蛋白质晶体的生长冻存及装载

蛋白质晶体的生长、冻存及装载技术交流晶体培养A.McPherson,CHSL2008晶体培养–原理A.McPherson,CHSL2008晶体培养–原理A.McPherson,CHSL2008晶体培养–原理A.McPherson,CHSL2008晶体培养–原理•Directmixingtoimmediatelycreateasupersaturatedcondition(BatchMethod)•Altertemperature•Altersaltconcentration(saltinginorout)•AlterpH•Addaligandthatchangesthesolubilityofthemacromolecule•Alterationofthedielectricofthemedium•Directremovalofwater(evaporation)•Additionofapolymerthatproducesvolumeexclusion•Additionofacrossbridgingagent•Concentrationofthemacromolecule•RemovalofasolubilizingagentA.McPherson,CHSL2008晶体培养–材料拭镜布池液硅化玻片蛋白样品16孔板真空硅脂晶体培养–真空硅脂晶体培养–加入池液晶体培养–点蛋白溶液晶体培养–混和池液God,plzgivemeacrystalsothatIcangraduate...晶体冻存–材料空气罐CryoTongLoopTab夹子冻存架处理晶体工具晶体晶体冻存–准备液氮晶体冻存–准备夹子晶体冻存–试保护剂（液氮法）晶体冻存–试保护剂（液氮法）晶体冻存–捞晶体晶体冻存–捞晶体晶体冻存–冻晶体晶体冻存–存晶体晶体装载–原理BernhardRupp,Crystal101晶体装载–衍射仪照明灯发射器准直镜探测屏液氮系统测角头晶体装载–衍射仪液氮气X射线底座X、Y轴Z轴旋转晶体装载–衍射仪（氦气）晶体装载–衍射仪（控制面板）晶体装载–衍射仪•记住三点–检查氦气–开门摁“DOOR”–别碰紧急按钮，除非很紧急晶体装载–取晶体晶体装载–取晶体晶体装载–装晶体Andyouprayagain...But...～8Å在96孔板中培养得到的β2肾上腺素G蛋白偶联受体的晶体晶体被装载到30或50μm孔径的MiTeGenMicroMountsloop中微晶衍射图，由27颗微晶得到了一套完整的2.4Å的数据Cherezovetal.,Science.2007318:1258-1265谢谢！