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实验一寄生虫粪便检查法一、目的要求掌握粪便中寄生虫虫卵检查的饱和盐水漂浮法；应用显微镜观察粪便中虫卵的形态结构。二、方法概述用以检查蠕虫卵、原虫的包囊、滋养体和卵囊。方法简便，连续作3次涂片，可提高检出率。1、蠕虫卵检查：2、原虫检查：1）活滋养体检查2）包囊的碘液染色检查3）隐孢子虫卵囊染色检查：改良抗酸染色法（一）直接涂片法（二）浮聚法原理：利用比重较大的液体，使原虫包囊或蠕虫卵上浮，集中于液体表面。常用的方法有三种：1、饱和盐水浮聚法2、硫酸锌离心浮聚法3、蔗糖离心浮聚法虫卵比重与漂浮液比重虫卵种类比重漂浮液的种类比重贾第虫包囊1.040-1.060饱和盐水1.17－1.19猪蛔虫卵1.045硫酸锌溶液1.14钩虫卵1.085－1.09氯化钙溶液1.05毛圆线虫卵1.115－1.13氯化钙溶液1.25猪后圆线虫卵1.200硫代硫酸钠1.37－1.39肝片吸虫卵1.200饱和硫酸镁1.26姜片吸虫卵1.200饱和硝酸钠1.2－1.49华枝睾虫卵1.200甘油1.226复腔吸虫卵1.200饱和蔗糖溶液1.28饱和盐水漂浮法操作示意图1.自粪便不同处挑取如蚕豆大小的粪块，置于盛有少量饱和盐水的漂浮管中2.将粪便捣碎，与盐水搅匀，再加饱和盐水3.将满时，改用滴管，加至略高于管口但不超出为止4.取洁净载玻片一张盖在管口上，静止30分钟左右5.如图垂直向上提起载玻片6.敏捷地翻转，覆以盖片镜检（三）沉淀法原虫包囊和蠕虫卵的比重大可沉集于水底，有助于提高检出率。但比重较小的钩虫卵和某些原虫包囊则效果较差。1、自然沉淀法2、离心沉淀法（四）漂浮-沉淀法该法的原理是利用粪便中各种虫卵及粪渣中其它成份比重的差别，将不同比重的虫卵分别集中进行检查，即先按漂浮法检查比重较小的虫卵，然后将管中上层液倒掉，取沉淀物检查不能上浮而沉在下面的比重较大的卵，所以，该法可用于检查比重大小各异的寄生虫卵。（五）拭子检查法适用于在肛周、皮肤产卵（蛲虫），或常在肛门附近发现虫卵（带绦虫）的虫卵检查法。1、棉签拭子法2、透明胶纸法漏斗幼虫分离法(贝尔曼法)。取粪便15-20g，放在漏斗内的金属筛上，漏斗下接一短橡皮管，管下再接一个小试管。加入40℃到淹没粪球为止，静置1-3小时。此时大部分幼虫游走于水中，并沉淀于试管底部。取试管底部沉渣制成涂片镜检。平皿法。取被检粪球3-4个，放于平皿中，加适量40℃温水，浸泡10-15min后，除去粪球，留下的液体在低倍显微镜下检查。（六）粪便内蠕虫幼虫检查法1、幼虫分离法：网尾线虫、类圆线虫2、粪便内虫卵培养法：圆形线虫目3、毛蚴孵化法：结肠小袋纤毛虫Balantidiumcoli十二指肠贾第虫Giardiaduodenalis球虫隐孢子虫肝片形吸虫虫卵日本血吸虫虫卵蛭形巨吻棘头虫膜壳绦虫虫卵犬复孔绦虫卵猪带绦虫虫卵细粒棘球绦虫虫卵莫尼茨绦虫虫卵犬鞭虫卵钩虫卵犬弓首蛔虫卵鸽毛细线虫卵，球虫卵囊肉鸽蛔虫卵猪蛔虫卵测微尺的使用通常的镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm，是专门用来校正目镜测微尺的。通常的目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分、把10mm长度刻成100等分或将1mm长度刻成100等分。测微尺的使用漏斗架2个/组；漏筛6个/组；小烧杯（50ml）12个/组；500ml烧杯2个/组；100mL烧杯1个/组；青霉素瓶6个/组；离心管6个/组；滴管1个/人；饱和盐水1瓶/组；甘油水1瓶/组；100mL量筒1个/组；小方瓷盘1个/组；擦镜纸1平皿/组；小棉块1份/组；载玻片、盖玻片1份/组；离心机、小天平各1台；镊子2个/组；显微镜；试管架1个/组；动物粪便1份/班；50mL烧杯两个用于配平。一）、实验用品三、试验内容1.每2人操作1份饱和盐水漂浮法─静置滤液30分钟；2.直接涂片法（每2人操作1份）；3.离心沉淀法（每2人操作1份）；4.继续“1”未完的操作。二）实验安排六、注意事项1.高倍镜下观察必须加盖玻片2.采用直接涂片法时，不要涂得太多，必须分散开，均匀3.观察寄生虫卵前，需校对目镜每格的长度；先在低倍镜下观察，发现后换为高倍镜4.使用离心机前，需配平离心管七、作业：绘制粪便样品镜检看到的虫卵八、思考题：粪便中虫卵、卵囊的检查需要注意那些问题？