ABO、RH 血型系统及鉴定

ABO、RH血型系统及鉴定CompanyLogo血型概述血型是人类血液以血型抗原为表现形式的遗传性状，血型由血型基因决定，是血细胞的主要特征之一。ABO血型系统（bloodgroupsystem）和Rh血型系统是红细胞的2大血型抗原抗体系统，在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。血型鉴定和交叉配血是保证输血安全的主要措施。CompanyLogo主要内容ABO血型系统ABO血型系统背景ABO血型系统抗原ABO血型系统抗体ABO血型系统亚型ABO血型鉴定检测原理鉴定方法方法学评价质量保证临床意义RH血型系统RH血型系统的命名RH血型系统抗原RH血型系统抗体RH血型鉴定RH血型检测方法及检测原理方法学评价质量保证临床意义CompanyLogoABO血型系统背景ABO血型系统---免疫原性最强1900年，出生于奥地利的美国免疫学家KarlLandsteiner(1868-1943年)发现不同个体的红细胞膜表面A、B血型抗（blood-groupantigen）和血清中抗A、抗B血型抗体（blood-groupantibody）各不相同，其分布具有一定的规律性。根据红细胞膜上是否存在A、B抗原及血清中是否存在抗A、抗B抗体，可将人类血型分为A、B、AB和O型。红细胞膜表面只有A抗原者为A型，其血清中通常存在抗B抗体；红细胞表面只有B抗原者为B型，其血清中通常存在抗A抗体；红细胞膜表面同时具有A抗原B抗原者为AB型；红细胞膜上既无A抗原又无B抗原者为O型。CompanyLogoABO血型系统抗原—组成和遗传ABO血型系统抗原是存在于红细胞膜上的一种糖蛋白，由多肽和糖链组成。在人类的遗传特性中有一对分别来自母亲和父亲的A、B、O血型基因（bloodtypesgene）,主要功能是调控血型抗原的合成，表型即所检测到的红细胞血型。A和B基因是显性基因，O基因则是隐性基因。因此，表型为A的个体其基因型可能是AA或AO，表型为B的个体其基因型可能是BB或BO。A血型和B血型的主要抗原成分分别由A、B基因调控。除ABO血型基因外，存在于ABO各型红细胞膜上的H抗原是形成A、B血型抗原的结构基础，H抗原又称H物质，受H基因的调控，H基因的遗传与ABO基因无关。H物质抗原性较弱，血清中一般测不出H抗体。妊娠5-6周的胎儿红细胞已能测出ABO血型抗原。新生儿ABO血型的抗原性较弱，约为成人的20%，以后随年龄的增长而不断增强，20岁左右到达高峰，进入老年期逐渐减低。人的ABO血型抗原一般终身不变。CompanyLogoABO血型系统抗原—组成和遗传血型红细胞膜抗原血清中抗体AA抗BBB抗AABA,B-O-抗A，抗B表1人类ABO血型系统血型（表型）基因型血型（表型）基因型AAA,AOABABBBB,BOOOO表2ABO血型的表型与基因型CompanyLogoABO血型系统抗原—分布A、B、H抗原主要存在于红细胞膜上。同时也分布在白细胞、血小板及其他组织细胞上。组织细胞合成并分泌的水溶性A、B、H血型抗原多为半抗原，称为血型物质（blood-groupsubstance）,血型物质广泛存在于人体的各种体液和分泌物中，以唾液中含量最高，其次是血清、尿液、精液、羊水等。体液中含有血型物质者为分泌型，体液中不含血型物质者为非分泌型。血型物质具有与相应抗体反应的性质，测定唾液血型物质可协助鉴定ABO血型，检查羊水血型物质可以预测胎儿血型。CompanyLogoABO血型系统抗体ABO血型抗体按其来源可分为天然抗体和免疫性抗体。天然抗体主要由自然界中具有与A、B血型抗原结构相同的物质刺激机体的免疫系统产生，主要为IgM型免疫球蛋白。免疫性抗体则来自母婴血型不合的妊娠或血型不合的输血，新生儿血清中的抗体通常是来自母体的IgG型免疫球蛋白。抗体在出生后3-6个月开始出现，青春期达到高峰，持续终身，但其效价随年龄增高而逐步降低。