000001be_徐露-应用药理3论文

不同厂家银杏叶提取物制剂对家兔血小板聚集率及PAF含量的影响徐露董志王如伟黄黎【摘要】目的观察四个厂家的六种银杏叶提取物制剂对家兔血小板聚集率及PAF含量的影响。方法采用体内实验，观察六种银杏叶提取物制剂对由花生四烯酸（AA）、二磷酸腺苷（ADP）和血小板活化因子（PAF）诱导的家兔血小板聚集作用的影响，以及对给药前后家兔血小板活化因子（PAF）含量的影响。结果几个厂家的银杏制剂均能抑制AA、ADP、PAF诱导的家兔血小板聚集（p0.01,p0.05），并能够降低血清中PAF的含量（p0.01,p0.05）。结论银杏叶提取物制剂具有抗血小板聚集作用，并能显著降低PAF含量，不同厂家的银杏制剂作用强度也存在差异性，为临床治疗缺血性心脑血管疾病提供了参考。银杏叶具有重要的药用价值，到目前为止已知其化学成分的银杏叶提取物多达160余种，最主要的是黄酮苷和银杏内酯两类活性成分，药理实验表明，银杏提取物具有抗氧化、改变血液流变学、抗菌及提高免疫力等作用。1.材料与方法1.1仪器与试剂日本大耳白兔，体重2.0±0.2kg，雌雄各半，由重庆医科大学实验动物中心提供；银杏叶提取物制剂（浙江康恩贝、江苏省某药企、上海某药企A、上海某药企B）；AA（sigma）使用时将其溶解在1%碳酸钠溶液中，配成0.35mmol/L的浓度；ADP（sigma）溶于磷酸盐缓冲液,最终浓度为300µmol/L；PAF（cayman）溶解在PH为7.6的含0.25%小牛血清蛋白的Tris-NaCl溶液中，终浓度为3.6nmol/L；枸橼酸钠（北京中杉金桥生物技术公司）蒸馏水配成3.8%的浓度；TYXN-96多功能智能血液凝聚仪（上海通用技术研究所研制）；兔血小板活化因子(PAF)ELISA试剂盒（Uscnlife）；酶标仪（spectramaxm2多功能酶标仪）。1.2方法1.2.1分组及给药方法日本大耳白兔133只，随机分为19组，每组7只：生理盐水组、浙江康恩贝三种银杏制剂a（批号090307）、b（批号090307）、c（批号081112）各自分为高剂量（41.06mg/kg）、中剂量(20.53mg/kg)、低剂量(10.27mg/kg)，ig给药，每日三次，连续7d；江苏某药企银杏制剂（批号08071501）分为高剂量（41.06mg/kg）、中剂量(20.53mg/kg)、低剂量(10.27mg/kg)，ig给药，每日三次，连续7d；上海某药企A银杏制剂（批号080502）分为高剂量(53.36mg/kg)、中剂量(26.68mg/kg)、低剂量(13.34mg/kg)，ig给药，每日三次，连续7d；上海某药企B银杏制剂（批号0852049）分为高剂量(41.07mg/kg)、中剂量(20.53mg/kg)、低剂量(10.27mg/kg)，ig给药，每日三次，连续7d。以上各组中剂量均根据文献[1]由人体剂量换算为家兔等效剂量。1.2.2检测血小板聚集率及PAF含量每只动物首次给药前，耳缘静脉抽血1ml，室温放置2h取血清，检测给药前PAF含量。在第7d给药后1h，心脏取血7ml，分出1ml用于检测给药后PAF的含量，剩余6ml用3.8%枸橼酸钠1：9抗凝，800r/min离心10min，取上清得富血小板血浆（PRP），剩余部分3000r/min速度离心15min，取贫血小板血浆（PPP）。用PPP调节PRP，使PRP血小板数目在360×109/L。测定并记录在不同诱导剂下1min、5min及最大血小板聚集率。血小板聚集率（%）=（对照组血小板聚集率-给药组血小板聚集率）/对照组血小板聚集率×1001.2.3统计方法血小板聚集率检测用生理盐水组与给药组比较，采用成组t检验；PAF含量检测采用给药前后自身对照，用配对t检验。2.2结果2.2.1家兔血小板聚集率的检测结果检测结果表明，和对照组相比四个药厂的六种银杏叶提取物产品均能抑制AA、ADP、PAF诱导的家兔血小板聚集（（p0.05，p0.01），但主要是抑制PAF引起的血小板聚集。其中杭州某药业有限公司的a、b、c产品对PAF诱导的血小板聚集抑制率更高。（见表1-3）表一AA诱导的血小板聚集作用（x±s,n=7)组别给药剂量mg/kg给药次数（次/d）给药后聚集率（%）血小板聚集抑制率(%)1min5minMax生理盐水组等容积330.12±5.2454.15±7.5655.69±9.84浙江康恩贝a产品（高）41.06328.68±4.9838.62±6.34**43.55±6.96*21.80浙江康恩贝a产品（中）20.53329.50±5.6340.66±6.53**42.80±7.13*23.15浙江康恩贝a产品（低）10.27330.74±5.7242.49±6.58**46.14±7.6217.15浙江康恩贝b产品（高）41.06327.15±4.5735.64±5.83**40.71±6.76**26.90浙江康恩贝b产品（中）20.53329.55±5.8937.22±6.07**43.34±7.01*22.18浙江康恩贝b产品（低）10.27328.05±4.3438.41±6.44**44.28±7.93*20.50浙江康恩贝c产品（高）41.06328.69±4.4734.67±5.75**39.93±6.96**28.30浙江康恩贝c产品（中）20.53329.59±5.0436.93±6.29**42.26±6.48*24.12浙江康恩贝c产品（低）10.27330.24±5.3336.68±6.16**43.80±7.37*21.35江苏某药企（高）41.06330.75±5.4640.86±6.99**44.23±7.31*18.06江苏某药企（中）20.53330.11±5.8141.74±6.67**46.52±7.9716.47江苏某药企（低）10.27329.43±5.7744.38±7.25*47.59±8.0614