实验室生物安全及样本采集

中国检验检疫科学研究院孙肖红2013-9实验室生物安全及样本采集实验室生物安全在BSL-2操作SARS病毒在BSL-1操作未经充分灭活的SARS病毒在进行有潜在感染性的微生物的实验时使用实验室操作程序、实验室设施和安全装备生物安全保护：实验室工作人员“样品”合作者实验室维护人员环境(群体)基础实验室生物安全一级实验室（BSL-1）生物安全二级实验室（BSL-2）生物安全防护实验室高度生物防护安全实验室生物安全四级实验室（BSL-4）生物安全三级实验室（BSL-3）生物安全实验室实验室分级处理对象一级对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物致病的致病因子。二级对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因子，对健康成人、动物和环境不会造成严重危害。有有效的预防和治疗措施。三级对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过气溶胶使人传染上严重的甚至是致命疾病，或对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有预防治疗措施。四级对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，或未知的、危险的致病因子。没有预防治疗措施。病毒名称危害程度分类实验活动所需生物安全实验室级别运输包装分类f备注病毒培养a动物感染实验b未经培养的感染材料的操作c灭活材料的操作d无感染性材料的操作eA/BUN编号英文名中文名分类学地位Crimean-Congohemorrhagicfevervirus（Xinjianghemorrhagicfevervirus）克里米亚—刚果出血热病毒（新疆出血热病毒）布尼亚病毒科第一类BSL-3ABSL-3BSL-3BSL-2BSL-1AUN2814Chikungunyavirus基孔肯尼雅病毒披膜病毒科第二类BSL-3ABSL-3BSL-2BSL-1BSL-1AUN2814Denguevirus登革病毒黄病毒科第三类BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1BSL-1AUN2814仅培养物为A类Yellowfevervirus,(vaccinestrain,17D)黄热病毒（疫苗株,17D）黄病毒科第三类BSL-2ABSL-2BSL-2BSL-1BSL-1BUN3373BSL-1BSL-2BSL-3BSL-4实验室人员接受适当的培训实验室人员接受适当的免疫接种或测试–工作人员了解注射的免疫疫苗(如：作用，副作用，注射条件等)监督者对培训作评价标准微生物操作规程•个人防护•样本处理•溢出处理/消毒•生物危害垃圾•消毒/处理•紧急情况处理规定进入的政策和程序生物危害警告标志具体的实验室生物安全手册每年更新知识，接受再培训准入BSL-2,-3,and-4实验室门上贴国际生物危害标志只有专业人员才能进入实验室实验室门关闭实验室工作区禁止儿童进入动物进入动物房有专业要求和实验无关的动物不准进入实验室BSL-2、-3实验室生物安全柜(BSCs)个人防护•实验服•手套•大褂眼部和面部防护设备移液设备使用安全的离心机个人防护在实验室中工作需穿实验服戴合适的手套处理感染性物质（摘掉手套后）、动物以及离开实验室前洗手个人防护眼部和面部保护设备个人防护实验室应整洁干净，不存放与实验无关物品不在实验室储存人吃的食物和饮料实验室中不能露脚趾实验服、设备不能在实验室外使用有适合的衣服存放处不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆严禁用嘴移液严禁将东西放入嘴中避免产生溅出和气溶胶限制使用皮下注射器针头用机械装置移液短距离安全移动实验室感染性物质使用安全杯和转子在生物安全柜内密封和打开使用塑料器皿和有螺旋帽的容器溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即汇报。