保健食品功效成分-杨大进

保健食品功效成分检测技术进展中国疾病预防控制中心营养与食品安全所常见保健食品功效成分分类氨基酸低聚糖和多糖维生素、矿物质植物提取物动物性提取物发酵产物类氨基酸类保健食品功效成分必需氨基酸牛磺酸低聚糖类保健食品功效成分多数可以通过液相色谱进行检测；低聚果糖检测上还有一定的问题；低聚半乳糖的检测比较复杂，需要通过酶解等手段，通过在总半乳糖中减去游离和由乳糖生成的半乳糖，通过折算得到低聚半乳糖含量。多糖类保健食品功效成分定义明确但实际操作难以实现，检测结果缺乏说服力。维生素、矿物质类保健食品功效成分脂溶性维生素水溶性维生素类维生素矿物质脂溶性维生素—维生素A可采用相对简单的方法。相对简单的片剂和胶囊试样可不采用国家标准直接采用异丙醇、己烷等溶剂提取；婴儿配方奶粉等产品可使用胰酶和胃蛋白酶处理，己烷等溶剂提取后测定视黄醇醋酸酯或视黄醇棕榈酸酯。视黄醇不稳定，但视黄醇醋酸酯和视黄醇棕榈酸酯相对稳定，采用外标法就能够保证分析结果。脂溶性维生素—维生素E维生素E的前处理方法与维生素A相似。目前对于维生素E使用反相色谱法实现α-、β-、γ-、δ-4种结构全部分离比较困难。通过正相柱进行上述4种结构分离相对容易。通常保健食品中添加的基本为α-。脂溶性维生素—维生素D现有国标只有使用GB/T5413进行婴幼儿配方奶粉检测的方法。该方法实际需要色谱分析2次，不能满足日常实际检测。脂溶性维生素—维生素D钙+维生素D等基质相对简单的保健食品检测维生素D采用乙醇直接超声提取的方式提取，无需净化，如维生素D含量偏低可使用氮吹仪浓缩。脂溶性维生素—维生素D对于含量低、蛋白和淀粉含量高采用大取样量，高碱度，辅以酶解的方式进行皂化。对于基质相对复杂的保健食品采用与维生素A、E类似的前处理方法，但皂化温度为72℃。流动相仍采用甲醇：水=98：2，目前市售95%的样品均可以得到较好的分离分析。AU0.000.100.200.300.400.500.600.700.800.901.00??2.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.002.2472.6693.1313.4243.6394.2004.7645.3146.2977.1328.0748.1848.5048.98310.23510.86711.79512.37713.66515.55016.99218.68319.96323.40725.13326.728维生素D维生素D分析前处理注意事项由于用碱量大，应注意不时摇动。皂化温度不要超过72℃，以防结构变化。当色谱图出现不光滑、对称性差的现象时说明碱度不够，有干扰。含淀粉较多的产品应利用生物酶尽可能多地去除淀粉等。AU0.00000.00020.00040.00060.00080.00100.00120.00140.00160.00180.00200.0022分钟14.8014.9015.0015.1015.2015.3015.4015.5015.6015.7015.8015.9016.0015.513AU-0.00050.00000.00050.00100.00150.00200.00250.00300.00350.00400.0045分钟15.5015.5515.6015.6515.7015.7515.8015.8515.9015.9516.0016.0516.1016.1516.2016.2516.3016.3516.4015.892脂溶性维生素—维生素K2需要检测维生素K2的保健食品较少。采取用流动相提取的方式。色谱柱：μ-BondapakC18柱流动相：乙醇：乙醚=95:5波长：254nm脂溶性维生素—维生素K1GB/T5009.158—2003在检测植物性食品中维生素K1时使用层析柱净化法，分析效果较好。GB/T5413在检测婴幼儿配方食品中维生素K1时使用液液萃取法净化。对于低含量样品的检测可使用锌柱柱后还原法使维生素K1产生强荧光，从而提高分析效果。脂溶性维生素—胡萝卜素GB/T5009.83—2003有检测胡萝卜素的方法。该方法中使用C18柱分离，但很多结构类似的物质如α-，β-胡萝卜素难以分离。脂溶性维生素—胡萝卜素现在使用专用的胡萝卜素色谱柱：YMCTMCarotenoidS-5柱，150×4.6mm,5μm可以实现α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、玉米黄质、叶黄素等分析。C30固定相是1994年左右研发成功的一种反相吸附固定相。其反相性增强，这种固定相在类胡萝卜素的HPLC分析中得到应用。由于C30烷基的链长大致与胡萝卜素分子的长度相当，因而增强了二者的相互作用。更长的烷基链增加了固定相的疏水性，极性与非极性类胡萝卜素的保留时间增加，从而提高了柱效。流动相选用：甲醇+甲基叔丁基醚+水＝775＋190＋35叶黄素AU0.0000.0100.0200.0300.0400.0500.060??0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.007.508.008.509.009.5010.005.477AU0.0000.0010.0020.0030.0040.0050.006??1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.006.509玉米黄质α—胡萝卜素β—胡萝卜素AU0.0000.0010.0020.0030.004??0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.0030.0032.0034.0036.0038.0040.0025.141AU0.0000.0020.0040.0060.0080.010??0.002.