第21章 临床生化检验方法与试剂盒评价

第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第2页教学目标与要求`掌握校准品的分类和正确使用；测定系统的概念和比对；试剂盒的性能指标和评价方法。`熟悉方法学性能指标和评价；量值溯源和量值传递的概念；液体双试剂的优点。`了解试剂盒的分类和发展趋势。第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第3页第3页第3页临床生化检验方法的性能评价临床生化检验试剂盒的性能评价临床生化检验方法分级和标准品主要内容第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第4页临床生化检验方法分级一二三第一节临床生化检验方法分级和标准品临床生化检验的参考物质和校准品量值溯源检测系统的比对四第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第5页```是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法。决定性方法参考方法是指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。常规方法是指性能指标符合临床或其他目的需要，有足够的精密度、准确度、特异性和适当的分析范围，而且经济实用。一临床生化检验方法分级第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第6页决定性方法（definitivemethod）也称为一级参考方法（primaryreferencemethod)参考方法（referencemethod）也称为二级参考方法（secondaryreferencemethod）常规方法（routinemethod）；推荐方法（recommendedmethod）第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第7页表21-1临床生化检验项目的决定性方法、参考方法、常规方法项目决定性方法参考方法常规方法钙ID-MS原子吸收分光光度法邻甲酚酞络合酮法、MTB法氯ID-MS、中子活化法电流滴定法硫氰酸汞法、选择性电极法镁ID-MS原子吸收分光光度法MTB法钾ID-MS、中子活化法火焰光度法离子选择电极法、火焰光度法钠中子活化法火焰光度法离子选择电极法、火焰光度法清蛋白-免疫化学法溴甲酚绿法总蛋白-凯氏定氮法双缩脲法肌肝ID-MS离子交换层析法苦味酸法、酶法尿素ID-MS尿素酶法二乙酰一肟法、酶法尿酸ID-MS尿酸酶法（紫外）磷钨酸比色法胆红素-重氮反应法J-G法、钒酸盐氧化法葡萄糖ID-MS已糖激酶法葡萄糖氧化酶法胆固醇ID-MSAbell-Kendall法酶法甘酒三脂ID-MS变色酸显色法酶法第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第8页```（primaryreferencematerials）也称一级标准品，与决定性方法平行，用于验证决定性方法、评价与校准参考方法，以及为二级标准品定值。原级参考物质次级参考物质（secondaryreferencematerials）也称二级标准品，二级标准品的定值源于一级标准品和参考方法，主要用于评价常规方法，也可为质控物定值。常规校准品校准（calibration）指的是对由仪器、方法和试剂所组成的检测系统的校准过程。电解质、酶类、其他生化指标应合理选择校准品二临床生化检验的参考物质和校准品第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第9页标准品校准品质控品一级标准品用高纯化学物质（纯度99.98%）直接通过称重配制的溶液，是唯一值。一般由国家标准计量局出具证书。二级标准品某种成分的浓度可用公认的参考方法测定。由参考实验室或权威学术组织出具证书，如SRM、BCR、IFCC。标准品(standard）可用做校准品（calibrater），考虑血清成分复杂、难以避免基质效应，建议用与新鲜血清相似的介质做校准品，一般由试剂盒供应商提供和赋值。校准品的量值应有溯源性，不同测定系统赋值不同。质控品多是成分相对稳定的混合血清，分为定值和非定值、冻干或液体，添加了防腐剂和保护剂等。定值往往由试剂盒供应商委托几家实验室在特定测定系统上测得的均值和标准差。第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第10页标准品与校准品大多数定量的方法（分光光度法、电化学、免疫定量）都需要用标准品校准，即通过标准比较来计算。校准是这些方法定量必经的过程。用什么“标准”来校准？罗氏公司的C.f.a.s（calibratorforautomationsystem），属于多项校准品，因使用方便，很多实验室都在使用。但前提是“指定的测定系统”。第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第11页图21-1各级参考物质和校准品的关系及其量值传递过程第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第12页三量值溯源溯源性(traceability）是指通过一条具有规定不确定度（uncertainty）的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准（通常是国家或国际测量标准）联系起来的特性，称为溯源性。其不间断的比较链称为溯源链。溯源性第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第13页测量不确定度测量不确定度是指表征合理地赋予被测之值的分散性。是与测量结果相联系的参数，可理解为排除系统误差之外的所有随机误差的合成方差。第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第14页图21-2量值溯源和量值传递途径第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第15页四检测系统的比对完成一个项目检验所涉及的仪器、试剂、校准品、质控品、操作程序、质量控制、保养计划等的组合称为检测系统（testingsystem）。常规检测系统有配套检测系统和自建检测系统。（一）检测系统的概念第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第16页.配套检测系统自建检测系统（二）检测系统的分类整个检测系统涉及的各个部分完全按照指定厂商要求配套使用。若该系统已经国家法定部门认证,则使用这样的检测系统对临床样品进行检验，其结果具溯源性。实验室自行建立的检测系统，如A制造商的试剂盒、B制造商的校准品、C制造商分析仪的组合。