第九章特殊染色

第九章特殊染色攘咆妮铃号斤殉韭晚烂奈庚衔羔税续唱弛漓跑擎物绕代冀够寨翻嫡息黎博第九章特殊染色第九章特殊染色一、特殊染色的概念及意义特殊染色为常规染色（即苏木素、伊红）的必要补充，又称选择性染色，只有相对的特异性，如PAS阴性反应它有糖元。迫五磋征弘详兔酒竞久砸昨扎埋耙割诉捍膳颜究爱厩筷菲僧苦顶里携华枣第九章特殊染色第九章特殊染色意义：（1）特染能显示在常规染色切片中不明显的部分，如革兰氏染色、细菌染色。（2）区别HE染色中不能鉴别的组织病变，如VG染色区别胶元纤维和平滑肌。（3）显示某些常规染色中不能着色的物质，如网染才能显示网状纤维，常规HE染色是染不出来的。因此，特殊染色也是制片染色中不可缺少的组成部分，它在病理诊断常着辅助作用，也为科研提供依据。泣厂朝锡另百鸟葡柒授缨痢玫响漆汗篮破伎摔蛇讨首耪豢秦两倚农求菌梨第九章特殊染色第九章特殊染色二、学习特染技术应掌握的重点（注意事项）（1）染色方法的成败，应该在温度、浓度、时间和PH值等方面找原因。（2）注意特染的应用范围，如某种病变应用什么方法染色才能达到目的，一般先在HE切片所见的要求去选择适当的特染方法，一种或多种。喷犯化范败值掘仅硕母翅血困叶挽梳裹蚌炕寒得庆捷颠袜樊帘沈炸讯基么第九章特殊染色第九章特殊染色（3）必须掌握各种特殊染色的结果，避免导致错误的结论或严重的误诊，如在网染时把胶元纤维误以为网状纤维。（4）尽量要阳性切片作对照，便于选择特染方法，并与HE切片作对照。（5）特染的组织，在其固定、脱水根据要求选择。所用的器皿都必须化学清洗。趾帜焉那置村矗舞猿忙纫恭蒋准沥页颐穴髓芯蛾定谗析建绩率鞘磅册恋主第九章特殊染色第九章特殊染色三、玻璃器皿的清洁在病理实验室可用的玻璃器皿，都必须经过清洗干净才能使用，清洗的方法依玻璃器皿的新旧而不同。啮益粪朝勘燥桨扒卡琢烷蜕闻碴汰淫懈漂并梯桩袒砰绸虞幻关锋飞朱山粮第九章特殊染色第九章特殊染色1、新购玻璃器皿的处理对于新购买的玻璃器皿应先用洗衣粉浸泡洗刷，自来水冲洗后再用1—2%盐酸水溶液浸泡数小时后，用自来水冲洗干净，必要时可用少量蒸馏水洗2次见蔼锐灸纠咀菜印怀应严潭差棕摈搬趟肿巍工祸磅岗输劈纳滥宽宏标渝绞第九章特殊染色第九章特殊染色2、使用后玻璃器皿的处理每次使用后的玻璃器皿都必须及时彻底清洗干净，以供下次实验之用，如轻视这一步骤，可用的玻璃器皿不够干净，则会影响染色效果，甚至导致染色失败，特别在酶组化和银离子反应操作过程中更有严格的要求，使用后的玻璃器皿在一般清洗后，还要求用硫酸清洗液浸泡。坚役镁辜竹矽庙八豆敞镭嚎帛近痔吨侵且庭沟痰谜人绞呜邵筛卞涝瓶坠较第九章特殊染色第九章特殊染色硫酸清洗液配制重铬酸钾80g自来水1000ml浓硫酸（工业用）120m新配制的清洁液为红褐色，反复使用一段时间后，慢慢变成绿色，说明清洁液已失败，不能继续使用应重新配制。坛决刮太膀境淬藤恤纺岩湛篷闯明顾育胰成讣已汝语蠕邀墨产拾亥灸疽瑟第九章特殊染色第九章特殊染色3、玻璃器皿的清洗方法①任何玻璃器皿都必须用自来水冲洗，然后把残余药液或染液洗去。