5.常见微生物标本的采集、保存与送检

2020/1/251常见微生物标本的采集、保存与送检茂名市CDC流行病学培训班麦充志2011、32020/1/252碗与筷子的关系2020/1/253标本采集采集时间----何时采采集种类----采什么采集方法----怎么采采集数量----采多少2020/1/254怎么采样品采集程序采样用物品准备采样程序方法采样记录样品编号样品保存样品送检2020/1/255采多少所有标本在采集时立即分装，一式N份(不同检验项目、重复实验、其它实验室复核、留样)2020/1/256样本采集的一般需要量样品种类检验目的样品量饮用水全分析及致病菌5l液体食品致病菌或毒物分析可疑食物200ml固体食品致病菌或毒物分析可疑食物200g呕吐物致病菌或毒物分析50g(ml)洗胃液致病菌或毒物分析200ml腹泻物致病菌或毒物分析50g(ml)血液病原分离、抗体分析5ml脑脊液病原分离2ml皮损分泌物病原分析灭菌生理盐水浸泡棉签涂取2020/1/257标本标签内容–最小包装（每个标本）–每个包装箱–每批样本后要附上一个样本清单，详细列出此批样本的名称、状态和注意事项。2020/1/258–样本编号——唯一性–样本来源——从什么物质、材料中采集的，如病理采集的肝脏就可标注为某某患者肝脏–样本数量——包装中样本的数量，如：此包装中同时采集了2块肝脏样本，就要标注为2–采样时间：–采样地点：–采样人：–样本处理情况：抗凝剂、运送培养基、标本状况（开封食品）2020/1/259标本的保存、包装、运送样品的保存—容器、介质、温度样品的包装—感染性样本样品的运送—标本应由专业人员专人运送，最好使用专车交接手续2020/1/2510怎么检对重大事件的毒物鉴定或样本检测要同时送数家具有鉴定检验资质的实验室同步开展工作，避免因实验室管理和技术因素对结果的影响。2020/1/2511要达到有效控制疫情的目的，必须做到早期发现和报告可疑病例；快速的流行病学调查；实验室对病原体的快速确诊；实施有效的控制措施。2020/1/2512实验室诊断的目的意义识别暴发、确定病因确定传染来源确定流行范围确定传播链发现特殊的毒株判断院内交叉感染疫苗实施项目的考核仲裁依据2020/1/2513实验室对病原体的快速确诊依靠技术和试剂储备充分收集适当的、足够的标本正确的包装和快速运送到实验室适当的生物安全和消毒措施，以减少疾病进一步扩散的可能。2020/1/2514围绕病因假设,确定检验项目，采集标本专业知识、经验充分物质准备高度的责任心2020/1/2515在去现场之前，应考虑到以下的问题在进行临床和流行病学信息评估时，需考虑引起暴发的潜在病原体；地方性疾病谱和流行季节谱可进一步缩小可能的因素；同时还必须考虑到多种病原体感染可出现相似的临床表现，因而需要采集多种类型的标本用于定义暴发的原因。2020/1/2516采样基本原则尽早采集、根据可疑的病原体，选择不同采集时机和标本种类、在抗生素应用前采集、遵守无菌操作、正确保存和运送。容器应密封不易碎，标本不得污染容器的口和外壁。2020/1/2517标本种类和采集时间血液标本全血标本采集血清标本采集第一份血清应尽早（最好在发病后7天内）采集第二份血清应在发病后第3～4周采集在病愈出院或死亡前采集血标本1份2020/1/2518血液标本的采集目的：血培养、分离血清血培养：怀疑是细菌性疾病，特别是脑膜炎或疑似菌血症的病人均要抽血。在病人高热时可采取静脉血3ml，注入双相血培养瓶（也可用盛有30ml葡萄糖肉汤的三角瓶）内增菌培养。分离血清用于抗体检测。在疾病急性期和恢复期各采血2-3ml2020/1/2519血培养瓶含有0.025%SPS（聚茴香脑磺酸钠sodiumpolyanetholsulfonateSPS），可以起到抗凝、抗吞噬、抗鳌合的作用；还含有树脂、炭颗粒，可吸收血液中的抗生素，提高细菌培养的阳性率。血量3ml时，将血分别放入两个血培养瓶，若瓶子装血太多将降低降低阳性率。