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土壤中无机元素与山茱萸药材质量的相关性分析陈随清张涛尚朝利（河南中医学院郑州450008）摘要：目的：分析山茱萸生长地土壤中无机元素对山茱萸药材质量的影响关系。方法：对各产区山茱萸药材及土壤中无机元素进行测定；对山茱萸药材中的马钱苷、熊果酸、多糖、鞣制、总有机酸、水溶性浸出物、醇溶性浸出物进行测定；分析土壤中无机元素与山茱萸药材质量的相关性。结果：三个主产区内，山茱萸药材各化学成分含量没有明显差异，山茱萸药材中马钱苷，水溶性浸出物的含量都符合05版药典规定；山茱萸药材中铁、锰、钾、钙、镁元素的含量较高；铜、镉、砷、铅、汞元素含量较低。结论：山茱萸药材对镁、锰、锌元素有富集作用，对钙、钾、汞元素有显著的富集作用，对铁、铜、镉、砷、铅元素富集性不强。关键词：山茱萸，无机元素，微波消解，原子吸收光谱法StudyonthecorrelationbetweenthequalityofCornusofficinalisandthecontentsoftheinorganicelementsinthesoilwhereCornusofficinaliscollectedCHENSui-qingZHANGTaoSHANGChao-li(HenanUniversityofTraditionalChineseMedicineZhengZhou450008)AbstractObjective:AnalysisthecorrelationbetweenthequalityofCornusofficinalisSieb．etZucc．andthecontentsoftheinorganicelementsinthesoilwhereCornusofficinaliscollected;Method:Determinedthecontentsof11kindsofinorganicelementssuchasZn,Mn,K,Fe,Mg,Ca,Cu,Cd,As,PbandHginthesoilwhereCornusofficinaliscollected;DeterminedthecontentsofLoganin,ursolicacid,polysaccharides,tannins,organicacid,water-solubleextractives,ethanol-solubleextractivesinCornusofficinalis;AnalysisthecorrelationbetweenthequalityofCornusofficinalisandthecontentsoftheinorganicelementsinthesoilwhereCornusofficinaliscollected.Results:inthethreemainproducingareasofCornusofficinalis,thereisnosignificantdifferenceinthecontentofchemicalcomponentsofCornusofficinalis,thecontentsofLoganinandwater-solubleextractcomplywithpharmacopoeialprovisions.InorganicelementssuchasFe,Mn,K,CaandMghaveahighcontentsinCornusofficinalis.Conclusion:CornusofficinalishaveanenrichmentEffectoncontentsofinorganicelementssuchasMg,MnandZn;CornusofficinalishaveahighenrichmentEffectoncontentsofinorganicelementssuchasCa,KandHg;CornusofficinalishavenoobviousenrichmentEffectoncontentsofinorganicelementssuchasFe,Cu,Cd,AsandPb.keywords:CornusofficinalisSieb．etZucc．,Inorganicelements,Microwavedigestion,AtomicAbsorptionSpectrometry山茱萸，又名山萸肉、萸肉、枣皮、药枣等，是山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalisSieb．etZucc．除去果核的干燥成熟果肉，具有补益肝肾、涩精固脱的功效[1]。主产于我国的河南、浙江、陕西三省，四川、安徽、山东亦有分布[2]，以河南省栽培的产量最大。山茱萸是常用中药材，又为中成药六味地黄丸的主要原料之一，其临床疗效显著。近几年来，国内学者对山茱萸化学成分的研究有了重大进展，从山茱萸中分离出七种环烯醚萜苷类成分和数种鞣质类成分。但是关于山茱萸中无机元素方面的研究却少见报道。因此，本研究对山茱萸药材及药材产地土壤中锌、锰、钾、铁、钙、镁、铜、镉、砷、铅、汞11种元素进行了含量测定，旨在探明山茱萸药材对此11种元素的富集性，进而为山茱萸药材道地性成因的研究奠定基础。1仪器、试剂与材料1.1仪器AGLIENT8455型紫外-可见分光光度计，电子天平（BS224S，北京赛多利斯仪器系统有限公司），岛津LC-20AT高效液相色谱仪（SPD-20A型紫外检测器，CTO-10ASVP型柱温箱，CBM-102型工作站），数控超声波清洗器（KQ-500DV，昆明市超声仪器有限公司）；PHS-2C型PH计(上海大谱仪器有限公司)；PerkinElmerAanalyst800原子吸收光谱仪（美国PerkinElmer公司）；Milli-Q超纯水发生器（美国密理博公司）；MARS-5微波消解仪（美国CEM公司）；锌（Zn）、锰（Mn）、钾（K）、铁（Fe）、钙（Ca）、镁（Mg）、铜（Cu）空心阴极灯（美国PerkinElmer公司）；镉（Cd）、砷（As）、铅（Pb）、汞（Hg）无极放电灯（美国PerkinElmer公司）；电热板（浙江星亚电热电器有限公司）。