制定并遵守溢出处理计划书•废液倒掉前消毒•书面文档从实验室拿出时应避免污染所有的污染物(如手套，实验服等)、样本和培养物均应使用可行的消毒方法进行消毒。有溢出和每日工作结束后应消毒工作区表面有效的消毒措施–高压锅，化学消毒转移废弃物时应进行恰当的包装，并保护处理废弃物人员生物安全柜生物安全柜是为了操作人员及周围环境的安全，把在处理病原体时发生的污染气溶胶隔离在操作区域内的第一道隔离屏障，通常称为一级屏障或一级隔离物理防护设备：是用于防止病原微生物逸出和对操作者实施防护的物理或机械设备屏障是物理控制的常用方法，通过采用封闭设备和隔离设施构建而成。根据它们所处的地位和作用，设有一级屏障和二级屏障一级屏障也称一级隔离，是操作对象和操作者之间的距离，包括各级生物安全柜、动物隔离器和个人防护装备等二级屏障也称二级隔离，是生物安全实验室和外部环境的隔离，包括建筑结构、通风空调、给水排水、电气和控制系统气溶胶悬浮于气体介质中的粒径一般为0.001~100μm的固态、液态微小粒子形成的相对稳定的分散体系。生物安全柜防止操作过程中含有危害性或未知性生物微粒气溶胶散逸的空气净化安全装置。生物安全柜通常分为Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级。BSC-I型ContaminatedairundernegativepressureHEPA-filteredairRoomair保护实验人员和环境实验区无垂直层流前窗进风气流平均流速≥0.40m/s可向室内排风循环气流比例为0ContaminatedairunderpositivepressureHEPA-filteredairRoomairBSC-II-A1型保护实验人员、实验对象和环境实验区有垂直层流前窗进风气流平均流速≥0.38m/s可向室内排风循环气流比例为70%有正压污染区不能用于挥发性有毒的化学物质和挥发性的放射性物质的实验操作生物安全柜的使用•为了维持安全柜的正常运行必须定期检查高效过滤器是否有堵塞、泄漏的情况，风量及其平衡的情况，以及报警装置的情况。为了对柜内的污染充分稀释，并保证下次正常运行，在操作完毕后，至少要空转15min•前面开口部位•要使手、材料、器具等通过前面开口部位的次数最少，在操作开始前，就要把必要的器具材料放在适当的位置上。•人步行的速度很容易达到1m/s，所以在柜前行走时要特别注意。•吸附垫在操作台上放上贴有吸附材料的塑料薄膜，每日更换，可以把操作台的污染减少到最低程度•柜内实验器材和材料的取出（1）凡生物安全实验室的废弃的污染性材料、使用过的包装材料、容器、纸张等废弃物，统统都收装好或者经高压灭菌器灭菌后拿到缓冲区。（2）在实验中或完毕后，必须从安全柜中取出非灭活的病原体时，应装好放在药液槽中，使容器外侧被消毒后取出，消毒液种类因病原体不同而异。•瓶盖在安全柜内使用的瓶子不用橡胶塞，而用螺旋盖，开启时可减少气溶胶的发生。•消毒火焰用火焰消毒是古典的微生物学方法，但是由于会产生气溶胶，并使柜内气流紊乱，尽量不使用，而可以用最近研制成的小型电炉、无焰管口加热器进行消毒。在不得不使用火焰消毒法时，美国建议在安全柜内用手动灯头，日本建议用脚踏式灯头，首先用小火点燃，然后在脚下将脚踏开关一踏，主要火焰就被点着。脚踏开关一停止踏时，主要火焰即熄灭，并且采用不开通风机则不点火的联锁气闸方式，因而也较安全。。•回收容器•在安全柜内应配置回收污染物质的容器。•容器中必须配有消毒液，将污染物质完全浸没。这些回收容器至少每天操作完毕后盖好以防污染。再次使用时需重新清配制消毒液•高效过滤器的更换•（1）高效过滤器更换前，一定要将柜内表面及原高效过滤器采用甲醛灭菌。•（2）过滤器更换时，最好让使用的实验人员在场（预先询问实验时使用的细菌）。•（3）手和身体有外伤者不得进行操作，操作人员一定要戴上防毒面具和橡胶手套。•（4）取出的过滤器要立即密封放入塑料袋内，再放入纸箱内，使用过的面具、手套也要同样处理，然后一起烧毁。（5）在安装新过滤器时，不要随便将头和身体伸到柜内，同样要高度谨慎操作。