.54上海某药企A（高）53.36328.17±5.5140.34±6.56**44.73±7.68*19.68上海某药企A（中）26.68329.48±5.4842.52±6.83*45.85±7.3917.67上海某药企A（低）13.34330.09±5.4543.34±6.94*45.92±7.4417.54上海某药企B（高）41.06328.64±5.6140.79±6.70**42.85±7.02*23.06上海某药企B（中）20.53330.83±5.5341.28±7.46**43.60±8.01*21.71上海某药企B（低）10.27329.12±5.3641.87±7.55*44.40±7.75*20.27与NS组比较，**p0.01,*p0.05表二ADP诱导的血小板聚集作用（x±s,n=7)组别给药剂量mg/kg给药次数（次/d）给药后聚集率（%）血小板聚集抑制率(%)1min5minMax生理盐水组等容积330.12±5.2454.15±7.5655.69±9.84浙江康恩贝a产品（高）41.06331.98±5.4740.47±7.06*44.59±7.45*20.42浙江康恩贝a产品（中）20.53331.43±5.3743.81±6.7945.31±7.86*19.13浙江康恩贝a产品（低）10.27330.85±5.8345.97±6.9847.32±7.9915.55浙江康恩贝b产品（高）41.06329.79±4.4634.83±5.93**40.17±6.78**28.31浙江康恩贝b产品（中）20.53330.88±5.5736.47±5.76**42.90±6.91*23.43浙江康恩贝b产品（低）10.27331.67±5.6939.82±6.27*45.06±8.13*19.58浙江康恩贝c产品（高）41.06330.51±5.4534.77±5.60**40.54±6.83**27.65浙江康恩贝c产品（中）20.53331.57±5.8635.48±6.31**43.73±7.22*21.95浙江康恩贝c产品（低）10.27330.75±5.7037.54±6.48**45.91±8.3618.06江苏某药企（高）41.06330.66±5.5344.67±7.9445.45±7.56*18.88江苏某药企（中）20.53331.65±5.4345.95±7.9246.11±8.2417.70江苏某药企（低）10.27331.73±5.6046.18±8.3548.69±9.0513.10上海某药企A（高）53.36330.48±5.5843.29±7.4144.50±7.36*20.58上海某药企A（中）26.68331.81±5.8344.23±6.7945.96±8.6717.97上海某药企A（低）13.34329.42±4.8345.78±7.2649.04±9.3712.48上海某药企B（高）41.06332.03±5.5942.33±6.95*44.63±7.84*20.35上海某药企B（中）20.53330.47±5.1344.82±7.5145.06±8.13*19.58上海某药企B（低）10.27330.51±5.4544.77±7.6047.29±8.2715.60与NS组比较，**p0.01,*p0.05表三PAF诱导的血小板聚集作用（x±s,n=7)组别给药剂量mg/kg给药次数（次/d）给药后聚集率（%）血小板聚集抑制率(%)1min5minMax生理盐水组等容积329.85±5.3349.15±7.5456.77±10.23浙江康恩贝a产品（高）41.06322.6±4.72*35.1±6.23**38.25±5.79**32.62浙江康恩贝a产品（中）20.53323.7±3.84*38.8±6.31**40.80±6.75**28.13浙江康恩贝a产品（低）10.27325.05±5.6844.42±6.8745.71±7.38*19.48浙江康恩贝b产品（高）41.06322.6±4.43*29.8±5.14**31.95±5.25**43.72浙江康恩贝b产品（中）20.53323.2±4.53*34.0±5.36**34.67±5.67**38.93浙江康恩贝b产品（低）10.27325.84±5.3636.5±6.19**39.60±6.68**30.24浙江康恩贝c产品（高）41.06324.38±4.4330.1±5.32**32.80±5.44**42.22浙江康恩贝c产品（中）20.53323.40±4.2537.6±6.48**35.71±7.38**37.10浙江康恩贝c产品（低）10.27324.03±4.5638.97±6.54*40.20±6.93**29.19江苏某药企（高）41.06322.87±4.8936.5±6.26**38.71±6.40**31.81江苏某药企（中）20.53323.1±4.24*37.5±6.68**39.23±6.35**30.90江苏某药企（低）10.27324.66±5.7938.81±6.46*40.93±6.66**27.90上海某药企A（高）53.36323.5±5.02*37.2±6.67**37.70±6.39**33.59上海某药企A（中）26.68323.1±5.31*37.1±6.23**37.94±7.11**33.17上海某药企A（低）13.34322.6±5.30*39.40±6.75*39.79±6.90**29.91上海某药企B（高）41.06321.16±5.14**37.6±6.48**38.46±6.13**32.25上海某药企B（中）20.53322.24±5.47*38.97±6.54*39.57±6.52**30.30上海某药企B（低）10.27322.08±5.33*36.5±6.26**40.32±6.89**28.98与NS组