2.2试剂熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号110742-200516）；马钱苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号111640-200604）；没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所，110831-200302），干酪素（北京双旋微生物培养基制品厂）。甲醇、异丙醇、乙腈为色谱纯（天津四友天津四友精细化学品有限公司），所用其它试剂均为分析纯。锌（Zn）、锰（Mn）、钾（K）、铁（Fe）、钙（Ca）、镁（Mg）、铜（Cu）、汞（Hg）、镉（Cd）、砷（As）、铅（Pb）标准液(国家有色金属及电子材料分析测试中心)，浓度均为1000μg·mL-1；硝酸、氢氟酸为优级纯；硝酸铵为光谱纯；过氧化氢为分析纯；水为超纯水，所用容器均用30%硝酸浸泡24小时，超纯水清洗后使用。1.3实验材料：山茱萸药材样品采于陕西、河南、浙江三省，经河南中医学院陈随清教授鉴定为山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalisSieb．etZucc．，土壤样品采自各批山茱萸药材植株所在区域。每个地点为一批样品，共14批样品，编号为C1-C14，每批样品包含药材及土壤各5-10份，共采集89份，编号为S1-S89。样品信息见表1表1样品信息表批号编号采集地点采集时间批号编号采集地点采集时间C1S1-S5陕西周至小王涧2009.10C8S51-S56洛阳龙峪湾2009.10C2S5-S10陕西周至厚畛子2009.10C9S57-S62洛阳陶湾2009.10C3S11--20陕西佛坪2009.10C10S63-S68西峡米坪镇2009.10C4S21-S35陕西洋县2009.10C11S69-S73西峡太平镇2009.10C5S36-S40浙江临安2009.10C12S74-S79西峡二郎坪2009.10C6S41-S45浙江淳安2009.10C13S80-S84西峡陈阳坪2009.10C7S46-S50洛阳白云山2009.10C14S85-S89西峡寨根2009.102实验方法2.1马钱苷的含量测定采用《中国药典》2005版一部20页山茱萸项下含量测定方法。方法学考察结果符合要求。2.2熊果酸的含量测定2.2.1色谱条件色谱柱:HypersilODS(250mm×4.0mm,5μm)，流动相为乙腈-甲醇-水-磷酸(60：15：25：0.1)，流速:1ml/min，检测波长:213nm，柱温：25℃。2.2.2对照品溶液的制备取熊果酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含量0.5mg的溶液，摇匀，即得。2.2.3供试品溶液的制备取本品粗粉1g，精密称定，置索氏提取器内，加乙醚适量，加热回流提取4小时，提取液回收乙醚至干，残渣加石油醚(30~60℃)浸泡2次，每次15ml(约浸泡2分钟)，倾石油醚，残渣加甲醇微热使溶解，定量转移至5ml容量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。方法学考察该结果符合要求。2.3多糖的含量测定2.3.1提取测量方法：称取山茱萸粉末0.1g，加入50ml80%乙醇溶液，振荡3小时，取出后过滤。取滤渣吹干后加入50ml蒸馏水，放置水浴锅中温浸1小时后过滤，取滤液15ml用蒸馏水定容至50ml。从中取2ml置于10ml的具塞试管中，加5%的苯酚溶液1ml,摇匀，加浓硫酸5ml，静置5分钟，然后水浴加热15分钟，取出冷却到室温，在484.4nm处测定其吸光度。方法学考察该结果符合要求。2.4鞣质含量的测定采用《中国药典》2005版一部附录57页附录X鞣质含量测定法项下测定方法测定。方法学考察结果符合要求。2.5总有机酸含量的测定采用《中国药典》2005版一部附录41页附录Ⅷ电位滴定法和永停滴定法项下电位滴定法测定，以酒石酸计，测定有机酸含量，方法学考察结果符合要求。2.6水溶性浸出物的测定采用《中国药典》2005版附录56页附录X浸出物测定法项下，水溶性浸出物测定法冷浸法测定。2.7醇溶性浸出物的测定采用《中国药典》2005版附录56页附录X浸出物测定法项下，醇溶性浸出物测定法测定。2.8药材与土壤中无机元素的测定2.8.1样品制备取山茱萸药材，粉碎，过40目筛，精密称取粉末约0.3g（土壤样品精密称取粉末约0.2g），置聚四氟乙烯消解管内，加硝酸6mL，双氧水2mL，（土壤样品另加氢氟酸2mL），混匀，置微波消解仪内，按消解程序进行消解（样品消解程序见表2），待消解完全后，将消解液体移入烧杯内，置电热板上低温加热浓缩至约1mL，放冷，用超纯水转入50mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。同法同时制备试剂空白溶液备用。表2消解程序Step功率(W)Ramp(min)Temp(℃)Hold(min)18005120128003150338004180252.8.2标准曲线分别对11种元素不同浓度标准溶液进行分析，以各元素测定时吸光度为纵坐标，各元素浓度为横坐标，做11种元素的标准曲线，标准曲线公式见表3。表311种元素的标准曲线公式元素药材土壤FeA=0.023C+0.0083A=0.0223C+0.0078MnA=0.0651C+0.0005A=0.0617C+0.0004CaA=0.9684C-0.0277A=0.9693C-0.0301MgA=0.0204C+0.0002A=0.0199C+0.001KA=0.0249C-0.0012A=0.0244C-0.001ZnA=0.176C+0.0014A=0.179C+0.0015CuA=0.021C+0.0005A=0.022C+0.0004CdA=0.0504C+0.0088A=0.0502C+0.0091AsA=0.0038C+0.0038A=0.004C+0.0031PbA=0.0032C+0.0105A=0.0029C+0.0041HgA=0.1957C-0.0307A=0.1795C+0.02