第07章 苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析

第七章苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析R1CHCHNHR2OHR3苯乙胺类药物的基本结构*HOHOCHOHCH2NHR具有烃胺侧链，属于芳烃胺类药物。多数在苯环上有1~2个羟基取代基。如在苯环3、4位上有羟基取代，则为儿茶酚胺类药物。HOHOCOHHCH2NHCH3肾上腺素常见的苯乙胺类药物HOHOCOHHCH2NH2重酒石酸去甲肾上腺素CCCOOHCOOHOHHHHOHOCHOHCH2NHCH3HCl盐酸去氧肾上腺素HOCHOHCH2NHCH(CH3)2HClHO盐酸异丙肾上腺素ClH2NClCHOHCH2NHC(CH3)3HCl盐酸克仑特罗H2SO42HOCH2OHCHOHCH2NHC(CH3)3硫酸沙丁胺醇一、结构与性质1.脂烃胺基侧链，显弱碱性2.酚羟基，易氧化变色，可发生三氯化铁反应3.具手性碳原子，具旋光性4.溶解性游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂，其盐可溶于水5.UV6.IR7.取代基：具芳伯氨基的盐酸克仑特罗可用重氮化—偶合反应鉴别、亚硝酸钠滴定法测定含量。（三）氧化反应)(222]O[IorOH棕色聚合聚合物放置肾上腺素红　肾上腺素极微红色无色同样条件下去甲肾上腺素反应速度极慢or区别肾上腺素和去甲肾上腺素。（五）与亚硝基铁氰化钠反应（Rimini反应）脂肪族伯胺的专属反应红紫色丙酮亚硝基铁氰化钠重酒石酸间羟胺NaHCO3HOCHOHCHCH3NH2CH(OH)COOHCH(OH)COOH三、杂质检查杂质来源原料残存检查方法比较法（含量测定法）（一）酮体的检查检查原理利用酮体在310nm波长处有最大吸收，而药物本身在此波长处几乎没有吸收，规定一定浓度溶液在310nm波长处的吸收度限制酮体的量。（二）有关物质检查盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇等药物检查方法：TLC中高低浓度对比法HPLC中不加校正因子的主成分自身对照法（三）盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查检查方法：纸色谱法（PC）分离后，洗脱，照分光光度法于232nm波长处测定吸收度，控制吸收度以控制有关双胍的量四、含量测定（一）非水溶液滴定法原料药脂烃胺基侧链，显弱碱性测定条件：1.溶剂：gHAc2.滴定液:HClO48＜pKb＜10冰醋酸作溶剂10＜pKb＜12冰醋酸+醋酐pKb＞12醋酐碱性极弱的杂环在冰醋酸中加入不同量的甲酸无机酸在冰醋酸中的酸性次序为：高氯酸＞氢溴酸＞盐酸＞硫酸＞＞硝酸＞其它弱酸（磷酸、有机酸）4HSO2酸根的影响由于有机酸系弱酸，被高氯酸置换出的HA，对滴定无干扰，能准确滴定。1）.有机酸盐的测定取本品约60mg，精密称定，加冰醋酸20ml溶解后，加结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.05mo1/L）滴定，至溶液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液（0.05mol/L）相当于22.07mg的C19H23N3O2·C4H4O4。马来酸麦角新碱ChP(2010)若被置换出的有机酸不溶于冰醋酸，应先将样品碱化，有机溶剂提取游离碱后，再非水碱量法测定。一般均预先在溶液中加入Hg(Ac)2的冰醋酸溶液，以消除氢卤酸对滴定的干扰。22HgXAc2BHHg(Ac)X2BH理论量1～3倍2）.氢卤酸盐的测定取本品约0.3g，精密称定，加冰醋酸10ml，加热溶解后，加醋酸汞试液6ml与结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定至溶液显翠绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于20.17mg的C10H15NO·HCl。盐酸伪麻黄碱ChP(2010)生物碱的硫酸盐，在冰醋酸介质中只能被滴定至生物碱的硫酸氢盐。···2---+BH+ClO4BH+HSO4+(BH+)2SO4HClO4a直接滴定3）.硫酸盐的测定A.硫酸阿托品HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶1H2OH2SO42NCH3OCOCHCH2OHB.硫酸奎宁HClO4直接滴定时，反应摩尔比为1∶3NCH3OCOHHNCHCH2H2H2SO4H2ONCH(OH)NCH3OCHCH22.H2SO4.2H2O（喹核碱）pKb=5.07（喹啉环）pKb=9.7两个N原子喹啉N，属于芳环族N，碱性较弱喹核N，属于脂环族N，碱性较强b加入高氯酸钡消除硫酸的干扰后滴定硫酸奎宁反应摩尔比为1∶2硫酸阿托品一元碱不能滴定244242422N)HClON(2BaSO)ClO(BaNSOHN)HClON(2)HClON(2HClO2N)HClON(244424例：硫酸奎宁片的测定硫酸奎宁片剂含量测定时，经碱化处理，生成奎宁游离碱，然后再用高氯酸滴定液滴定。反应摩尔比为？NCH3OCOHHNCHCH2H2H2SO4H2O因HNO3具有氧化性，可使指示剂变色，一般电位法指示终点。