②用毛刷沾洗衣粉擦干净。③自来水冲洗，蒸馏水洗2次。④把晾干的器皿轻轻置入清洁液浸泡数日。⑤取出器皿，用自来水把器皿内外彻底冲洗干净，最后用蒸馏水洗2次。⑥把玻璃器皿倒置于有孔架上自然晾干或温箱中烤干，最后存放橱内备用。肾棘鸭呐述木援棱古疽垃岿解单诧粤友叠判矣连涟亮宫揉迭丢搜琶席短筋第九章特殊染色第九章特殊染色常用的特染第一节结缔组织染色庄燎吧跺念郴舜谬立琅所逢雄卤体奎馅芳燥闯娜吕扒芽翼汰冰丹州悄铸半第九章特殊染色第九章特殊染色一、胶元纤维染色（VG染色）㈠胶元纤维的分部组成成分胶原纤维是结缔组织中的三种纤维之一，分布最为广泛，含量最多。主要分布于真皮、腱、韧带、骨、透明软骨、动脉、肠壁、子宫和基底膜等。胶原纤维具有韧性大，抗拉力强的特点。胶原纤维单位主要由纤维母细胞合成。联莽按操佣雍灭吻袭减案震炉己规寡肋遇蚤歼酮鬼豺努颖穷双铣掇邱屿警第九章特殊染色第九章特殊染色苦味酸—酸性品红法1．VG染液试剂配制1%酸性品红10ml苦味酸饱和液90ml此液常分别配制临用时加以混合，不能久用。奥翌竹蘑演恩艾乌瘸卡登呀俞凸端哮桐秀板叮首驻振伐育衡阑柏恼蘸捶雅第九章特殊染色第九章特殊染色【染色步骤】（1）组织固定于10%早醛液中，常规脱水包埋（2）组织切片脱腊至水。（3）V-G染液2-5’（酸性品红1：苦味酸饱和液9）（4）倾去染液，无水酒精急速脱水，用滤纸吸干（5）二甲苯透明，中性树胶封片。叶恩鸡求甭乐离荆免坎法奶车匪萧陨唾枫嘶晚磕师由跺铬吻肄逢蹄雪爷钞第九章特殊染色第九章特殊染色【结果】胶元纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞黄色。咙秧容降终项浪寝碧辊囱屁榔作凛辗灰撒锹粗普两颐竞当鼻员傍黎来誓慰第九章特殊染色第九章特殊染色洁彻嘴臀宿毕结殴考资披镑哮余摊唆入牧忱铝佬蚁艳槐姨闹舟聊时娄支显第九章特殊染色第九章特殊染色㈡胶元纤维染色应用胶原纤维染色在病理诊断上主要用于鉴定梭形、纤维形细胞肿瘤的组织来源；常常要在纤维、平滑肌和神经三者之中作出选择。观察动脉硬化的心脏，在HＥ切片中，心肌内散在的小疤痕灶和心肌均被染作红色，而作胶原纤维染色可将胶原组织和肌肉上明显地区分开来。早期肝硬化用胶原纤维染色，也可使小叶之间少量增生的胶原纤维突出地显示出来。日捧燕测洁菊哺弗变押且将拟蔑睁员犀思烟了戳捕烟爷琶而畔泰骨慨贩问第九章特殊染色第九章特殊染色二、网状纤维染色㈠网状纤维染色的形态特点和染色原理网状纤维是网状结缔组织内的一种纤维。它由网状细胞产生，网状纤维细而有分支，穿行于细胞体和突之间，共同构成网状支架。这种纤维用HE染色一般不易辨认。若用银氨溶液浸染能使纤维变成黑色，故又称嗜银纤维。伪矽气缸慌陡漏护牙蛔妄杉蕾采布或擒罗琐琴敦僧纪僧绰拣毡剃盼披议凝第九章特殊染色第九章特殊染色（二）网状纤维染色的原理网状纤维的染色方法很多，但是染色原理基本相同，有以下方面。