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Northernblot原理核酸分子杂交：利用不同来源但互不配对的核酸单链之间能够特异性结合形成杂合双链的特性，从而对核酸分子进行定性和定量分析的技术。Northernblot：检测RNANorthernBlot步骤电泳转膜杂交检测NorthernBlot步骤1、RNA变性电泳RNA来源：总RNA或mRNA（加变性剂）凝胶：琼脂糖凝胶（含变性剂）变性剂：甲醛、乙二醛2、转膜常用膜：硝酸纤维膜优点：专一性较好缺点：烘干的后容易碎裂尼龙膜优点：韧性好，与核酸结合的能力强转膜方式：毛细管转移法电印迹法真空转移法NorthernBlot步骤2、转膜毛细管转移法：借助吸水纸吸收转移缓冲液时所产生的牵引力量将RNA自洋菜胶体转移至膜上；要转印完全，需要作用6h以上。注：dH2O/DEPC（焦碳酸二乙酯）冲洗凝胶数次，以便去除甲醛NorthernBlot步骤2、转膜电印迹法：在电场的作用下，凝胶中的RNA片段沿与凝胶平面垂直的方向泳动，从凝胶中移出，滞留在滤膜上，形成印迹。NorthernBlot步骤2、转膜真空转移法：较之毛细管转移更为有效，而且极为快捷，1-2h便可完成转印。NorthernBlot步骤2、转膜固定RNA转移至膜上后，利用紫外线照射法或真空干燥法将其固定于转印膜上。NorthernBlot步骤紫外交联仪3、与探针杂交探针：可与待检测RNA碱基互补的RNA或DNA片段标记物：同位素地高辛（采用人工方法可以将地高辛的线型间隔臂与dUTP连接起来,形成DIG-11-dUTP）NorthernBlot步骤3、与探针杂交探针标记的方法（1）切口平移法（2）随机引物法（3）末端标记法（4）单链DNA探针标记（5）寡核苷酸探针标记法NorthernBlot步骤模板加入随机引物，按碱基互补原则，随机引物与模板DNA退火后由KLENOW片段从引物3'端延伸引物，便可将DIG-11-DUTP均匀掺入到新合成的DNA链中。3、与探针杂交预杂交：用非特异性RNA分子及其它高分子化合物（封闭剂）将待杂交膜中的非特异性位点封闭，从而减少杂交背景。膜与探针杂交：倒掉预杂交液，加入含探针的杂交液。68℃下杂交6h以上洗膜：适当洗膜延长时间和洗膜增加次数可减少背景色NorthernBlot步骤4、结果检测5-溴-4-氯-3–吲哚磷酸盐及硝基蓝四哇(NBT)为底物,用碱性磷酸酶连接的抗-DIG抗体酶结合物结合杂交的DIG催化显色而进行比色测定。NorthernBlot步骤Northernblot可用来检测不同组织、器官；生物体不同发育阶段以及胁迫环境或病理条件下特定基因的表达样式。用于检测癌细胞中原癌基因表达量的升高及抑癌基因表达量的下降器官移植过程中由于免疫排斥反应造成某些基因表达量的上升检测目的基因是否具有可变剪切产物或者重复序列NorthernBlot应用