诱变育种与有丝分裂.ppt

实验三植物诱变育种与有丝分裂过程的观察实验目的：1.掌握根尖染色体压片技术；2.观察有丝分裂中期染色体形态。3.了解人工诱发多倍体的原理、方法及其在育种上的意义，并初步掌握用秋水仙素诱导多倍体的方法.4.观察多倍体植物染色体数目的变化及多倍体植物外部形态的变异实验原理：植物根尖分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂的高峰时期，此时把根尖固定，经过染色和压片，再放置在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。实验原理自然界存在许多多倍体物种，除此以外还可以采用物理方法（高温，低温，X射线照射，嫁接或切断）或化学药剂处理法（植物碱，麻醉剂，植物生长激素等）进行人工诱发。其中秋水仙素处理是诱发多倍体植物最有效的方法之一。秋水仙素是从百合科秋水仙的器官和种子中提炼出来的一种植物碱。它的作用在于抑制细胞分裂时形成纺锤体，而对染色体的结构和复制无显著影响，染色体不被拉向两极而被阻止在分裂中期，这样细胞不能继续分裂，从而产生染色体数目加倍的核。若染色体加倍的细胞继续分裂，就形成多倍性组织，分化产生的配子也是多倍性的，可通过有性繁殖将多倍体繁殖下去。实验材料：大蒜,小麦等植物的根尖实验仪器与药品：显微镜、载玻片、盖玻片、滤纸、刀片、水浴锅、EP管、45%醋酸、醋酸洋红、卡宝品红、0.2%秋水仙素、卡诺固定液.实验内容：染色体标本制片方法染色体的常规压片方法，是指与现代发展起来的染色体分带和电镜技术相区别的经典压片技术，操作可按先后顺序：取材、预处理、固定、解离、染色、压片等步骤进行。1、取材：用沙培或水培养大蒜，根长1.5-3cm时取材，一般在上午九时取下根尖。2、预处理：冰水混合物处理24h。3、固定：卡诺固定液（酒精：醋酸=3：1）16-24h。4、水洗：制片用的根尖用蒸馏水洗10min。5、解离：1NHCl60℃解离8-10min。6、水洗：同上。7、染色：醋酸洋红染色7天左右，或卡宝品红染色15分钟8、压片和镜检。以大蒜根尖为例说明染色体制片的过程：酒精灯火烤趁热用拇指压镜检压片过程有丝分裂有丝分裂（Mitosis）过程包括:(一)间期(Interphase)(1)G1—RNA和蛋白质合成(2)S—DNA合成，形成新的染色体(3)G2—有丝分裂能量的蓄积(二)分裂期(M)(1)前期(prophase)(2)中期(metaphase)(3)后期(anaphase)(4)末期(telophase)间期:看不到染色体结构前期:此期染色质浓缩，纺锤体形成，核仁核膜逐渐消失，能看到一定形状染色体中期:核膜核仁消失，染色体高度浓缩，纺锤丝牵引染色体到赤道板上后期:染色单体分开由纺锤丝通过着丝点牵引向两极移动--子染色体末期:染色体解螺旋，核膜核仁重新出现，纺锤丝消失，核分裂完成，进入分裂间期有丝分裂特征大蒜材料染色体加倍处理–大蒜沙培生根，室温下2-3天即长出0.5-1cm长的根–取出用水冲洗去掉泥沙，置于含0.2%秋水仙素的培养皿中,暗培养24\48\72小时.–从药液中取出，水洗后清水培养24\48\72小时.–分裂高峰期取下根尖固定24小时.–染色、制片.形态标志：根尖有膨胀的部分，即表明染色体加倍实验说明观察与鉴定多倍体植株经处理得到的的多倍体植株与正常植株相比，在外部形态和结构上有区别。从外部形态看，多倍体比二倍体高大，叶片肥厚，果实和种子都比较大，糖类和蛋白质等营养物质的含量丰富。镜下观察，多倍体叶面表皮上的气孔和保卫细胞比二倍体大得多，花粉粒也相对较大。在形态观察的基础上，需进一步镜检观察染色体数目的变化以对多倍体植株作可靠鉴定。黑麦小黑麦小麦作业1.绘制镜下观察到的多倍体大蒜的染色体图像2.绘制镜下观察到大蒜根尖有丝分裂的染色体各期图像3.写出诱变与非诱变大蒜根尖的区别0.2%秋水仙素暗处理48小时