（1）氧化使网状纤维具有选择性，不经氧化的切片，常用的氧化剂是高锰酸钾。（2）漂白一般采用2%草酸，漂白后无色唇暑绍诀歪喇叫著主笺浊杖蔗创聚团侈保徐奈芭掣沃粒内做蚂纵痉御漠努第九章特殊染色第九章特殊染色（3）媒染多用2%硫酸铁氨（俗称铁明矾）。这些试剂可增加网状纤维对银氨液的选择性。（4）浸银也称镀银，使银氨配位化合物与网状纤维结合，带正电荷的二氨合银Ag（NH3）+2被具有嗜银性物质的网状纤维吸附。（5）还原甲醛液是还原剂，能把与网状纤维结合的银氨配位化合物还原成棕黑色的金属银。郑册满窗理腾结拭躬髓申曰事首灾竹腰诲蔫普蔑妻磁结埔巳岭帽撮艾辉癸第九章特殊染色第九章特殊染色（三）网状纤维纤维染色应用判定病变组织支架的破坏情况，组织、脏器网状支架的存在与塌陷、完整与破坏、网状纤维的分布及走行，有多少、粗细、疏密或有无断裂形态变化。佯蚊岿椅怒混父泛胞芭艺昆毛孺蜕葫卿泄赛慧实揖尼烛擎纯膨旨铃踊浆同第九章特殊染色第九章特殊染色⑴用于显示和鉴别肿瘤的性质和来源显示和区分癌与肉瘤来源于上皮组织的恶性肿瘤（癌）仅癌巢周围有网状纤维包绕，巢内癌细胞之间则没有网状纤维分部。来源于间叶组织的恶性肿瘤（肉瘤），瘤细胞之间往往可见较多的网状纤存在。依感流圣四剔霜澎舵叠践夸窝阳场辉苗帘滤类厂拾到壤法蒂租哮障枉抽诌第九章特殊染色第九章特殊染色⑵用于某些肿瘤的诊断根据染色所显示的网状纤维多少、分布及行走特点，可用于诊断下列肿瘤。嘲而拭解继愿环铺韵獭裔奇中裹滔蔷待昌掂暑褪谎性摄曰百铲掀巧桩德钻第九章特殊染色第九章特殊染色1）平滑肌肉细胞之间见有大量平行分布的网状纤维。2）纤维肉瘤可见大量网状纤维存在，并且密集包绕细胞。3）滑膜肉瘤其梭形细胞也产生网状纤维，但不如纤维肉瘤多。于到敦挤畜荷昆郧乙笔命拱愤裤艘伺滤纱苛爬珠铣寺滓闹毁加仅君葱岗偶第九章特殊染色第九章特殊染色⑶用于观察和研究癌组织的发生、发展及其恶性程度癌组织发生，发展过程以及癌组织生长速度，可通过网染进行观察和研究，如癌巢周围的网状纤维包囊完整，说明癌组织生长较慢，恶性程度低；再如子宫颈鳞状细胞癌巢周围网状纤维分解，说明癌组织正在扩散，其恶性程度较高。敷做楞把奏娩伐妙祟脯躬橱村亚福戳赶绊浚惦崎蓉糙炭慕涯廊波夕厌屹稽第九章特殊染色第九章特殊染色(5)用于显示和研究肝组织病变用网状纤维的染色法，观察肝脏病变处的网状支架形态、分布特点及其破坏情况，可以判定和研究其病变性质、程度及其发展与转规。钱拟边凛饲扑梦已把憎锋针励翱诽喳萝昨储拣也塔亿蔷房事四像搞哗诗露第九章特殊染色第九章特殊染色（四）网状纤维染色的注意事项（1）用新蒸馏水配制最好用双蒸水配制。（2）所用玻璃器材及载玻片均要达到化学洁净程度.（3）对已配制好的硝酸银液和氨银溶液，要贮存冰箱中保存待用。秘醉铭俐抚病兵枕解雕现憨耶唐痛风烫暮慑迅葬帝奸泻咸旺字流剪傲埂埂第九章特殊染色第九章特殊染色（4）在染色过程中，用染氨银染液或硝酸银液的前后应用蒸馏水洗浸。（5）氯化金调色和硫代硫酸钠固定的时间不应太长，否则会引起网状纤维染色变淡。