2020/1/2520用真空负压采血管采集血液标本5ml，室温静置30分钟，1500～2000rpm离心10分钟，收集血清于2ml无菌螺口塑料管中2020/1/2521标本种类和采集时间呼吸道标本上呼吸道标本：咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、深咳痰液下呼吸道标本：呼吸道抽取物、支气管灌洗液、肺组织活检标本尽早采集上述标本，发病一至两周也可采集2020/1/25222020/1/2523呼吸道标本2020/1/2524拭子的选择应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做柄。不推荐棉拭子和木柄。2020/1/25252020/1/2526急性呼吸道综合症的可疑暴发可能的病原体白喉链球菌性咽炎猩红热汉坦病毒肺综合症百日咳嗜血流感杆菌呼吸道合胞病毒肺链军团肺炭疽肺鼠疫支原体喉拭子血清血清鼻咽拭子血清血培养血清痰、尿肺泡灌洗液流感禽流感咽拭子气管吸取物血清2020/1/2527需要准备的材料运送培养基、拭子、压舌板消毒的螺旋盖管、真空采血管、5ml注射器75%酒精、压脉带、记号笔等。2020/1/2528运送培养基的选择维持活力，不增菌的非营养性半固体培养基Stuarts,Cary-Blair,Amies,STGG四种主要的运送培养基。2020/1/2529127CSoftaluminumwire-greencap软金属，易弯曲.143CRegularaluminumwire-orangecap男性尿道拭子139CDoubleplasticswabs-redcap咽拭子、阴道拭子、伤口和皮肤2020/1/2530195CFlexibletwistedwire-bluecapDesignedspecificallyfornasopharyngealsampling.Veryflexible,willbendandyieldwhenincontactwithposteriornasopharyngealwall.Featuresasafeloopshapedwiretipcoveredwithsoftrayon.鼻咽拭子标本2020/1/25312020/1/2532Stuarts——主要成分甘油磷酸钠硫代硫酸钠氯化钙亚甲兰琼脂炭粉2020/1/2533Stuarts运送培养基2020/1/2534Cary-Blair运送培养基克服在运送肠道菌时，因这些菌含有甘油磷酸脱氢酶，造成低度氧化，使细菌能代谢而生长。特别适合于运送含弧菌的标本。研究显示，在28℃情况下，Cary-Blair可维持弧菌活力22天，沙门氏、志贺氏菌49天；70～80℃副溶血弧菌可达35天。2020/1/2535Cary-Blair运送培养基2020/1/2536100株菌Stuart'sAmies时间菌株存活数菌株存活数24小时919848小时798772小时5677Amies运送培养基---Stuarts的改良产品（含活性炭）用磷酸盐缓冲液代替甘油磷酸钠等2020/1/2537STGG运送保存培养基(Skim-milktrytoneglucoseglycerol,STGG）脱脂牛奶粉（Difco）2g胰酶大豆肉汤(TSB,Oxoid)3g葡萄糖0.5g甘油10ml消毒蒸馏水100ml2020/1/2538鼻咽拭子插入STGG培养基后，可立即冻存标本。报告显示，置冰上几小时后再放置-70℃，肺炎链球菌、嗜血流感杆菌的活力仍能维持，在-20℃环境可达8周。置于-70℃的STGG中保存的鼻咽分泌物，其肺炎链球菌的分离率与直接接种平板相似，保存于-20℃分离率亦可接受,而4℃环境保存5天，分离率不理想。STGG运送保存培养基2020/1/2539需要采集的标本上呼吸道感染：鼻咽拭子咽拭子血下呼吸道感染：痰标本支气管灌洗液胸液血2020/1/2540上呼吸道可能的致病菌β-溶血性链球菌：A、B、C、G群链球菌等；肺炎链球菌、嗜血流感杆菌、金黄色葡萄球菌；白喉棒状杆菌、百日咳等2020/1/2541下呼吸道感染性疾病可能的致病菌肺炎链球菌嗜血流感杆菌肠球菌肺炎克雷伯氏菌β-溶血性链球菌军团菌百日咳菌属金黄色葡萄球菌脑膜炎奈瑟氏菌属假单胞菌肺炎支原体肺炎衣原体2020/1/2542咽拭子的采集对健康人群或病人密切接触者进行带菌检验时一般采咽拭子。