溶血活性检测(CH50)主要反映补体经典激活途径的综合水平。1.CH50增高见于各种急性炎症、组织损伤和某些恶性肿瘤等。2.CH50减低（1）补体成分大量消耗：血清病、链球菌感染后肾小球肾炎、ＳＬＥ、类风湿性关节炎等（2）补体大量丢失：外伤、手术和大失血（3）补体合成不足：肝硬化、慢性肝炎和重型肝炎等补体溶血程度与活性相关，呈一特殊的S曲线一般以50%溶血作为检测终点（即CH50）二、血清C3测定无论经典途径还是旁路途径C3都参与，可反映出补体的活化情况。１．C3增高各种急性炎症、传染病早期、某些恶性肿瘤（以肝癌最明显）及排异反应等。２．C3降低肾炎的病因鉴别：链球菌感染肾炎血清C3减少，病毒性肾炎血清C3含量正常，还见于SLE、肝硬化、慢性肝病等。二、血清C4测定是补体经典激活途径的一个重要组分。１．C4增高各种传染病、急性炎症、组织损伤、多发性骨髓瘤等。２．C4降低自身免疫性肝炎、狼疮性肾炎、SLE、病毒性感染、肝硬化等。三、细胞免疫检测人类淋巴细胞是机体免疫系统中的一重要细胞群。根据其功能和来源、大致可分为T细胞、B细胞、NK细胞三大类。检测各群细胞的数量和功能的变化或异常，可帮助了解机体的免疫功能状况以及与免疫有关的疾病发病的机制、预后判断等。一、T细胞亚群的检测１．T细胞花结形成试验所得的百分率基本上代表了T细胞占淋巴细胞的百分率。升高：自身免疫性疾病及器官移植排斥反应等。降低：免疫缺陷性疾病等。２．T细胞转化试验转化率降低，见于细胞免疫缺陷或细胞免疫功能低下患者。３．T细胞分化抗原测定T细胞膜表面分子具有不同的抗原性，主要有CD2+、CD3+、CD4+、CD8+等。CD3+表达于所有成熟的T淋巴细胞表面，T细胞特有标志，反映T细胞总数的变化。CD3+又可分为CD4+、CD8+CD3+/CD4+→T辅助细胞（Th）CD3+/CD8+→T抑制细胞(Ts)[临床意义]淋巴细胞各亚群之间的互相制约和互相辅助作用是维持机体正常的免疫应答反应的保障。CD3+降低:自身免疫性疾病，如SLE、RACD3+/CD4+降低:恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、艾滋病、应用免疫抑制剂等。CD3+/CD8+降低:自身免疫性疾病、变态反应性疾病CD4+/CD8+比值增高：恶性肿瘤、自身免疫病，病毒性感染等CD4+/CD8+比值降低：艾滋病（＜0.5）二、B细胞分化抗原测定CD19+、CD20+、CD22+。CD19+是最重要的B细胞标记分子。升高见于B细胞系统的恶性肿瘤；降低见于体液免疫缺陷病及使用化疗或免疫抑制剂后。第四节肿瘤标志物检测肿瘤标志物是指能够区分肿瘤或非肿瘤的化学物质，包括肿瘤抗原、激素、受体、酶与同工酶、癌基因及其产物等百余种。甲胎蛋白（AFP）测定癌胚抗原（CEA）测定组织多肽抗原（TPA）测定前列腺特异抗原（PSA）测定癌抗原125（CA125）测定癌抗原15-3（CA15-3）测定（一）甲胎蛋白（AFP）测定参考值：血清＜25ug/L临床意义1.AFP是目前诊断肝细胞癌最特异的标志物，高于300ug/L诊断阈值。2.病毒性肝炎、肝硬化时，随着受损肝细胞的修复再生，幼稚化的肝细胞重新具有产生AFP的能力，但常低于200ug/L。3.妊娠及其他亦可高。（二）癌胚抗原（CEA）测定恶性肿癌患者的血清中可发现CEA含量异常升高。常用于诊断消化器官的癌症（结肠癌、胃癌、胰腺癌、转移性肝癌等）。（三）组织多肽抗原（TPA）测定TPA是一种非特异性肿瘤标志物，血清中TPA增高主要用于辅助诊断迅速增殖的恶性肿瘤，且在恶性肿瘤的疗效观察方面敏感性较高。（四）前列腺特异抗原（PSA）测定PSA是一种由前列腺上皮细胞分泌的蛋白酶，在前列腺癌时，前列腺腺管破坏导致血清PSA水平明显升高。（五）癌抗原125（CA125）测定CA125为一种糖蛋白性肿瘤相关抗原，存在于卵巢肿瘤的上皮细胞内，主要用于辅助诊断恶性浆液性卵巢癌等。（六）癌抗原15-3（CA15-3）测定CA15-3是一种乳腺癌相关抗原，对乳腺癌的诊断及术后随访临测有一定的价值。第五节自身抗体检测自身免疫耐受—在正常情况下，机体免疫系统对自身物质不产生或只产生微弱的免疫应答反应。自身免疫—而当机体免疫系统受到某些内因、外因等因素作用，产生针对自身抗原发生的免疫应答反应。自身免疫病—因自身免疫反应所致的疾病。自身抗体—由于自身免疫耐受的破坏，自身免疫性疾病患者体内产生针对自身组织、细胞及各种成分的抗体。自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志。