临床常用免疫学检查

临床常用免疫学检查临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、细胞免疫检测四、肿瘤标志物检测五、自身抗体检测六、感染免疫检测免疫系统免疫学方法教学目的与要求：了解掌握临床免疫学检查的主要内容、检测原理以及临床实际应用的重要意义重点与难点1.各种抗体的特点2.补体定义及CH50测定3.流式细胞术的原理及淋巴细胞亚群测定的临床意义4.肿瘤标志物及其特异性，AFP与CEA的特点，各种类型的特异性5.自身抗体与自身免疫的关系及各类型自身抗体检测的方法及临床意义6.Crp测定以及临床意义临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、细胞免疫检测四、肿瘤标志物检测五、自身抗体检测六、感染免疫检测免疫球蛋白（Ig）定义：是由浆细胞合成分泌的一组具有抗体活性的球蛋白，存在于机体的血液、体液、外分泌液和部分细胞的膜上。检测：感染性疾病、免疫增值性疾病和免疫缺陷性疾病的诊断、鉴别诊断、疾病进展和预后。血清免疫球蛋白分类根据重链稳定区的分子结构和抗原特异性的不同，分为五类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE血清免疫球蛋白分类检测方法酶联免疫法（ELISA)放射免疫（RIA)荧光标记免疫(IFA)化学发光法（CLIA)免疫透射比浊、免疫散射比浊血清免疫球蛋白G检测IgG人体内含量最多，占Ig的70％-80％再次免疫应答的主要抗体对细菌、病毒和寄生虫都有抗体活性唯一可通过胎盘的Ig参考值7.0—16.6g/L临床意义--IgG增高多克隆性增高见于各种慢性感染、慢性肝病、淋巴瘤、肺结核、链球菌感染以及自身免疫性疾病单克隆性增高仅见一种Ig增高，主要见于免疫增殖性疾病，如IgG分泌型多发性骨髓瘤临床意义--IgG降低见于各种先天性和获得性免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、也见于重链病、轻链病、肾病综合症、病毒感染和免疫抑制剂患者免疫球蛋白A检测两型：血清型IgA，分泌型IgA（SIgA）。血清型IgA以单体形式存在分泌型IgA（SIgA）由J链连接的二聚体和分泌片组成。参考值血清IgA0.7～3.5g/L，IgA占10％-15％。SIgA唾液0.3g/L，泪液30~80g/L，初乳5.06g/L，粪便1.3g/L临床意义IgA增高见于IgA型MM，SLE,类风湿性关节炎，肝硬化，湿疹和肾脏疾病等IgA降低见于反复呼吸道感染，非IgA型MM，重链病，轻链病，原发和继发性免疫缺陷病和自身免疫性疾病免疫球蛋白M检测IgM是五聚体，分子量最大的Ig不能通过血管壁，不能通过胎盘个体发育过程中最早合成的抗体，脐带血IgM增高提示胎儿宫内感染体液免疫应答中IgM是最早产生的抗体参考值参考值0.5～2.6g/L临床意义IgM增高见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类风湿关节炎、SLE等，原发性巨球蛋白血症时，IgM呈单克隆性明显增高IgM降低见于IgG型重链病，IgA型MM，先天性免疫缺陷病，使用免疫抑制剂，淋巴系统肿瘤和肾病综合症。免疫球蛋白E的检测IgE是血清中最少的一种Ig，占血清总Ig的0.002%。是一种亲细胞抗体，介导Ⅰ型变态反应，与变态反应、寄生虫感染和皮肤过敏等有关。参考值ELISA法为0.1～0.9mg/L临床意义IgE增高见于IgE型MM、重链病、肝脏病、结节病、类风湿性关节炎，以及各种过敏性疾病和寄生虫感染等。IgE降低见于先天性和获得性丙种球蛋白缺乏症、恶性肿瘤、长期应用免疫抑制剂和共济失调性毛细血管扩展症等。血清M蛋白M蛋白(Mprotein)或称单克隆免疫球蛋白，是一种单克隆B细胞增殖产生的具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子及其分子片段。【参考值】蛋白电泳法、免疫比浊法或免疫电泳法：正常人为阴性。图1－4号为多发性骨髓瘤病人的血清蛋白电泳图谱13123456789101112【临床意义】检测到M蛋白，提示单克隆免疫球蛋白增殖病。