04药物的杂质检查2(第二军医大学)

药物的杂质检查(二）Impuritytestofdrugs第一节概述一、药物纯度及其要求二、杂质的来源与种类三、杂质的限量第二节一般杂质的检查方法氯化物检查（ChP2010二部附录ⅧA）原理:利用药物中的微量氯化物在硝酸酸性条件下与硝酸银反应，生成氯化银交替微粒而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下产生的氯化银浑浊程度比较，判断供试品中氯化物是否符合限量规定。取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml，再加稀硝酸10ml；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0ml，用水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得。操作方法氯化物取本品0.60g，依法检查（附录ⅧA），与标准氯化钠溶液6.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.01%）。《中国药典》葡萄糖中氯化物的检查特别注意：带色供试品中氯化物检查内消色法取供试品溶液两份，于其中一份中先加入硝酸银试液，如显浑浊，可反复滤过（滤纸事先用含有硝酸的水洗净其上的氯化物），至滤液澄清，即得无氯化物杂质又具有相同颜色的澄清溶液，再加入规定量的标准氯化钠溶液与水适量，作为对照溶液；另一份中加入硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml，作为供试溶液，再依法检查。不同溶解性质的供试品溶于水的有机药物，可直接依法检查；不溶于水的有机药物，多数采用加水振摇，使所含氯化物溶解，滤除不溶物或加热溶解供试品，放冷后析出沉淀，滤过，取滤液依法检查；溶于稀乙醇或丙酮中的有机药物，可加稀乙醇或丙酮溶解后依法检查。硫酸盐检查法（ChP2010二部附录ⅧB）硫酸钡白色浑浊纳氏比色管比浊铁盐检查法（ChP2010二部附录ⅧG）红色可溶性硫氰酸铁配离子纳氏比色管比色第二节一般杂质的检查方法重金属检查法LimitTestforHeavyMetalsChP2010二部附录ⅧH第二节一般杂质的检查方法1.重金属元素的危害定义：在实验条件下能与S2-作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、铋、锑、锡等。与体内酶蛋白上的SH和S=S键牢固结合,从而使蛋白质变性失活。铅:损害神经系统，造血系统，血管和消化系统；汞:损害肾脏，造成肾功能衰竭。重金属以铅为代表。2.硫代乙酰胺法（第一法）1）原理硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5醋酸盐缓冲液）条件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物均匀混悬液。CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2SH2S+Pb2+PbS+2H+2）操作方法取各药品项下规定量的供试品，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水适量使成25ml，加硫代乙酰胺试液2ml，放置2分钟后，与标准铅溶液一定量按同法制成的对照液比较（置白纸上，自上向下透视），以判断供试品中重金属离子是否超过限量。第一法适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物，为最常用方法。3）讨论（1）适宜目视比色范围为每25ml溶液中含10g-20g的Pb，相当于每1ml含10gPb的标准铅溶液1ml-2ml。（2）溶液的pH值在3-3.5，硫化铅沉淀较完全。用醋酸盐缓冲液（pH3.5）控制溶液pH值。（3）供试品如有色：在对照溶液管中滴加少量稀焦糖溶液或其它无干扰的有色溶液；取两倍量供试品，分成两等份，在一份中加硫代乙酰胺试液，用滤膜滤除金属硫化物沉淀后，加入标准铅溶液作为对照溶液，再与另1份供试溶液比较。（4）铁盐存在微量高铁盐：加抗坏血酸或盐酸羟胺供试品中若有微量高铁离子存在，在弱酸性溶液中将氧化硫化氢而析出硫，产生浑浊，影响比色。可先加抗坏血酸0.51.0g，使高铁离子还原为亚铁离子，再按常规步骤检查。重金属与有机药物结合怎么办？重金属不溶于酸水怎么办？重金属量很低怎么办？重金属检查法3.