废弃物处理医疗废弃物的分类•感染性废弃物:指疑似包含实验室病原体培养物、来自隔离病房的废物、组织等•病理废物:人的身体的部分组织或体液、血液、其他体液•利器:针、输液器、解剖刀、剪刀、刀片、破碎的玻璃•药物废弃物:过期或不再需要的医药品、被药物污染或含有药物的物品•具遗传毒性的废物:包含细胞毒性药物及具有遗传毒性的化学药物•化学废弃物:包含实验室使用的化学物质——试剂、消毒剂、溶剂•高含量重金属废弃物:电池、破碎的体温计、血压计•喷雾剂:（高压）贮气筒,药筒或气雾剂•放射性废弃物:来自放射治疗及实验研究的液体，被污染的玻璃器具、包装、尿样或者已用未密封的放射性核素治疗或检查的患者排泄物医疗废弃物的分类处理医疗/实验室废弃物的步骤•产生•分离•收集•运输•贮存•处理•最终销毁•制订和执行废弃物处理计划•为医疗/实验室废弃物的处理鉴别方法安全措施与险情处理高危险废弃物低危险废弃物实验室废弃物可处理的卫生用品人/动物组织干燥的血液和体液利器新鲜的血液和体液细胞毒素医学实验室高致病性废物的处理步骤方法分离-预处理之前保存在医疗区域;-从其他普通或医疗废物中分离出来;-置于密封的袋子或容器中预处理在与其他医疗废弃物合并之前应当预处理（高压灭菌或化学处理）包装黄色袋子要贴好生物危害标识标记机构和部门的名称、废弃物的种类、日期、名称或密封袋子/容器的人的签名贮存、运输、处理DisinfectedHIWstored,transportedanddisposedofwithotheryellow-baggedwaste.医疗/实验室废弃物的分离和收集一般处理和销毁的方法•高压灭菌•微波消毒系统•化学消毒•焚烧•填埋–高压灭菌器•袋子应当是塑料制品，且耐高温•消毒等级的评估:–生物(细菌或其他)或化学试剂蒸汽灭菌•可以被处理:–利器–培养物–被血液污染的物品–绷带,亚麻制品–无化学药品的实验室废弃物•不可以被处理:–来自化学疗法处理的废弃物–汞–挥发或半挥发的有机化合物、–放射性废弃物–其他具有危害的化学废弃物蒸汽消毒高压灭菌锅–低成本，设备简单–对环境无害–不适用于组织和动物尸体–需要一定的操作培训蒸汽灭菌微波照射–大量废弃物•微波的消毒不是原材料直接暴露于微波中的结果•微波能量使废弃物中的湿气产生蒸汽•破坏废弃物中的致病体化学消毒•化学消毒剂的特性是使病原体失活•化学消毒剂的有效性依赖于：温度pH其他综合因素•抗生素作用于-分子水平-细胞水平破坏细胞骨架和细胞膜改变蛋白或DNA的合成或引起酶的抑制作用•可以被处理:–利器–培养物及其原料–被血液、人的体液、和动物废弃物污染的物品–来自手术室和隔离病房的废物–医用绷带及其制品等–物化学药品的实验室废弃物•不可被处理:–来自化学疗法处理的废物–汞–挥发或半挥发的有机化合物、–放射性废弃物–其他具有危害的化学废弃物化学消毒–需要废弃物的粉碎–可能使强化学物质进入环境中–通常人和动物组织不用此方法消毒–特殊物品的销毁需要避免对环境的污染化学消毒低技术的焚烧–废弃物的不完全燃烧–可能不会破坏所有的致病原–焚烧炉是二恶英和呋喃的主要来源。二恶英和呋喃是需要全球尽量减少排放和最终消除的十二大物质之首•中等技术的焚烧–某些尝试控制焚烧过程的处理方法高等技术的焚烧•温度控制在900-1000°C•控制空气污染设备•副产物、气体从初级焚烧炉进入次级焚烧炉中、高等技术的焚烧处理技术比较焚烧高压灭菌微波化学消毒原生质热解成本高中高低高废弃物的适用性不适于放射性废弃物除病理废弃物除细胞毒性废弃物、放射性废弃物液体废弃物所有操作的难易度难易易易难废弃物体积的减少程度明显不明显明显明显气味问题有轻轻轻环境影响有无无有无废水的处理•医院/实验室的全体成员应为减少浪费水资源，减少排入下水道的体液、化学物质和药品。•所有成员都要接受废水处理方法的培训，并作为日常学习的一部分。64样本采集1.鼻拭子标本的采集•病人头部尽量保持不动，将聚醋纤维头拭子轻轻转动缓缓插入病人鼻孔至颚部，停留数秒吸取分泌物，轻轻旋转取出拭子，置采样管折断手接触部位的塑料柄，使拭子浸泡至采样液中，旋紧管盖。65•2.咽拭子标本的采集•嘱咐病人放松，发“啊”声，立即用压舌板压住病人舌前2/3，聚酣纤维头拭子适度用力多次抹擦悬雍垂(腭垂或小舌)后部咽后壁及双