CompanyLogoABO血型系统抗体表3ABO血型系统抗体的特性特性IgM型IgG型分子量（kD）1000160耐热性（70℃）破坏稳定与红细胞结合最适温度（℃）4-2537与红细胞反应介质生理盐水酶处理或清蛋白溶液被血型物质中和能不能通过胎盘不能能CompanyLogoABO血型系统亚型A、B血型因抗原结构的差异在同一血型形成若干亚型。A抗原的主要亚型有A1和A2，约占A型血的99.9%。A1和A2红细胞均能与抗A血清发生直接凝集反应。由于存在A1和A2亚型，因此AB血型中也存在相应的A1B和A2B亚型，中国人A、AB血型以A1、A1B亚型为主，A2、A2B亚型仅占1%。B亚型较少见，且抗原性弱，故临床意义不大。CompanyLogoABO血型系统亚型血型红细胞表面血清中抗A、抗B抗体与抗血清的反应A、B抗原抗A抗B抗A1A1A1和A抗B，抗HA2A抗B和抗A1(1%-2%）A1BA1，A和B抗HA2BA和B抗A1（25%）BB抗A，抗A1O无抗A，抗B和抗A1++++----+++-+-+---表4ABO亚型抗原抗体及抗原与抗血清的反应CompanyLogoABO血型检测原理输血安全是临床输血的首要问题，正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。检测原理：血型抗原与相应抗体在反应介质中形成红细胞和相应血型抗体结合的免疫复合物，出现肉眼可见的凝集现象。用已知的特异性标准血清检查红细胞的未知血型抗原称为正向定型（directtyping）,用已知血型的标准红细胞检查标本中的未知血型抗体称为反向定型（indirecttyping）。CompanyLogo鉴定方法盐水凝集法：ABO血型抗体以IgM为主，IgM为五聚体免疫球蛋白，其相对分子质量大，是完全抗体。IgM抗体克服红细胞表面排斥作用能力强，在生理盐水中与含有相应ABO血型抗原的红细胞结合，出现肉眼可见的凝集现象。CompanyLogo鉴定方法凝胶微柱法：利用凝胶分子筛作用和亲和效应，以凝胶微柱为反应介质，在透明塑料卡上凝胶管的凝胶介质中的红细胞与相应抗体结合，形成红细胞凝块，经低速离心处理，凝胶红细胞悬浮的凝胶中，未结合抗体的红细胞则沉于凝胶底部。本法用单克隆抗体，特异性高。根据不同需要可选用中性凝胶、特异凝胶或抗球蛋白凝胶作为反应介质。结果既可肉眼观察，也可用血型分析仪分析。CompanyLogo方法学评价盐水凝集法可分为玻片法和试管法，操作简便，无需特殊仪器。玻片法：无需离心，适用于血型普查。但反应时间长，灵敏度差，凝集较弱时易导致定型错误。血清抗体效价低时不易出现凝集，故不适于反向定型。试管法：用离心法加速血型抗原抗体反应，故所需时间短，适于急诊定型。因离心增强红细胞凝集，可发现较弱的凝集现象，有助于检出亚型，故为常用血型鉴定方法。CompanyLogo方法学评价凝胶微柱法重复性好，特异性和灵敏度高，结果准确。因可在凝胶中加入抗球蛋白，有助于促进红细胞特异性凝集。试剂、标本定量加样；可用手工、半自动、全自动操作。全自动仪器分析不仅可减少人为误差，还便于临床输血计算机管理。试剂成本较高，需用离心设备。CompanyLogo结果判断正向定型反向定型结果判断标准血清+被检者红细胞标准红细胞+被检者血清抗A抗B抗ABA型B型O型(O型血清)红细胞红细胞红细胞+-+-+-A型-+++--B型+++---AB型---++-O型表5ABO血型正、反向鉴定及结果判断CompanyLogo质量保证1.标准血清标准血清新鲜，应在有效期内使用，效价高，凝集力强，正确存放，严防污染。常用的抗血清有：人血清ABO血型抗体：1.特异性高。2.凝集效价：抗A不低于1:128，抗B不低于1:64。3.亲和力：反应开始15s内即出现凝集，3min时明显凝集，血凝块大于1mm*1mm。4.稳定性高。5.已灭火补体。人ABO血型单克隆抗体：1.特异性：抗A抗体特异凝集具有A型红细胞抗原的A1、A2、A1B、A2B；抗B抗体只凝集含B抗原的B和AB型红细胞。