组织胚胎学绪论

医学1组织胚胎学生命科学与生物工程学院[e-mail]695225，13957841679医学2第一篇：组织学组织：上皮、结缔、肌肉、神经。器管：循环、呼吸、消化、排泄、生殖、内分泌、感觉。第二篇：胚胎学普通胚胎学。软体动物、甲壳动物、鱼类的发生。医学3绪论1组织学研究对象：细胞、组织与器官研究内容：有机体的基本组织、构成组织细胞的形态和构造；各种组织构成的器官的组织形式和联系；细胞、组织与器官之间的相关性及对环境变化的反应等。定义：研究机体细微结构及其机能的科学。一、基本内容医学4细胞（cell－C）组织（tissue）器官（organ）系统（system）医学5细胞膜细胞核细胞质卵细胞医学6医学7神经C－神经元医学8四大基本组织上皮结缔肌神经医学9细胞组织器官系统｝｝组织学各论组织学总论胚胎学医学102胚胎学◆研究内容狭义：胚胎发育。广义：胚前发育+胚胎发育+胚后发育。◆定义研究机体发生及发育规律的科学。胚前期：精卵发生-----受精作用胚胎期：受精作用-----孵化、产出胚后期：孵化、产出-----衰老、死亡医学113组织胚胎学的分科◆按研究对象分植物、动物、人体组织（胚胎）学。◆按研究方法分比较组织学实验组织学病理组织学叙述胚胎学比较胚胎学生态胚胎学化学胚胎学分子胚胎学免疫胚胎学医学121一般研究方法活体观察切片技术（普通光学显微技术）2特殊显微镜的应用暗视野、相差显、荧光显微镜电子显微镜、激光共聚焦显微镜3其他新技术的应用二、组织学研究方法医学13显微镜下直接观察活体染色血液注入、三胚层染色细胞与组织培养细胞系的培养显微电影（摄影）活体观察医学14A取材与固定：切成3mm3的小块，入固定剂中。使蛋白迅速被固定，防止组织自溶，尽量保持组织结构，硬化组织。B脱水与包埋：乙醇梯度脱水、二甲苯透明、石蜡渗透、包埋。C切片与染色：将组织块切成5-14微米的薄片，贴在载玻片上，展片、脱蜡、染色。组织切片——光学显微镜术医学15嗜碱性：苏木精为碱性染料，能将细胞核、粗面内质网和核蛋白体等嗜碱性结构染成蓝紫色。嗜酸性：伊红为酸性染料，细胞质、线粒体、胶原纤维等嗜酸性结构被染成红色。中性：对碱性和酸性染料都缺乏亲和力。H-E染色医学16甲苯胺蓝染色碱性染料，可将细胞内、外的某些物质染成紫红色。异染性：显色与染料不同的特性称为异染性。医学17其分辨率为0.2μm，放大倍数约为1000倍。普通光学显微镜观察医学18用荧光素染色或者标记的细胞或结构。荧光标记物：用荧光素标记细胞内的某些成分，使其发出不同的荧光。如溴化乙锭与口丫啶橙可与DNA结合。以荧光素标记抗体，可检测抗原的存在和分布。荧光显微镜观察医学19用于观察组织培养中活细胞的形态结构。能将活细胞不同厚度以及细胞内各种结构对光产生的不同折射作用转换为光密度差异（明暗差），易于分辨细胞结构。细胞培养室内常用的是倒置相差显微镜，其光源和聚光器在载物台的上方，物镜在载物台的下方，这样便于观察贴附于培养皿底壁的活细胞。相差显微镜观察医学20用于观察因反差或者分辨率不足的微小颗粒。有一个暗视野集光器，使光线不能进入物镜，故称暗视野。标本内的小颗粒产生的衍射光或者散射光进入物镜。暗视野显微镜观察医学21以激光为光源，光束经聚焦后落在样品的不同深度，并作移动扫描，通过电信号彩色显像，经图像分析系统对图像做二维及三维处理。能对细胞内被荧光标记的结构做微量分析，对细胞内的钙离子以及pH值进行动态分析，测定细胞内的受体移动、膜电位变化、酶活性和物质转运；对细胞及其染色体进行切割、分离、筛选和克隆。激光共聚焦扫描显微镜（CLSM）医学22将电子束在样品上进行扫描，产生的两次电子，用特定的探测器收集放大，形成电子信号传到显像管，在荧光屏上显示图像。特点：视场大，景深长，图像真实，富有立体感。扫描电镜观察医学23河蟹胚胎附着扫描电镜图医学24医学25柱状细胞表面（扫描电镜）医学26医学27以电子束代替光线，以电磁透镜代替光学透镜。电子束经电磁场强度放大，射到标本上，最后在荧光屏上显像细胞内的超微结构。电镜下所见的超微结构染色深的，称为电子密度高，反之为电子密度低。透射电镜观察医学28透射电镜样品制作医学29医学30医学31电子束投射到密度大吸附重金属多的结构时,电子被散射的多,因此,射落到荧光屏上的电子少而呈暗像,电镜照片呈黑或深灰色,称为电子密度高。反之称为电子密度低。医学32医学33青蛤精子超微结构医学34将人体或动物的活细胞、活组织在体外培养，称细胞或组织培养，细胞在体外生存，必须具备适宜的条件，包括营养、O2和CO2的比例、渗透压、pH值、温度和湿度。利用体外培养细胞，可人为的给以各种不同的条件，研究不同条件对细胞的分裂、分化、结构和功能等的影响，并可用显微摄影等技术记录细胞的动态变化。组织或细胞培养医学35培养瓶内的细胞培养医学36细胞化学与组织化学显示细胞微细结构的化学成分（糖、脂、核酸、酶）和活性。