第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第17页①制订分析质量目标②仪器性能评价③确定对比检测系统内容④初步评价检测系统⑤比对允许不精密度、允许偏倚和允许总误差准确度和精密度参考系统或公认的测定系统性能指标40-100例（二）检测系统比对的实施步骤可接受性判断步骤第18页测定系统方法学操作程序校准品仪器试剂配方和来源测定系统的关键要素第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第19页第19页12统一方法：以方法学评价为基础，提出参考方法或推荐方法。统一试剂的主要成分和测定条件。实施机构：国际临床化学学会、临检中心逐级溯源：常规校准品应向二级标准品、一级标准溯源。实施机构：ISO、国家标准计量局、参考实验室、试剂盒供应商、临床实验室全球性可比性战略实施33保证仪器良好的工作状态、严格的操作规程和质量控制、实验室内部测定系统的比对、实验室间的比对第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第20页方法学的性能指标一二三第二节临床生化检验方法的性能评价方法学性能评价的内容方法学评价试验临床生物化学方法学性能判断四第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第21页可靠性实用性一方法学性能指标准确度精密度方便性经济性安全性简单快速可测范围第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第22页```准确度（accuracy）的传统定义是指测定值与“真值”的接近程度。是指一次测定的结果与被测物真值的接近程度。准确度正确度“正确度”（trueness），是指一系列测定结果得到的均值与“真值”的接近程度。通常以偏倚（bias）来表示精密度精密度（precision）是指在规定条件下，相互独立的检测结果间的一致程度。不精密度（imprecision）通常用标准差（S）和变异系数（CV%）来表示第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第23页表21-3临床生化检验方法的误差及评价方法系统误差误差分类评价试验评价指标理想结果比例系统误差回收试验回收率95-105%恒定系统误差干扰试验干扰值接近0比例系统误差方法对比试验Y=a+bXb接近1.0恒定系统误差a接近0随机误差重复性试验（批内、批间、日间）、总不精密度CV3%二方法学性能评价内容第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第24页回收试验干扰试验线性试验重复性试验对比试验检测限与检测范围批内批间日内日间总不精密度三方法学评价实验准确度第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第25页（一）重复性试验1.试验样品一般选择2个，一个在参考区间附近，另一个为异常值2.初步的批内精密度评价：即一个样品重复测定20次，计算出均值，标准差和变异系数。用2个样品每天测定2批，批间测定间隔不得少于2h，每批平行测定2份，至少共测定20天，80个数据。每对结果间的差（共40个）代表批内差；2批均值之间的差（共20个）代表批间差；每天4个结果的均值（共20个）代表日间差。每批测定至少做一个质控。第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第26页（二）回收试验所谓回收即评定方法正确测定加入常规样品中的纯分析物的能力。即在未知浓度的常规样品中加入一定量的待测组分，检测加入前后该组分的增加量，实际增加量与理论加入量的比值就是回收率。目的是测定比例系统误差。第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第27页（三）干扰试验干扰是指在测定某分析物时，受其他非分析物的影响而导致测定结果增高（正干扰）或降低（负干扰）。根据干扰的产生原因分为：基质效应、非特异反应、外部干扰物等。干扰试验的设计同回收试验，即将不同浓度的干扰物代替纯标准品。一般规定只对胆红素、血红蛋白、脂类做干扰试验。干扰值＝加入干扰物后的测定值－基础测定值第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第28页（四）线性试验线性试验用来评价剂量和反应之间的线性关系，并把呈直线部分确定为线性范围（linearrange）。线性范围指检测信号与被测物浓度呈线性时的被测物浓度范围。1.样品浓度线性评价至少应有5个不同浓度，可选择低值和高值样品各一份，低值样品和高值样品分别按体积3：1混匀、等份混匀、1:3混匀，形成5个不同浓度。2..试验方法将不同浓度的样品（X），随机排列，每个样品重复测定4次（Y），并要求在当天完成所有分析。第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第29页（五）对比试验对比试验是指分别用两种方法测定一组临床不同浓度和病理情况的样品，测定结果进行回归分析。比较方法应选择参考方法或公认的常规方法，测定偏差主要来源于评价方法。1.试验样品应收集新鲜的正常和异常的临床样品，应有足够宽的浓度范围，各浓度样品数量应有合适的比例。2．样品测定样品数至少为40个，每个样品用2种方法分别作双份测定。每天测定8个样品，双份测定时第一次按顺序1，2……7，8，第二次8，7……2，1，共测试5天。第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第30页（六）检测限检测低限通常是指能与适当的“空白”读数相区别的待测物的最小量。方法是做空白平行试验（一般20次），以蒸馏水调零，读取各次吸光度，计算均值（Ab）和标准差(S)。以Ab+3S表示与“空白”读数相区别的最小吸光度，将其换算成浓度，作为该法的检测低限。临床实验室以生物检测限更为重要，需采用接近检测低限的生物检测限样品来确定，能更真实地反映实际检测限水平样品测定的不确定度。第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第31页系统误差误差分类评价试验评价指标理想结果比例系统误差回收试验Ea1/2TEa恒定系统误差干扰试验干扰值1/2TEa比例系统误差方法对比试验Y=a+bXXc-Yc±1/2TEa随机误差重复性试验（批内、批间、日间）、总不精密度总随机误差1/3TEa四方法学性能判断第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第32页临床生化试剂盒的质量标准一二三第三节临床生化检验试剂盒的性能评价临床生化检验试剂盒的分类临床生化试剂盒的性能指标及评价临床生化试剂盒的发展趋势四第二十一章临床生化检验方法与试剂盒评价第33页体外诊断试剂体外诊断试剂（invitrodiagnosisregengts）用于完成一个特定体外诊断检验，而包装在一起的一组组分。试剂盒组分可包括抗体