2.亲和力：国家标准是抗A对A1、A2、A2B分别为15s、30s、45s；抗B对B型红细胞为15s。3.凝集效价：国家标准是抗A1、抗B均大于1:128。4.稳定性：较人血清抗体的稳定性低。CompanyLogo质量保证2.被检红细胞标本新鲜，严防污染。细菌污染的标本或严重细菌感染患者的红细胞上T抗原被激活，与标准血清中的T抗体结合，出现全凝集现象，干扰血型鉴定。某些疾病如多发性骨髓瘤、慢性肝病所致的高球蛋白血症在作ABO血型鉴定时出现假凝集，可加做自身血清和红细胞，自身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果进行鉴定。当疑有血浆成分干扰血型鉴定时可用生理盐水反复洗涤红细胞以除干扰。CompanyLogo质量保证3.试验器材所用器材必须清洁、干燥，试管、滴管要专用，标记清楚。用试管法定型时，应同时进行正向和反向定型。每批测定均须设置对照。红细胞浓度按要求配置，红细胞与相应抗体的比例适当。反应温度、反应时间、离心时间是血型鉴定的重要影响因素，要按操作规程严格控制。仔细观察结果，注意出现弱A亚型和弱B亚型，肉眼判断有疑问时，必须用显微镜复查。CompanyLogo质量保证4.综合分析试验结果对异常现象如正、反向定型结果不一致时，要查找原因，解决存在问题。准确无误登记结果，经仔细核对后方可发出报告。CompanyLogo临床意义输血血型鉴定是临床输血的首要步骤，输血前必须准确鉴定受血者及供血者的血型，选择同型血源，经交叉配血相符后才能实施输血。器官移植ABO血型抗原是一种广泛分布于人体器官组织血管内皮细胞表面的移植抗原。在器官移植时，应力求受体和供体间ABO血型一致，否则供体中的血型抗体可作用于移植物血管内皮表面的ABO血型抗原发生超急性排斥反应，导致移植失败。新生儿溶血病母子ABO血型不合的妊娠后期，由于局部胎盘破裂造成少量胎儿红细胞进入母亲的血液循环，刺激母体免疫系统产生针对胎儿红细胞的IgG型血型抗体，当抗体效价大于1:64时，胎儿发生溶血病的几率增高。其他ABO血型检查还可用于法医学鉴定及某些疾病的相关调查。CompanyLogoRH血型系统的命名Fisher-Race命名法（CDE命名法）CDE命名法简明易懂，为临床常用。其要点是：Rh血型系统的遗传基因是位于1号染色体短臂上的连锁基因，每条染色体有三个连锁的基因位点，依次排列为CDE。各基因位点由一对等位基因组成。CDE三个连锁基因以复合体的形式遗传。由三个连锁基因可产生8种基因组合和36种遗传型CompanyLogoRH血型系统的命名Rh系统表型及基因型根据CDE命名法，人类红细胞的Rh抗原理论上有C、D、E和c、d、e共6种，由于尚未发现d抗体，相应也未发现d抗原。因此现有5种Rh抗原，相应有5种Rh抗血清。临床实验室常用5种Rh抗血清鉴定红细胞上的Rh抗原，其中D抗原最为重要。根据红细胞上有无D抗原将红细胞分为Rh阳性和Rh阴性，中国人约99.6%为Rh阳性，0.4%为阴性。CompanyLogoRh血型系统抗原及抗体Rh血型系统抗原Rh血型系统抗原强度仅次于ABO血型系统的A抗原及B抗原。目前已发现的Rh抗原有45种，其中与人类关系最为密切的是D、E、C、c、e五种，其中以D抗原的抗原性最强，依次是E、C、c、e。Rh血型系统抗体天然Rh抗体极少，绝大多数Rh抗体由输血或妊娠刺激机体免疫系统产生的IgG型免疫性抗体。主要Rh血型系统抗体有抗D、抗E、抗C、抗c、抗e五种。其中抗D最为常见。在盐水介质试验系统中可检测出某些Rh抗体，表明这些Rh抗体具有IgM的性质可能来自免疫反应抗体形成早期。CompanyLogoRh血型检测方法及原理酶介质法红细胞表面的唾液酸带负电荷，使用木瓜酶或菠萝酶破坏红细胞表面的唾液酸，降低红细胞表面的负电荷，减少细胞间的排斥力，促进Rh抗原与相应抗体间的结合从而产生红细胞凝集。聚凝胺试验（polybrenetest）聚凝胺是带高价阳离子的季铵盐，溶解后产