炽灼后的硫代乙酰胺法（第二法）适用于含芳环、杂环及难溶于水、稀酸及乙醇的有机药物。1）操作方法：精密称取规定量供试品置坩埚中，在电炉上缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5-1.0ml，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500-600℃（马福炉）炽灼使完全灰化，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，微热溶解，转移入纳氏比色管，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，依第一法检查。2）讨论（1）炽灼温度：温度太低，灰化不完全；温度太高，重金属损失越多，如铅在700℃经6小时炽灼，回收率仅为32%。应控制在500~600℃炽灼使完全灰化。（2）炽灼残渣加硝酸加热处理后，必须蒸干除尽氧化氮，否则亚硝酸可使硫化氢氧化析出硫。（3）为了消除盐酸或其他试剂中可能夹杂重金属的影响，对照溶液应取同样、同量试剂在坩埚中蒸干后，依法检查。(空白试验)（4）含钠盐或含氟的有机药物在炽灼时能腐蚀瓷坩埚，应改用铂坩埚。4.硫化钠法（第三法）适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物。操作方法：取规定量的供试品，加氢氧化钠试液5ml和水20ml使溶解后，加硫化钠试液5滴，再与一定量标准铅溶液经同样处理后的颜色进行比较。司可巴比妥钠中重金属的检查取本品1.0g，依法检查（附录ⅧH第三法），含重金属不得过百万分之二十（20ppm）。硫化钠试液对玻璃有一定的腐蚀性。硫化氢试液有恶臭和毒性，不稳定，浓度也难以控制，应临用新配。5.微孔滤膜法（第四法）重金属限量低时，用纳氏比色管难以观察，用微孔滤膜滤过，重金属硫化物沉积于微孔滤膜上形成色斑，与一定量的标准铅溶液同法处理后产生的色斑比较，确定重金属是否超过限量。EUROPEANPHARMACOPOEIA6.0,(2008)HEAVYMETALSMETHODE滤器上盖部分连接头滤器下盖部分滤膜垫圈尼龙垫网待测液注射器转移、压滤微孔滤膜过滤法检重金属装置第一法：硫代乙酰胺法，适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。第二法：有机破坏法，适用于含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸、乙醇的有机药物。第三法：碱溶解法，适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物。第四法：微孔滤膜法，适用于含2-5µg重金属杂质的检查。重金属检查法砷盐检查法LimitTestforArsenicsChP2010二部附录ⅧJ第二节一般杂质的检查方法砷元素的危害砷为毒性杂质，扩张毛细血管，麻痹血管舒缩中枢，使腹腔脏器严重充血，引起肝、肾、心等实质器官的损害。（一）古蔡（Gutzeit）氏法原理利用金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，判定药物中砷盐的含量。其反应式如下：As3++3Zn+3H+AsH3+3Zn2+AsO33-+3Zn+9H+AsH3+3Zn2++3H2OAsH3+2HgBr22HBr+AsH(HgBr)2黄色AsH3+3HgBr23HBr+As(HgBr)3棕色溴化汞试纸醋酸铅棉花反应液标准品样品Gutzeit法检砷装置ABC标准砷斑的制备：精密量取标准砷溶液2ml(1μg/ml)，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将装妥的导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置25~40℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得。取按各品种项下规定方法制成的供试品溶液，置A瓶中，照标准砷斑制备方法操作，将供试品砷斑与标准砷斑比较，不得更深。砷盐取本品2.0g，加水5ml溶解后，加稀硫酸5ml与溴化钾溴试液0.5ml，置水浴上加热约20分钟，使保持稍过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾溴试液适量，并随时补充蒸散的水分，放冷，加盐酸5ml与水适量使成28ml，依法检查（附录ⅧJ第一法），应符合规定（0.0001%）。