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0018.0020.0022.0024.0026.0028.0030.0032.0034.0036.0038.0040.0033.136胡萝卜素前处理方法的比较对于添加的胡萝卜素，直接提取法如提取完全与皂化法没有差别。对于食品中天然的胡萝卜素，皂化法可能处理得更完全。胡萝卜素分析中的注意事项在直接提取法中剧烈振摇和多次提取直至提取液无色非常必要。在直接提取法中使用离心可实现快速分层清晰，以缩短分析时间。在提取溶剂中如果加入少量抗氧化剂可以有效地保证结果的一致性。脂溶性维生素—番茄红素（胡萝卜素）作为胡萝卜素的一种既可以采用上述胡萝卜素的方法一同分析也可以单独分析。检测条件：紫外检测器：检测波长472nm色谱柱：supelcosilLC-18流动相:甲醇：乙腈=50：50流速:1.0mL/min30℃番茄红素标准色谱图番茄红素样品色谱图番茄红素分析注意事项提取时应注意要加入少量抗氧化剂以保护番茄红素，否则降解很快。由于番茄红素不稳定，通常会将其微囊化，故应选择其破囊试剂，如N，N—二甲基甲酰胺等，以及较长时间的超声提取。水溶性维生素由于天然保健食品中水溶性维生素含量相对较低，且有些维生素以多种形式存在，因此不宜使用液相色谱法。目前国家标准分析方法较多地采用微生物法和比色法、荧光法。对于添加的维生素，结构形式符合要求且添加量较高，为直接使用液相色谱法提供了必要的条件。水溶性维生素—维生素B1、B6、烟酸、烟酰胺目前在保健食品中基本采用GB5009.197—2003检测维生素B1、B6（吡哆醇）、烟酸和烟酰胺。如果要检测维生素B6（吡哆醇）、吡哆胺、吡哆醛全部三种形式，可使用稀酸作为提取溶剂，稀酸作为流动相的液相色谱分析方法。水溶性维生素—维生素B2参照GB5009.197—2003分析维生素B2保留时间比较短，且使用紫外检测器灵敏度不高。对于维生素B2仍采用将核黄素转化成光黄素后再进行荧光分光光度检测的方法。该方法在各类食品中均有采用，成熟但分析时间较长。水溶性维生素—泛酸钙目前保健食品等的检测方法的仪器分析条件与GB/T5413—1997类似，由于基质的原因故前处理也相对简单。泛酸钙分析注意事项要选择合适的色谱柱，避免出峰过快或过慢。选择适合的酸度，避免拖尾。现有流动相比例0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH=3.0）：乙腈=95：5适合目前所做的所有样品中泛酸的测定，如还有干扰可适当调节两者的比例。每针分析时间的确定要考虑泛酸后的峰。水溶性维生素—维生素B12由于样品中的含量较低，通常食品中维生素B12只能由微生物法进行检测。水溶性维生素—维生素B12已利用表面活性剂、大孔吸附树脂和固相萃取技术，实现了对多种维生素片剂、胶囊及保健饮料、保健食品和婴幼儿配方奶粉等类型中维生素B12的检测。表面活性剂用于去除色素等干扰物质。大孔树脂用于去除糖份。固相萃取用于富集和进一步净化。维生素B12紫外光谱图au0.0000.0020.0040.0060.0080.010纳米250.00300.00350.00400.00450.00500.00550.00600.00650.00278.5360.0409.7554.1650.6651.8676.3698.4维生素B12液相色谱图水溶性维生素—生物素目前在基质简单的保健食品中可使用液相色谱检测，但方法不很成熟。正在研究的衍生法对于生物素的检测有一定的作用，可使其检测波长改变，从而提高分析效果。水溶性维生素—维生素C除颜色较深、含量较低、天然植物干制品外，一般样品中的维生素C均可以采用药典中的碘溶液滴定法进行测定。水溶性维生素—维生素C高效液相色谱法测定维生素C可参照GB/T5009.197—2003，但需要尽可能减少有机相的比例，否则可能造成维生素C保留时间过短的问题。在适合的流动相分析条件下，维生素C的d-，l-构型可以得到分离。水溶性维生素—叶酸目前通常使用的高效液相—紫外法（参照药典）检测强化的叶酸还有相当的局限性，灵敏度低，部分样品有干扰。可以使用0.5%过二硫酸钾柱后衍生，高效液相—荧光法加以解决。类维生素类维生素—肉碱对于有干扰样品的分析，采用三氟乙酸：N，N—二甲基甲酰胺=2：98提取。流动相采用0.1%三氟乙酸和三氟乙酸：60%乙腈=0.07：100进行梯度洗脱。色谱柱：μ-BondapakC18AU0.000.020.040.060.080.100.120.14分钟1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.0016.0017.0018.0019.0020.009.317AU0.000.020.040.06分钟1.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.0016.0017.0018.0019.0020.009.320类维生素—肌醇目前较多出现在保健食品和婴幼儿配方奶粉中。按GB/T5009.196—2003检测。婴幼儿配方奶粉中的肌醇检测采取先用6mol/LHCl在105℃下水解7-8h的方式，再按上述硅烷化方法进行处理、分析的过程。类维生素—辅酶Q10辅酶Q10一般检测采取正己烷提取，无水乙醇稀释，以乙腈：四氢呋喃：水=55：40：5为流动相的液相色谱分析方法。根据辅酶Q10的特性，使用非极性溶剂进行提取，因此共提的干扰杂质较少，适用范围较广。类维生素——α-硫辛酸添加的保健食品相对较少。对于多种维生素试样可用乙腈提取流动相：乙腈：0.03%磷酸=44：56波长：215nm类维生素—对氨基苯甲酸对于简单基质的样品可以采用液相色谱法分析，复杂基质容易被干扰。矿物质检测技术上没有新技术。植物提取物类保健食品功效成分类黄酮类物质甙类物质木脂素蒽醌其