Nanodrop_2000微量紫外分光光度计中文操作守则

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资源描述

Nanodrop2000独特的创新设计包括:1、微量的样本检测体积-专利液体表面张力技术,仅需0.5ul的样本。2、快速、简单的样本处理-大多数样本无需稀释,直接上样。3、快速的检测时间-不到5秒钟即可得到完美的检测结果。4、更宽广的光谱范围-190-840nm,可以测定低波长下的蛋白广吸收。5、更高的样本浓度检测范围-检测上限高达15,000ng/ul(dsDNA)一、简介NanoDrop2000超微量分光光度计是NanoDrop的最新产品,应用液体的表面张力特性,样品体积只需要0.5~2ul,在侦测台上,经上下臂的接触拉出固定的光径达到快速、微量、高浓度、免石英管、免毛细管等耗材侦测吸收值的优点。它使用高能量氙灯(pulsedxenonflashlamp)可提供190~840nm的全光谱侦测,且不需要暖机,开机后立即使用。搭配高感度CCDarray侦测器,侦测吸收值可高达300Abs(dsDNA浓度2~15000ng/ul),大部分纯化后的核酸几乎都不需要稀释即可侦测。待测样品的均质性是NanoDrop2000的最高要求,一般核酸、蛋白质样品能在侦测前以vortexmixer震匀为最佳,若无vortexmixer也应以pipette吸放数次混匀。若担心genomicDNA可能因前述动作而断裂,则改以55?C加热约一分钟,使样品在侦测前呈现均匀状态,以确保2ul具有代表性。侦测时选择不同侦测模式,可以得到最快速的结果:●NucleicAcid–吸收光谱、230nm,260nm,280nm吸收值(换算成10mm光径吸收值)、260/280ratio、260/230ratio及核酸浓度。●UV-Vis–190~840nm间所有波长的吸收值及光谱(以1mm光径吸收值呈现)。●A280蛋白质定量法–280nm吸收值(换算成10mm光径吸收值)、260/280ratio及蛋白质浓度。仅适用于纯化后的蛋白质,须具有已知的质量消光系数(massextinctioncoefficient)方可计算。●BCA、Bradford及Lowry–依不同呈色剂提供不同波长吸收值结果,自动画出标准曲线并计算Rsquare,待测蛋白质浓度。*蛋白质侦测模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三种常见定量呈色剂,因呈色剂随时间会逐渐加深,使用前请详阅试剂说明书并制备不同浓度的标准品,在最佳时间内完成侦测,以得到良好的标准曲线。每个标准曲线最多可有七个标准品,每个标准品最多可做五重复。*测蛋白质时样品体积需使用2ul,每个样品侦测后需以labwipe擦拭15~20回,以避免呈色剂与蛋白质的残留。二、技术参数:1、波长范围:190-840nm;2、波长精度:1nm;3、分辨率:1.8nm(FWHMatHg253.7nm);4、其它:1mm光程长度(可自动调整到0.05mm);5、检测下限:2ng/μl(dsDNA);6、检测上限:15000ng/μl(dsDNA);7、吸光率精确度:0.002absorbance(1mm光程);8、吸光率准确性:2%(at0.76at257nm);9、吸光率范围:0.02-300(相当于10mm光程);10、核酸检测周期:5s;11、体积:14cm×20cm。三、使用方法举例:dsDNA:在主画面点选NucleicAcid,计算机与仪器自动完成联机。依照DNA所溶于之液体准备该溶液(务必确认DNA溶于二次水、TEbuffer或哪一组kit的elutionbuffer)取出1.5ul点在侦测台上,放下上臂后再按Blank。在右上方拉选SampleType选DNA-50,在SampleID位置输入样品名称,将样品混匀,取出1.5ul点在侦测台上,放下上臂后再按Measure。四、结果整理:NanoDrop2000软件在侦测一开始会询问档案欲存至何处,若未指定,则档案会存在上一个使用者的档案内。゚

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