用无菌棉拭子擦取悬雍垂后之鼻咽部粘膜数下，应避免接触口腔内其它部分，直接接种到巧克力双抗平板或0.5%葡萄糖增菌肉汤中。2020/1/2543干采用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含3ml采样液的螺口管中，尾部弃去，旋紧管盖。2020/1/2544咽拭采集的正确与否？wrongright2020/1/2545鼻拭子的采集将1根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。取另一根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子以同样的方法采集另一侧鼻孔。上述两根拭子浸入同一含3ml采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。2020/1/2546鼻咽抽取物或呼吸道抽取物的采集用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取呼吸道分泌物。将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出，收集抽取的粘液，并用3ml采样液冲洗收集器1次（亦可用小孩导尿管接在50ml注射器上来替代收集器）。2020/1/2547咽漱液的采集用10ml不含抗菌素的采样液漱口。漱口时让患者头部微后仰，发“噢”声，让洗液在咽部转动。然后将咽漱液收集于50ml无菌的螺口塑料管中。无条件的可用平皿或烧杯收集咽漱液并转入10ml螺口采样管中。2020/1/2548深咳痰液的采集要求病人深咳后，将咳出的痰液收集于50ml含3ml采样液的螺口塑料管中2020/1/2549呼吸道灌洗液的采集将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管（约30cm深处），注入5ml生理盐水，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液涮洗收集器1次（亦可用小孩导尿管接在50ml注射器上来替代收集）2020/1/2550常用的病毒采样保存液成分pH7.0～7.6的Hanks液或MEM/DMEM液或生理盐水。在采样液中需加入抗菌素，可用青霉素（终浓度为100U/ml）、庆大霉素（终浓度为1mg/ml）和抗真菌药物（终浓度为2µg/ml）2020/1/2551病毒采样盒咽拭子器具2020/1/2552出血点渗液接种0.5%葡萄糖增菌肉汤或直接接种含双抗巧克力平板和血平板接种增菌肉汤或直接接种巧克力平板和血平板咽拭子血液接种血培养瓶分离血清检测IgG涂片G染色2020/1/2553患者站立或床上坐直，在收集前嘱咐患者用开水含漱口腔；深呼吸，从深部咳痰，将痰吐入已消毒的广口螺旋盖管（25～50ml）内；痰量1-2ml，如不足，应重复上述步骤。痰标本的采集2020/1/2554接种培养板的选择根据所要检测的目的菌而定，一般选择两种平板：血平板和巧克力平板链球菌属：新鲜绵羊血（或马血）平板奈瑟氏菌属：巧克力平板（CAP），不含抗生素嗜血流感杆菌：含300µg/ml的杆菌肽的巧克力平板2020/1/2555标本种类和采集时间肠道标本粪便标本采集肛拭标本采集发病后尽可能早的采集标本粪便标本采集2020/1/2556肠道标本的采集采集5～10g粪便或采集肛拭子标本置于含3～10ml无菌采样液的螺口管中，严格密封2020/1/2557肠道标本的采集用具2020/1/2558脑脊液标本的采集正常人的脑脊液是无菌的。以无菌手续通过腰椎穿刺采集脑脊液3-5ml，应立即送检或床边接种。应在35℃保温运送。2020/1/2559脑脊液(CSF)CSF一经采集，就应尽快送到实验室，运送过程中，标本应置于18～37℃的环境，不要暴露于阳光下或冷冻保