05巴比妥类药物的分析(第二军医大学)

药物结构与分析方法Ⅰ巴比妥类药物的分析AnalysisofBarbiturates“巴比妥”，于1864年由A.VonBaeyer合成;1903年1月，巴比妥申请专利保护，并由拜尔制药公司开始生产和销售，商品名“佛罗那”；1911年，拜尔公司生产药效更佳催眠药“苯巴比妥”，商品名“鲁米那”（Luminal）；1923年，美国EliLilly公司科学家合成出异戊巴比妥（阿米妥Amytal）；1929年，美国肖恩尔（Shonle）合成“司可巴比妥钠”（速可眠Seconal）。巴比妥类药物的发展史Contents化学结构1理化性质2典型药物3分析方法4巴比妥类药物的基本结构通式巴比妥类药物的基本结构：母核部分，即巴比妥酸的环状丙二酰脲结构，此结构是巴比妥类药物的共性部分，可用于与其他类药物相区别；取代基部分，即R1和R2，根据取代基的不同形成各种具体的巴比妥类药物，具有不同的理化性质，可用于各种巴比妥类药物之间的相互区别。巴比妥类药物的分析CCOCONHNHCOR1R2CCOCNNCO-R1R2O--H++H+pK2=12CCOCONNHCO-R1R2-H++H+pK1=8酮型keto-formCCOCONNHCOHR1R2烯醇型enol-form巴比妥类药物的弱酸性理化性质ONa+AgNO3+Na2CO3CCONHCNCOR1R2R2R1CCONNCOCAgONa+NaHCO3+NaNO3ONa+AgNO3R2R1CCONNCOCAgAgCOCCONNCOR1R2Ag+NaNO31、与银盐的反应理化性质丙二酰脲类鉴别反应部分离子化水-吡啶+2NNCu2+OR2R1CCONHCNCO-22-+SO42+CuNN+CuSO4N++H-R2R1CCONHCONHCOR2R1CCONHCNCOOHCCONHCNCOR1R2OOR2R1CCONHCNCOCCONHCNCOR1R2ONNCu2、与铜盐的反应丙二酰脲类鉴别反应铜盐反应产物NCCOCONNHCOR1R2CCOCONNHCOR1R2CuNSS*硫代巴比妥生成绿色沉淀巴比妥类呈紫堇色或生成紫色沉淀理化性质丙二酰脲类的鉴别反应ChP2010（附录Ⅲ）取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml与水10ml，振摇2min，滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液，即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。取供试品约50mg，加吡啶溶液(1→10)5ml，溶解后，加铜吡啶试液1ml，即显紫色或生成紫色沉淀。特殊取代基或元素反应苯环反应不饱和烃反应硫元素的反应理化性质IIONaONaCH3C3H7CHCCONHCNHCOCH2CHCH2I2CH2CHCH2CCONHCNHCOC3H7CHCH3+（司可巴比妥钠）（一）不饱和取代基的反应--司可巴比妥钠（二）芳香取代基的反应--苯巴比妥PbSPb2H3C(CH2)2CHCCONHCNHCOH5C2S2++PbSNaH5C2CCONHCNHCO2H3C(CH2)2CH（硫喷妥钠）（三）硫元素的反应典型药物CH5C2COCONHNHCO苯巴比妥镇静催眠药、抗惊厥药，ChP2010收载苯巴比妥、苯巴比妥片、苯巴比妥钠及注射用苯巴比妥钠。苯巴比妥的生产工艺CH2CONH2，水解酯化C2H5OH,H2SO4CH2COOC2H5缩合OCOC2H5OC2H5,C2H5ONaCCCOOC2H5ONaCOOC2H5,酸化消除HCl(I)CHCOOC2H5COOC2H5乙基取代C2H5BrCCOOC2H5COOC2H5(II)C2H5环合H2NH2NCO,CH3ONaNNONaOH3CHO酸析HClNNHOOH3CHO苯巴比妥的质量标准苯巴比妥的质量标准苯巴比妥的质量标准苯巴比妥的质量标准专属鉴别试验苯环取代反应与硫酸-亚硝酸钠反应显橙黄色橙红色与甲醛-硫酸反应接界面显玫瑰红色红外光谱本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集227图）一致。一般鉴别试验丙二酰脲类的鉴别试验（ChP2010附录Ⅲ）银盐反应;铜盐反应鉴别酸度乙醇溶液的澄清度有关物质中性或碱性物质干燥失重水分及其他挥发性物质炽灼残渣非挥发性无机杂质检查特殊杂质苯巴比妥特殊杂质的来源C2H5Br［乙基化］C2H5OH,H2SO4［水解］［酯化］CH2CONH2，CH2COOC2H5C2H5ONaOCOC2H5OC2H5HCl［酸化］，［消除］CCOOC2H5COOC2H5C2H5ⅢCHCOOC2H5COOC2H5ⅡCCONaCOOC2H5COOC2H5Ⅰ酸度检查方法：取本品0.20g，加水10ml，煮沸搅拌1分钟，放冷，滤过，取滤液5ml，加甲基橙指示液1滴，不得显红色。CHCOOC2H5COOC2H5Ⅱ中间体Ⅱ乙基化不完全时，Ⅱ会与尿素缩合产生苯基丙二酰脲杂质，能使甲基橙指示剂显红色。COHHNHHNCHCOHNCOHNO乙醇溶液的澄清度检查方法：取本品1.0g，加乙醇5ml，加热回流3分钟，溶液应澄清。利用苯巴比妥酸杂质在乙醇溶液中溶解度小的性质进行检查，严格控制其限量。有关物质检查方法：取本品，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置200ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法（附录ⅤD）试验，用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（25:75）为流动相，检测波长为220nm;理论板数按苯巴比妥峰计算不低于2500，苯巴比妥峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。取对照溶液5μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的15%；精密量取供试品溶液与对照溶液各5μl,分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积（0.5%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍（1.0%）。