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实验十一真菌的病原学检测学习要求1、观察单细胞真菌和多细胞真菌的形态特点2、熟悉真菌染色标本的检查方法一、实验原理单细胞真菌形态观察:酵母菌是不运动的单细胞真核微生物,其大小通常比常见细菌大几倍甚至几十倍。大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖。本实验用美兰染液水浸片观察白色念珠菌和酵母菌的形态和出芽生殖方式。由于美兰是一种无毒性染料，它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美兰对酵母的活细胞染色时，由于其新陈代谢，细胞具有较强的还原能力，因此可将氧化型的美兰转化为还原型的美兰，而衰老细胞或死细胞其还原能力弱或无，因此，仍呈淡蓝色或蓝色。故可借此可对酵母菌的活细胞和死细胞进行鉴别。实验原理多细胞真菌是由菌丝和孢子构成的。其中菌丝相互交织成团，形成复杂的菌丝体，俗称霉菌。菌丝按其功能不同可分为营养菌丝、气中菌丝和生殖菌丝三种。孢子由生殖菌丝产生，分无性孢子和有性孢子二种。霉菌的菌丝体和孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。直接制片观察法：是将真菌的培养物置于美兰染色液中，制成霉菌制片观察。二、实验器材菌种：白色念珠菌、酵母菌、黑曲霉培养物染色液：0.1%的美兰染液。仪器或其它用具：显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、盖玻片等。（一）酵母菌菌落观察酵母型菌落：圆形、白色、边缘整齐、表面光滑湿润，类似细菌菌落，但是较大三、实验步骤（二）类酵母菌菌落类酵母菌：•菌落圆形、较大，类似酵母菌。•培养基内，可见假菌丝联结成假菌丝体。三、实验步骤（三）单细胞真菌的美兰浸片观察1、在载玻片的中央加一滴0.1%美兰染色液,然后按无菌操作用接种环挑取少量白色念珠菌或酵母菌的菌苔放在染液中,混合均匀。2、用镊子取一块盖玻片，先将盖玻片的一边与染液接触，然后缓慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上。3、将制片静置3min后镜检，分别用低倍镜和高倍镜观察其形态和出芽情况，并绘图记录结果。酵母菌美蓝染色：步骤：干净载玻片1滴美蓝接种环取菌涂菌盖玻片低倍镜观察高倍镜观察三、实验步骤（四）多细胞真菌的直接制片观察1、在载玻片的中央加一滴0.1%美兰染色液,然后按无菌操作用接种环挑取菌落边缘处少量已产生孢子的霉菌菌丝放在染液中,并用解剖针小心将菌丝分开。2、用镊子取一块盖玻片，先将盖玻片的一边与染液接触，然后缓慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上。3、将制片置低倍镜下观察，必要时换高倍镜观察。观察其菌丝和孢子情况，并绘图记录结果。三、黑曲霉染色：同酵母菌干净载玻片1滴美蓝镊子取菌涂菌盖玻片低倍镜观察高倍镜观察注意：取菌时，应小心夹取少许真菌，避免将菌体弄散。黑曲霉大体观黑曲霉孢子囊孢子实验报告三种真菌的美兰染色结果（画图并标注）。