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根系表面组织酸性磷酸酶活性测定一、实验目的掌握根表面和跟组织酸性磷酸酶活性测定的原理和方法二、实验原理以对硝基苯酚磷酸盐为底物，对硝基苯酚磷酸盐在酸性磷酸酶作用下生成对硝基苯酚，对硝基苯酚在碱性条件下水解生成黄色的酚黄，酚黄在波长405nm处具有最大光吸收。因此，可以利用分光光度计法，通过测量吸光值的确定溶液中酚黄的含量，再换算成酸性磷酸酶活性。三、材料大蒜根系、芹菜根系四、方法步骤1、标准曲线溶液配制12345670.05mg/mLPNP(ml)00.10.20.40.60.81.050mM柠檬酸缓冲溶液4.54.44.34.13.93.73.51MNaOH0.50.50.50.50.50.50.5PNP(μg/管）051020304050A40500.0970.1760.3750.5690.7270.941标曲方程：y=0.0187x-0.0012R²=0.99912、样品测定2.1根系表面酸性磷酸酶活性测定称取大蒜根尖2cm，共0.2g，芹菜根尖0.5g，分别加入5ml反应液（反应液由0.25mg/mlPNP及柠檬酸缓冲液配制），28℃暗培养10min，然后加0.5mlNaOH终止反应，然后在405nm处测吸光值。2.2根组织酸性磷酸酶活性测定取0.2g大蒜根尖，芹菜根尖0.5g，分别加入50mM缓冲溶液4℃研磨成匀浆，定容至10ml，然后4000rmp离心10min，取上清液备用。量取上清液0.5ml，加入4.5ml柠檬酸缓冲液，在28℃下放置10min,加入0.5mlNaOH液，在405nm处测量其吸光度值。五、结果计算1.根系表面酸性磷酸酶活性测定：蒜苗根尖m=0.196g，A405=0.862，PNP浓度=46.16μg/5ml蒜苗根系表面酸性磷酸酶活性=1413.06(μg·h-1·g-1Fw)芹菜根系m=0.499g，A405=0.901，PNP浓度=48.25μg/5ml芹菜根系表面酸性磷酸酶活性=580.16(μg·h-1·g-1Fw)2.根组织酸性磷酸酶活性测定：蒜苗根尖m=0.218g，A405=0.015，PNP浓度=0.866μg/5ml蒜苗根系组织酸性磷酸酶活性=23.84（μg·h-1·g-1Fw）芹菜根系m=0.480g，A405=0.106，PNP浓度=5.73μg/5ml芹菜根系组织酸性磷酸酶活性=71.66（μg·h-1·g-1Fw）六、讨论