中性或碱性杂质中间体Ⅰ副产物2-苯基丁酰胺、2-苯基丁酰脲或分解产物等杂质，不溶于NaOHTS而溶于醚;而苯巴比妥具有酸性，溶于NaOHTS。提取重量法测定杂质含量。检查方法：取本品1.0g，置分液漏斗中，加氢氧化钠试液10ml溶解后，加水5ml与乙醚25ml，振摇1分钟，分取醚层，用水振摇洗涤3次，每次5ml，取醚液经干燥滤纸滤过，滤液置105℃恒重的蒸发皿中，蒸干，在105℃干燥1小时，遗留残渣不得过3mg。炽灼残渣不得过0.1％。（ChP2010附录ⅧN）干燥失重取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过1.0％。（ChP2010附录ⅧL）检查123含量测定银量法溴量法紫外-可见分光光度法4高效液相色谱法银量法ChP2010测定苯巴比妥取本品约0.2g，精密称定，加甲醇40ml使溶解，再加新制的3%无水碳酸钠溶液15ml，照电位滴定法（附录VIIA），用硝酸银滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于23.22mg的C12H12N2O3。银量法ChP2010测定异戊巴比妥取本品约0.2g，精密称定，加甲醇40ml使溶解，再加新制的3%无水碳酸钠溶液15ml，照电位滴定法（附录VIIA），用硝酸银滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于22.63mg的C11H18N2O3。溴量法ChP2010测定司可巴比妥钠取本品约0.1g，精密称定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加盐酸5ml，立即密塞并振摇1分钟，在暗处静置15分钟后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mo/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正，即得。每1ml溴滴定液（0.05mol/L）相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。紫外-可见分光光度法ChP2010测定注射用硫喷妥钠取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量(约相当于硫喷妥钠0.25g)，置500ml量瓶中，加水使硫喷妥钠溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用0.4%氢氧化钠溶液定量稀释制成每1ml中约含5µg的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA），在304nm的波长处测定吸光度；另取硫喷妥对照品，精密称定，用0.4%氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含5µg的溶液，同法测定。根据每支的平均装量计算。每1mg的硫喷妥钠相当于1.091mg的C11H17N2NaO2S。高效液相色谱法ChP2010测定苯巴比妥片照高效液相色谱法（ChP2010附录ⅤD）测定。色谱条件与系统适用性试验用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（30：70）为流动相；检测波长为220nm。理论板数按苯巴比妥峰计算不低于2000，苯巴比妥与相邻色谱峰的分离度应符合要求。测定法取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于苯巴比妥30mg），置50ml量瓶中，加流动相适量，超声处理20分钟使苯巴比妥溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。另取苯巴比妥对照品适量，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含苯巴比妥60µg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。巴比妥类药物化学结构、理化性质与分析方法的关联**共性：母核（丙二酰脲）反应1、弱酸性（二级电离）---鉴别/检查2、重金属离子反应银盐-------鉴别/银量法铜盐-------鉴别分析方法**个性：取代基反应1、司可巴比妥（-CH2CH=CH2）碘/溴加成反应------鉴别/溴量法2、苯巴比妥（-C6H5）亚硝基化反应（橙红色）------鉴别甲醛-硫酸反应（玫瑰红色）------鉴别3、硫喷妥钠-C-SNa（PbS）------鉴别4、硫喷妥钠UV光谱特征------含量测定ChP2010收载巴比妥类药物分析方法典型文献研读1.胡家炽，黄钦鸣，凌大奎.国产异戊巴比妥的杂质分离和结构分析.药物分析杂志，1994,14（2）：3-5.2.盖轲，郑阿利，荔瑞琴，等.毛细管电色谱法测定氨茶碱和鲁米那片剂中茶碱和苯巴比妥的含量.分析化学，1999,27（1）：97-100.3.胡德福，王飞.高效液相色谱法测定苯巴比妥片的含量.中国药业，2004,13（5）：35-36.4.赵海香，邱月明，汪丽萍，等.气相色谱-质谱同时测定猪肉中3种巴比妥药物残留.分析化学，2005,33（6）：777-780.5.薛恒跃，王玉兰，于黎明，等.中药制剂中添加化学药品苯巴比妥的检测方法研究.时珍国医国药，2006,17（2）：216-217.6.谢华，贾正平，王荣，等.高效毛细管电泳法测定苯巴比妥片中苯巴比妥的含量.医药导报，2008,27（12）：1500-1501.7.戚宝婵，潘阳，侯峰.安神类中药非法添加巴比妥类化学成分的检查研究.中成药，2010，32（1）：79-81.复习思考题以苯巴比妥为例，说明巴比妥类药物的化学结构、理化性质与分析方法之间的关系。