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高效液相色谱检查十一酸睾酮其他甾体何伟康陈忠坚过程查资料（药典，文献，药物分析及仪器分析课本等）进行讨论，确定方法，制定仪器清单实验成果实验方案进一步修改查资料•药典药物的理化性质，检查方法及具体操作•网络结构式，功效及一些产品名•文献同类药物高效液相色谱法的使用情况•分析化学和药物分析教材高效液相色谱法实验方案•主成分自身对照法（无杂质对照品）•将供试品稀释成与杂质限度相当的浓度，作为对照溶液。分别取供品试溶液和对照溶液进样，计算供试品溶液色谱图上各杂质峰面积总和，与对照溶液主成分峰面积比较，确定杂质是否超过限量。•供试品溶液配制•取本品约0.1g，精密称定，加入流动相约20ml，溶解，定容至50ml容量瓶（制成每1ml中含2mg的供试品溶液）。•自身对照品溶液配制•精密量取供试品溶液1ml至50ml容量瓶，定容（每1ml中含0.04mg）。实验清单•仪器：•高效液相色谱仪，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，（柱长？）•乙腈－异丙醇－水（40:40:20）为流动相；检测温度室温，检测波长为240nm。（灵敏度？流速？）•50ml容量瓶×21ml移液管电子天平小漏斗250ml烧杯50ml量筒滤纸洗耳球方案修改•供试品溶液2mg∕1ml0.5mg∕1ml•自身对照溶液0.04mg∕1ml0.01mg／1ml•色谱条件的确定：•色谱柱：AgilentC185um（150×4.6mm）•流动相的确定：？•流速：1.0ml／min•灵敏度：0.01档溶液配置及仪器操作供试品溶液配置：0.5mg/1ml精密称定50.0mg乙腈定容至10ml移液管移取1.0ml流动相定容至10ml（乙腈-水=75：25）自身对照品溶液配制：0.01mg/ml移液管移取供试品1.0ml乙腈溶液定容至50.0ml（乙腈溶液：10ml乙腈用75%乙腈定容至100ml）液相色谱仪器操作•开始：装柱检漏甲醇冲洗0.5h流动相冲洗0.5h设定参数待基线稳定后进样•结束：用冲柱水冲洗1h纯甲醇冲洗1h收好柱子。药典方法流动相乙腈-异丙醇-水＝40：40：20下色谱图主峰R:1.960T:1.258n:9443思考：•1.主成分峰与杂质的分离度不够（1.960）•2.主成分出峰时间太长（21.538min）如何改变条件呢？流动相配比流动相乙腈异丙醇水19055285105380155乙腈-异丙醇-水（90：5：5）R:1.182T:1.329n:10321乙腈：异丙醇：水（85：10：5）R:3.709T:1.834n:9309乙腈：异丙醇：水（80：15：5）R:1.591T:1.732n:10495流动相RTn出峰时间（min）11.1821.3291032111.1712☆3.791.84930916.12931.5911.7321049513.529第二次思考：•乙腈价格昂贵，毒性大。•而甲醇粘度小，柱压低，价格便宜，适用范围广，常用于色谱分析的流动相，激素类药物中较常用。•药典为什么不用甲醇代替乙腈呢？甲醇-异丙醇-水=90：5：5R:1.225T:1.338n:8099甲醇-异丙醇-水=80：15：5R：1.208T:1.334n:8564结论甲醇替代乙腈后分离度较低，柱效有所下降，所以在实验中使用乙腈较为合适。•选取流动相，进行杂质限量检查。•乙腈-异丙醇-水=80：15：5•1.进溶剂•2.进低浓度对照溶液•3.进高浓度供试品溶液溶剂峰高浓度（0.5mg／ml）低浓度0.01mg／ml计算及结论自身对照溶液主峰峰面积：1691935样品溶液杂质峰总峰面积：666831样品溶液杂质峰总峰面积＜自身对照溶液主峰峰面积即杂质含量＜2.0％，符合规定。心得：•药典规定的方法可能不实用，需经具体的试验验证•HPLC法的关键是色谱条件的确定•了解实验中常用的仪器和溶剂•做实验要又有耐心和恒心，操作要细致