实验五虎杖中羟基蒽醌的提取分离与鉴定

参考书：《现代中草药成分化学》吴寿金，赵泰等中国医药科技出版社《中草药有效成分提取与分离》徐任生，陈仲良上海科技出版社实验五虎杖中羟基蒽醌的提取、分离与鉴定•一、实验目的•二、实验原理•三、提取实验•四、分离实验•五、鉴定方法•六、结果与讨论一、实验目的•掌握蒽醌类化合物的提取分离方法及原理•掌握低压柱层析分离技术及薄层层析鉴定•了解反相色谱的原理及方法及制备色谱的原理二、实验原理•利用化合物的酸性不同进行分离•利用吸附色谱原理进行分离•利用反相色谱进行分离化合物结构比较•1、大黄素（Emodin）•2、大黄酚（Chrysophanol）•3、大黄素6-甲醚，（Emodinmonomethlether）•4、大黄素6-甲醚6-D-葡萄糖苷（AnthraglycosibeA）OHHOOHCH3OOOHOHCH3OOOHOHCH3OCHOO3OCH3OOHOOCH3glu大黄素大黄酚大黄素6-甲醚大黄素6-甲醚6-D-葡萄糖苷羟基3个羟基2个羟基2个羟基1个实验设计游离蒽醌分离•（1）、强酸性成分的分离：总蒽醌的乙醚液＋加5%碳酸氢钠水溶液萃取得强酸性成分：大黄素和大黄酸。•（2）、中等酸性成分的分离：碳酸氢钠萃取过的乙醚液用5%碳酸钠溶液萃取得大黄酚和大黄素6-甲醚混合物。•（3）、中性成分——甾醇类化合物分离：氢氧化钠萃取过的乙醚液，得中性成分•（4）、强酸性成分的反相分离：取（1）分离得到的强酸性部分15mg，溶于甲醇中，用中压色谱或制备色谱分离制备，色谱条件：ODS柱或ODS填料，流动相：甲醇：水为75：25，与标准品进行对比实验。三、提取实验•乙醇总提取物的制备•虎杖粗粉200g，1000ml圆底烧瓶回流•500ml乙醇•300ml乙醇•250ml乙醇•回流30分钟，合并减压回收四、分离实验•1、亲脂性成分与亲水性成分的分离•2、游离蒽醌分离•（1）强酸性成分的分离•（2）中等酸性成分的分离•（3）中性成分甾醇类化合物分离•（4）强酸性成分的反相分离基本操作•低压柱层析分离技术柱层析分离的一种应用广泛第一步装柱硅胶浸泡于石油醚中搅拌均匀一次性倒入柱中装柱预先加入溶剂装柱一次性倒入装柱敲打均匀紧密第二步拌样•样品10mg溶于溶剂中，全溶•加拌样硅胶100－150目1:1-1.5•搅拌均匀至干•必要时旋蒸至干拌样溶解搅拌至干第三步上样•均匀加到柱中第四步洗脱与接收•用不同比例的石油醚和乙酸乙酯进行梯度洗脱•每个极性洗脱3－5个保留体积•每个保留体积接收10－20份馏分•整个过程加低压第五步浓缩浓缩方法•溶剂浓缩•自然挥干•减压浓缩•冻干第六步薄层鉴定•吸附剂：硅胶—CMC•展开剂：C6H6—EtoAc(3:2或97：9)•显色剂：（1）氨蒸气熏。（2）5%KOH喷雾虎杖亲脂性成分与亲水性成分的分离•膏状物加水10ml，乙醚100ml充分振摇后放置•将乙醚液倾于500ml三角瓶中•再于烧瓶中加50ml乙醚振摇，放置，倾出乙醚液•同法操作六次•合并乙醚液即为亲脂性成分——总游离蒽醌游离蒽醌分离•强酸性成分的分离总游离蒽醌的乙醚液置100ml分液漏斗中加5%碳酸氢钠水溶液40ml萃取，分出碱水溶液同法提取二次碱水提取液，加6N盐酸调至pH2放置即可析出沉淀，抽滤，用水洗涤沉淀至中性，干燥主要成分：大黄素和大黄酸游离蒽醌分离•中等酸性成分的分离碳酸氢钠萃取过的乙醚液用5%碳酸钠溶液萃取5～9次，每次40ml合并碳酸钠提取液加盐酸调至pH3放置，抽滤，抽干，称重主要成分：大黄酚和大黄素6-甲醚大黄酚和大黄素6-甲醚的分离•正相硅胶方法•低压柱层析•石油醚-乙酸乙酯洗脱•薄层鉴定五、鉴定方法•1、化学检识•2、薄层鉴定•3、波谱学鉴定NMR、IR、MASS等鉴定方法•1、化学检识•分别取大黄素、大黄酚等少许，用乙醚溶解，做如下反应：•（1）碱液试验：取试液1ml，加20%NaOH数滴，观察颜色。•（2）醋酸镁反应：取试样1ml，加醋酸镁试剂数滴，观察现袋。•2、薄层鉴定•吸附剂：硅胶—CMC•展开剂：C6H6—EtoAc(3:2或97：9)。•显色剂：（1）氨蒸气熏。（2）5%KOH喷雾六、结果与讨论•从虎杖中提取、分离、纯化蒽醌类化合物的原理是什么？•反相色谱与正相色谱的区别是什么？•反相中压色谱适合于什么样化合物的分离？•低压色谱柱层析要点有哪些？谢谢！