《中国药典》葡萄糖中砷盐的检查Q1：供试品2.0g与标准砷溶液2ml形成的砷斑比较的做法(1)，供试品1.0g与标准砷溶液1ml形成的砷斑比较的做法(2)，哪个合适？Q2：为何加碘化钾及氯化亚锡？Q3：醋酸铅棉花的作用与注意事项Q4：为何选用溴化汞试纸而不选用氯化汞试纸，注意事项有哪些？（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法(Ag-DDC法)原理砷化氢与Ag(DDC)吡啶溶液作用，使Ag(DDC)中的银还原为红色胶态银，与相同条件下一定量标准砷溶液所呈色用目视比色法或在510nm处测定吸收度，进行比较。（三）次磷酸法原理在盐酸酸性液中，次磷酸将砷盐还原为棕色的游离砷，与一定量的标准砷溶液用同法处理后所显颜色比较，来控制药物中的砷限量。——用于硫化物、亚硫酸盐及含锑药物等的砷盐检查时不产生干扰，但灵敏度比古蔡氏法低。各国药典砷盐检查法•ChP（2010）古蔡氏法、Ag（DDC）法•Ph.Eur.(2008)古蔡氏法、次磷酸法•USP（2009）Ag（DDC）法溶液颜色检查法（ChP2010二部附录ⅨA）控制药物中有色杂质的含量。与标准比色液比较、分光光度法或色差计法。易炭化物检查法（ChP2010二部附录ⅧO）检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。溶液澄清度检查法（ChP2010二部附录ⅨB）澄清度是检查药品溶液的混浊程度，反映不溶性杂质的存在情况（特别是用作注射剂的原料药纯度控制）。第二节一般杂质的检查方法炽灼残渣检查法（ChP2010二部附录ⅧN）有机药物经炽灼炭化，至完全灰化，使非挥发性无机杂质（多为金属的氧化物或盐类）成为硫酸盐，称为炽灼残渣。(700-800℃)干燥失重测定法（ChP2010二部附录ⅧL）药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，以百分率表示。主要控制药物中的水分，也包括其他挥发性物质如乙醇等。水分测定法（ChP2010二部附录ⅧM）药物中的水分包括结晶水和吸附水。ChP和USP均收载费休氏法和甲苯法测定药物中的水分。第二节一般杂质的检查方法残留溶剂测定法（ChP2010二部附录ⅧP）苯/benzenebp80.1℃氯仿/chloroformbp61.2℃1,4-二氧六环/dioxanebp101.4℃二氯甲烷/dichloro-methanebp40.0℃吡啶/pyridinebp115℃甲苯/toluenebp110.6℃环氧乙烷/ethyleneoxidebp11℃种类多，毒性大，检测要求高。残留溶剂测定法确定残留溶剂的研究对象残留溶剂分类残留溶剂表示方法A.允许日接触量PDEB.浓度限度(%)=%100)/(1000)/(天剂量天gmgPDE药物中常见残留溶剂及其限度第一类溶剂（毒性大且有致癌并对环境有害，避免使用）溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)苯0.020.0002四氯化碳0.040.00041,2-二氯乙烷0.050.00051,1-二氯乙烷0.080.00081,1,1-三氯乙烷15.00.15第二类溶剂（对人有一定毒性，限制使用）溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)乙腈4.10.041氯苯3.60.036三氯甲烷0.60.006环己烷38.80.3881,2-二氯乙烯18.70.187二氯甲烷6.00.06第二类溶剂溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)乙二醇6.20.062甲酰胺2.20.022正已烷2.90.029甲醇30.00.3甲基环已烷11.80.118第二类溶剂溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)N-甲基吡咯烷酮5.30.053吡啶2.00.02甲苯8.90.089N,N-二甲氧基甲酰胺8.80.0881,4-二氧六环3.80.038第三类溶剂（对人健康危险性较小，推荐使用）溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)乙酸50.00.5丙酮50.00.5正丁醇50.00.5二甲亚砜50.00.5乙醇50.00.5第三类溶剂溶剂名称PDE值(mg/天)限度(%)乙酸乙酯50.00.5乙醚50.00.5正丙