基本原理：在组织切片和细胞样品上滴加一定的试剂，该试剂与组织内的某些成分发生化学反应，在局部形成有色沉淀物，通过显微镜观察而对组织细胞内的化学成分进行定位、定性和定量，作与功能相关分析的研究。医学37过碘酸-希夫反应简称PAS反应（periodacidSchiffreaction），显示细胞内糖原或多糖。原理：过碘酸的氧化作用先使糖分子的乙二醇基变为乙二醛基，乙二醛基与Schiff试剂（无色亚硫酸品红复合物）结合，形成紫红色反应产物。颜色反应的深浅取决于组织内多糖的乙二醇分子的多寡。——多糖医学38医学39酶组织化学：原理：利用酶及其相应底物的水解、氧化等作用，然后再使底物的反应产物与某种捕获剂发生反应，形成沉淀或有色的最终产物，从而可以检测该酶在组织切片或细胞内的分布以及活性强弱。即通过显示酶的催化活性以表示酶的存在。如磷酸酶（碱性磷酸酶ALP、酸性磷酸酶ACP）。——酶医学40核酸组织化学显示DNA的传统方法是Feulgen反应，切片先用稀盐酸处理，使DNA分子中脱氧核糖与嘌呤之间的连接键打开，形成醛基。醛基与Schiff试剂作用(原理同PAS反应)，使细胞核DNA显紫红色。甲基绿-焦宁染色法：同时显示DNA和RNA。两种染料均呈碱性，甲基绿使细胞核内的DNA呈绿色，焦宁使细胞质和核仁内的RNA呈红色。——核酸医学41是应用抗原与抗体结合的免疫学原理，检测细胞内多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子物质的存在与分布。特异性强，敏感度高，是发育生物学、医学等众多领域的重要研究手段。如疾病的快速诊断等。免疫细胞化学医学42分离纯化某种蛋白，作为抗原注入另一动物体内，后者即产生相应的特异性抗体（免疫球蛋白）。从被免疫动物血清中取出该抗体，再以荧光素、酶、铁蛋白或胶体金标记。再用这种标记抗体处理组织切片或者细胞，标记抗体即与细胞内相应的蛋白质(抗原)发生特异结合。显微镜下通过观察标记物而获知肽或蛋白质的分布部位。常用荧光素：FITC（异硫氰酸荧光素）。医学43医学44辣根过氧化物酶（HRP），从辣根菜中提取。HRP的底物是3，3’-二氨基联苯胺（DAB）和双氧水（H2O2）。HRP使DAB氧化形成棕黄色产物，可在光镜和电镜下观察。铁蛋白或胶体金：免疫电镜中常用。常用标记物：医学45一是直接法：将标记抗体与样品中的抗原直接结合。操作简单，敏感度不及间接法。二是间接法：将分离的抗体（一抗）再作为抗原免疫另一种动物，制备该抗体的抗体（二抗），再以标记物标记二抗。先后以一抗和标记二抗处理样品，最终形成：“抗原”-“一抗”-“标记二抗”复合物。标记抗体与被检测抗原的结合方式：医学46X射线衍射技术：晶体激光技术超速离心技术：g=1.11X10-5(R)X(rmp)2显微操作技术：移核胚胎转移技术放射自显影技术流式细胞术其他医学47◆水产动物繁育生物学研究繁殖习性、性腺发育、配子发生、受精、胚胎与幼体发育。◆水产动物生理学研究如鱼类生长、生殖、消化与吸收等生理机能相关的器官系统的组织结构的研究。◆组织病理学研究◆组织-细胞毒理学研究◆遗传育种中的应用研究（杂交、雌核发育、多倍体诱导、性别控制、核移植等）三、组织胚胎学的应用医学48四、学习组织胚胎学注意的问题理论和实验密切联系断面和立体的关系结构与功能的关系从静态结构了解动态结构的变化医学49在实验课中观察、分析、比较，然后再记忆。切片中显示的是组织和细胞的平面结构，如要研究它的立体结构，可制成连续切片，观察记录每一张切片中的结构，然后进行综合分析，绘制模式图，以表达整体结构。同一细胞或某一种结构或组织，由于切面的不同而有着形态的差异。因此，应注意从平面的局部的图象中，正确地理解立体与整体的结构关系。理论和实验密切联系断面和立体的关系医学50显微镜下观察的组织切片都是结构断面的形态。由于所切的部位不同，在一个细胞某断面可见细胞核，在某断面看不到细胞核。又如身体内许多管状的器官，由于所切方位不同，往往呈完全不同的形态。因此在观察切片上的形态结构时，要考虑断面和立体的关系。断面和立体的关系医学51示单管不同横切面模式图示单管不同纵切面模式图示弯管不同切面模式图医学52例如神经细胞有细长突起的结构特点，以传递神经冲动；分泌蛋白质的细胞，其细胞质中含丰富的粗面内质网、发达的高尔基复合体和许多分泌颗粒等；红细胞含丰富的血红蛋白，则具有结合和携带氧的功能；巨噬细胞胞质内含较多的溶酶体。结构与功能的关系医学53从受精卵到孵化或产出，胚胎经过一系列的变化，这个变化是个连续的过程。学习胚胎学时一定要把握住每一过程的变化，包括时间、地点、相互关系，从而建立起动态的概念。从静态结构了解动态结构变化医学54主要参考书：成令忠主编，组织学与胚胎学，人民卫生出版社，2000第四版（卫生部规划教材）李继承主编，组织学与胚胎学实验，浙江大学出版社，2003杜卓民主编，实用组织学技术，人民卫生出版社，1998年第二版楼允东主编，组织胚胎学，中国农业出版社