每种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱。病人血清中存在高效价自身抗体是自身免疫病的特点之一。也是确诊自身免疫性病的重要依据。某些自身抗体因对疾病的判断具有高度特异性，已成为诊断相应疾病的血清特异性抗体。自身抗体的临床应用一、类风湿因子（RF）的检测RF是一种抗变性IgG自身抗体，主要是IgM，存在于类风湿性关节炎患者的血清中和关节液内。RF与体内变性的IgG结合形成免疫复合物后致组织炎性损伤，发生骨关节炎及血管炎。[参考值]增强免疫比浊法:＜20[临床意义]类风湿关节炎患者的阳性率为70%。SLE为30%。其他结缔组织病也有一定的阳性，如多发性肌炎、硬皮病、干燥综合征等。抗环瓜氨酸肽抗体测定（CCP）类风湿关节炎（RA）是世界性、终身性、系统性疾病,致残率很高。为减少致残率并提高患者的生活质量,关键在于对不典型的、早期的RA患者进行早期诊断和早期治疗。[参考值]定性：阴性定量：待确定（ELISA）[临床意义]抗CCP抗体对RA的诊断有高度的特异性，可用于RA的早期诊断。目前认为抗CCP诊断的特异性为96%，早期的RA患者阳性率可达80%.二、抗核抗体检测（一）抗核抗体测定抗核抗体（ANA）是一组将自身真核细胞的各种细胞核成分为靶抗原的自身抗体的总称，主要是IgG。并无器官和种族的特异性。试验多用鼠肝片作为抗原，通过间接荧光法可检出四种荧光核型：均质型、核膜型、颗粒型、核仁型。ANA检测在临床诊断与鉴别诊断中是一个极为重要的筛选试验。绝大多数自身免疫性病均可呈阳性。(二)可提取性核抗原（ENA）抗体谱测定ENA是可提取性核抗原的总称。抗ENA抗体是针对细胞核中可提取性核抗原的自身抗体，约有十余种，主要有ds-DNA、Sm、RNP、SSA、SSB、Jo-1、Scl-70等。不同的自身免疫性疾病可产生不同的抗ENA抗体。根据ENA抗原分子量及抗原特性不同对其进行检测，如免疫印迹技术(IBT)。免疫印迹技术测定抗核抗体谱临床意义•抗Sm抗体SLE•抗RNP抗体混合性结缔组织病（MCTD）、SLE•抗SS-A抗体干燥综合症(PBC)、SLE•抗SS-B抗体PBC(女性患者)、SLE•抗Scl-70抗体进行性系统性硬化症•抗着丝点抗体局限型进行性系统性硬化症•抗PM-1抗体多发性肌炎、进行性系统性硬化症•抗JO-1抗体多发性肌炎，常与合并肺纤维化相关•抗核仁抗体进行性系统性硬化症、类风湿（三）抗DNA抗体测定•抗双链DNA（dsDNA）•抗单链DNA（ssDNA）[临床意义]抗dsDNA抗体对SLE具有很高的特异性。除Sm抗体外，抗dsDNA抗体也可作为该病的一个血清学指标，阳性率70%-90%;也见于风湿病患者。（四）抗胞质和抗组织抗体检测１．抗线粒体抗体（AMA）——是一组以线粒体为靶抗原的自身抗体，主要是IgG。阳性主要见于原发性胆汁性肝硬化。２．抗甲状腺球蛋白抗体（ATG）——是诊断甲状腺自身免疫性疾病的一个特异性指标。３．抗甲状腺微粒体抗体（ATM）——阳性主要见于桥本甲状腺炎。４．抗平滑肌抗体（ASMA）——阳性主要见于自身免疫性肝炎（如狼疮性肝炎）、原发性胆汁性肝硬化、急性病毒性肝炎等。（五）肝脏相关自身抗体检测１．抗肝、肾微粒体抗体（LKM）——阳性主要见于自身免疫性肝炎、慢性丙肝２．抗可溶性肝抗原抗体（SLA）——对Ⅲ型自身免疫性肝炎的诊断和鉴别诊断具有重要价值25%自身免疫性肝炎该抗体阳性，可用于指导临床治疗。第六节感染免疫检测一、细菌感染免疫检测（一）血清抗链球菌溶血素“O”试验（ASO）抗链球菌溶血素“O”是机体感染溶血性链球菌后产生的相应抗体，升高提示曾有溶血性链球菌感染。正常人ASO＜200UASO升高常见于A群溶血性链球菌感染及感染后免疫反应所致的疾病，如活动性风湿热、风湿性关节炎、风湿性心肌炎及链球菌感染后急性肾小球肾炎等。（二）伤寒和副伤寒沙门菌免疫测定肥达（Widal）反应检测伤寒抗体。参考值：伤寒O＜1：80H＜1：160副伤寒甲、乙、丙＜1：80在病程中逐周复查，若抗体效价依此递增或恢复期较急性期升高4倍或以上，则有诊断意义。•O升高，H升高—伤寒感染的可能性大；•O升高，H不升高—可能是伤寒类感染的早期；•H升高，O不升高—可能是预防接种或是非特异性的“回忆反应”。（三）结核分枝杆菌抗体（TB-Ab）和DNA测定TB-Ab阳性，表示有结核分枝菌感染，其灵敏度90%、特异性85%，比传统的痰涂片和细菌培养方法简便、快捷、灵敏。PCR检测DNA特异性更强、灵敏度更高。（四）幽门螺杆菌抗体（HP-Ab