如硝酸士的宁、硝酸毛果芸香碱4.硝酸盐的测定取本品约0.3g，精密称定，加冰醋酸20ml，振摇使溶解，照电位滴定法（附录ⅦA），用高氯酸滴定液（0.1mo1/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于39.74mg的C21H22N2O2·HNO3。硝酸士的宁ChP(2000)按常法测定，如磷酸氯喹、磷酸可待因5.磷酸盐的测定•肾上腺素•重酒石酸去甲肾上腺素•硫酸沙丁胺醇直接滴定•盐酸苯乙双胍5.应用实例游离弱碱性药物测定•名称取样量溶剂指示剂终点颜色•肾上腺素0.15g冰醋酸结晶紫蓝绿色•盐酸苯乙双胍0.1g冰醋酸/醋酐电位法•盐酸麻黄碱0.15g冰醋酸结晶紫翠绿色•（加醋酸汞）简便、快速、准确、精密、取样量小，测定的是生理活性部分。如有酸性或碱性成分存在时会影响，选择性差，不能直接用于制剂分析，只能用于原料药测定。特点（二）溴量法盐酸去氧肾上腺素及其注射液、重酒石酸间羟胺反应摩尔比为1∶6HOCHCH2NHCH3OHBr2+3BrBrHOBrCHCH2NHCH3OH+3HBr讨论:1.注意Br2、I2的逸失2.生成的溴代产物，若水中不溶，需加入HAc（或CHCl3、EtOH等）3.溴过量2%为宜（三）比色法盐酸克仑特罗栓具芳伯氨基，可发生重氮化—偶合反应AnmN测定盐酸克仑特罗盐酸克仑特罗栓乙二胺萘基）（、盐酸氯仿500max1HNaNO2对照法定量偶合剂N-（1-萘基）-乙二胺遇亚硝酸也能显色，干扰比色测定，所以在重氮化后，应加氨基磺酸铵将剩余的亚硝酸分解除去，再加偶合试剂N-（1-萘基）-乙二胺。（四）提取酸碱滴定法硫酸苯丙胺及其制剂盐类可溶解于水，不溶于有机溶剂游离碱不溶于水，易溶于有机溶剂依据性质终点（过量）乙醚层（苯丙胺）苯丙胺硫酸苯丙胺滴定甲基红、低温蒸去乙醚定量过量的乙醚提取、NaOH42NaClNaOHSOH42SOH碱化有机溶剂提取（五）荧光分光光度法三羟基吲哚，，甲基肾上腺红肾上腺素一定条件下653I2Nλex410nm、λem520nm处测定荧光强度，对照法定量。（六）HPLC法重酒石酸去甲肾上腺素注射液离子对反相高效液相色谱法外标法定量调节溶液pH为3.8，加入离子对试剂十二烷基磺酸钠（七）衍生化GC法（GC-FID以盐酸美西律作内标物）应用示例：盐酸芬氟拉明片的含量测定盐酸芬氟拉明+三氟乙酰苷→衍生物五、体内药物分析•动物组织中盐酸克仑特罗残留的测定•1.提取•动物肝脏组织样品5g加乙酸乙酯15ml，NaCO3溶液3ml•匀质，离心，取上清（重复一次），加盐酸，混合，离心，取水层（重复萃取一次），合并萃取液，调节pH至5.2•2.净化•上样于固相萃取小柱水5ml、甲醇5ml淋洗4%氨化甲醇5ml洗脱•收集洗脱液。•3.测定BSTFA（双三甲基硅烷三氟乙酰胺）衍生化，GC/MS分析。外标法计算。１.对乙酰氨基酚的含量测定：精密称取本品０.0414g置250ｍｌ量瓶中，加０.4％氢氧化钠溶液50ml，溶解后，加水至刻度，摇匀。精密量取该溶液5m1，置100m1量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀。在257nm波长处测得吸收度为0.590，按其吸收系数()为715计算其含量。%11cmE2．重酒石酸去甲肾上腺素注射液的含量测定方法如下：对照品溶液的制备：取重酒石酸去甲肾上腺素对照品70.000mg，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液与内标溶液（0.160mg/ml）各2ml，置另一10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。供试品溶液的制备：精密量取标示量为10mg/2ml的重酒石酸去甲肾上腺素注射液1ml与内标溶液（0.160mg/ml）2ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得测定：取对照品溶液和供试品溶液各2ul进样，测得对照品溶液中重酒石酸去甲肾上腺素和内标的峰面积分别为1635和1115；供试品溶液中重酒石酸去甲肾上腺素的峰面积为1454，内标物的峰面积为1123。试计算其含量占标示量的百分率。93.1160.5/163532.0/1115rrssmAmAf)(94.432.01123145493.11)(mgmAAfmssXX%8.98%100594.4解：由于对照品溶液和供试品溶液稀释倍数相同，所以可直接按对照品溶液和供试品溶液10ml中组分的量进行计算。先计算校正因子：例1.能和重酒石酸去甲肾上腺素发生颜色反应的试液为A.浓硫酸B.甲醛试液C.氨试液D.甲醛—硫酸试液E.茚三酮试液例2.盐酸异丙肾上腺素的检查项目是A.有关物质B.二苯酮C.盐酸D.醛E.酮体•计算：用内标法测定某胺类药物的含量。•对照品溶液的制备：精密称取对照品50.0mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，精密量取上述溶液5ml，置25ml量瓶中，精密加内标溶液（0.20mg/ml）5ml，加流动相稀释至刻度。•供试品溶液的制备：精密称取供试品50.5mg，照对照品溶液制备方法制备。•取对照品溶液和供试品溶液各10ul进样，测得对照品溶液中，对照品和内标的峰面积分别为1350和1040，供试品溶液中测定组分和内标的峰面积分别为1313和1013。试计算样品的百分含量。