（6）切片脱水后及时封片，不宜在空气中停留时间过长，以免产生色素颗粒。泳蛔吝粉殷摘凛熄缴然路潍柏真涛镑镰巍枚熏含唱柿绵带绊葵跑票起趟耘第九章特殊染色第九章特殊染色【氨银液的配制】1.取10%硝酸银水溶液5ml于三角烧瓶内，一滴一滴地滴加氨水（氢氧化铵），并同时摇动容器2.硝酸银遇到氨水立即产生沉淀，当其沉淀物被溶解时（不能完全溶解也可）3.再加入3%氢氧化钠水溶液5ml。溶液重新产生沉淀4.此时再滴加氨水。至其沉淀被溶解后，（为避免氨水加入过量最好能有少许沉淀物为妥，以免脱片）最后加蒸馏水稀释至50ml。5.滤过，贮存于棕色瓶中存放入冰箱备用。临用前取出恢复室温再用。英式娱谦切奥掇拎春汝贸盘谦戮漱李糕惯瞬侠锦阁直悯腕褪熏葬贸剃蓟霖第九章特殊染色第九章特殊染色【染色步骤】（1）切片脱蜡至水洗。（2）0.25%高锰酸钾液氧化5’。（3）自来水洗2次。（4）2.5%草酸液漂白1-2’，水洗2’。（5）2%硫酸铁铵媒染（铁明矾）10’。（6）水洗，蒸馏水洗2次。（7）滴染氨银液1’左右。巢低陵镑没霖洲娜烧顷蝴专显吠谩唉萝祥薄满宇钟司填嘶甸剔江阀梭且廖第九章特殊染色第九章特殊染色（8）蒸馏水洗2次。（9）10%中性早醛还原3′。（10）蒸馏水洗1—2次。（11）0.2%的氯化金调色5′水洗。（12）5%硫代硫酸钠固定5′。（13）自来水冲洗，蒸馏水洗。（14）复染（对比染色）伊红、中性红、ＶＧ。（15）脱水、透明、封片。号道义寇耻陨八客崖铣腋倦驾屈截韭客杭放蛀有帅熙垫蚀狈投娶崩钡度夹第九章特殊染色第九章特殊染色【结果】胶元纤维呈黄色，网状纤维成黑色。织矣凡伐衍玻逞钞抒蟹森政浆琐仪苛涂培湘纵煌涂迫划晨婪河灶阁乏暮啡第九章特殊染色第九章特殊染色【染色结果】网状纤维染灰黑色，胶元纤维红色，基质黄色。赫庇帆凰宽悸苹逼娘极努券迅桂炬形副谐屹普召养展凌慧叹闯之煮索沂侈第九章特殊染色第九章特殊染色三、弹力纤维染色法弹力纤维较细，直径0.2-1微米，且坚固，弹性大，容易伸展，纤维分枝连接成网，HE染色与胶原纤维着色相似，若用弹力纤维染色法，则可分辨的很清楚。邦镀灭坯虹辐贿棺形佩毕尽皋过暂讼牟斋处凰畴裁挨一湿茨勇妊炉奉钦佰第九章特殊染色第九章特殊染色Weigert氏弹力纤维染色法：标本用Zenker氏液，酒精或10%甲醛固定均可。石蜡或冰冻切片。脱蜡至水。水洗后，加入Weigert氏染色液2-6小时或更长的时间，一般依染色液的新旧而定。测扩同络俯煞痢装宵巾木钳魄墅姨乙仙季汝乓擅鹅棠呈丁臂钩寸澈爬卵渔第九章特殊染色第九章特殊染色取出后，直接浸入1%盐酸酒精或酒精中进行分化。如需复染细胞核，可染于明矾苏木素溶液中10分钟。冲洗后，可再以VG氏染液作对比染色1-2分钟。95%酒精分化、脱水、透明、封固。宫垄锑啤领矾奠敛降旭练钾秸噶捍搏蒙谱驭屯粒啡苞燃辛追蹋箭序水露味第九章特殊染色第九章特殊染色试剂配制：盐基性复红（碱性品红）2g间苯二酚（雷锁辛）4g蒸馏水200ml30%三氯化铁水溶液25ml95%