见于：①多发性骨髓瘤：以IgG型最常见，其次为IgA型，IgD和IgE罕见，也有IgM型的报道。多发性骨髓瘤（multiplemyeloma）是浆细胞异常增生的恶性肿瘤，也称浆细胞瘤（plasnocytoma），因其引起骨破坏而得名。患者常伴有贫血、肾功损害和免疫功能障碍。男性多发，男女比约为2:1，平均发病年龄是46.5岁。多发性骨髓瘤患者骨破坏所致头颅肿物及眼球突出②巨球蛋白血症(macroglobulinemia)：该病血液中存在大量单克隆IgM。③重链病：出现Ig重链④轻链病：出现单克隆游离轻链。⑤半分子病：系由一条重链和一条轻链组成的单克隆Ig片段。⑥恶性淋巴瘤：血液中可出现M蛋白。⑦良性M蛋白血症：临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、细胞免疫检测四、肿瘤标志物检测五、自身抗体检测六、感染免疫检测补体（Complement）补体是一组具有酶源活性的糖蛋白，由传统途径的九种成分C1(C1q/C1r/C1s）-C9，旁路途径的三种成分及其衍生物B/D/P/H/I等因子组成参与机体的抗感染和免疫调节,介导病理反应补体的三条激活途径总补体溶血活性检测(CH50)原理:抗体致敏的绵羊红细胞(抗原抗体复合物)可激活血清中的补体C1,从而引起补体经典途径的连锁反应,导致绵羊红细胞膜上形成多分子的聚合物，绵羊红细胞溶解。在分光光度计上542nm读取吸光度。溶解程度与样品中补体量正相关。主要反应补体经典途径的综合水平。细胞膜识别阶段C3转化酶的形成C4bC4b2b为C3转化酶活化阶段C5转化酶的形成C4bC3bC4b2b3b是C5转化酶;它导致膜攻击复合体(MAC)的形成活化阶段C3bC4bbbC6C7膜攻击阶段MAC形成并插入到细胞内bC6C7C9C9C9C9C9C9C9C9C9CH50在50%溶血附近，“S”形曲线最陡，接近一条直线。在此范围内补体活性稍有变动，溶血程度就有明显变化，即是以50%溶血作为反应的终点比以100%溶血作为终点更为敏感，因而该试验被称为补体50%溶血试验（complementhemolysis50%），即CH50试验。CH50测定的临床意义增高：见于急性炎症，组织损伤和某些恶性肿瘤。减低：免疫复合物性疾病（如肾小球肾炎）、自身免疫性疾病活动期、感染性心内膜炎、病毒性肝炎、慢性肝病、肝硬化、重症营养不良和遗传性补体成分缺乏症等补体C3检测是一种由肝脏合成的β2-球蛋白。C3在补体系统各成分中含量最多，是经典途径和旁路途径的关键物质。它也是一种急性时相反应蛋白。【参考值】成人血清C3：O．8～1．5g／L。【临床意义】(1)增高：常见于一些急性时相反应，如急性炎症、传染病早期、肿瘤、排异反应、急性组织损伤。(2)减低：见于系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎活动期、大多数肾小球肾炎(如链球菌感染后肾小球炎、狼疮性肾炎、基底膜增殖性肾小球肾炎)、慢性活动性肝炎、慢性肝病、肝硬化、肝坏死、先天性补体缺乏(如遗传性C3缺乏症)等。它们或是由于消耗或丢失过多或是由于合成能力降低造成。临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、细胞免疫检测四、肿瘤标志物检测五、自身抗体检测六、感染免疫检测淋巴细胞T、B、NK细胞基于特异的表面标志和功能，进一步分为若干亚群检测方法流式细胞仪术流式细胞术(flowcytometry，FCM)是一种集细胞生物化学技术、单克隆抗体技术、激光技术、流体力学、电子技术、计算机技术、分子生物学、临床医学等理论于一体的现代分析技术；能够对细胞或微球的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测，并在必要时进行分类收集的多参数检测细胞分析技术。（p472）BDFACSCalibur第十章第二节流式细胞术及其应用一、流式细胞仪仪器结构液流系统光学系统激光光源光收集系统电子系统光电转换数据处理系统细胞分选系统样品流荧光信号激光束Sheathfluid样品流和鞘流1、液流系统液流中心由单列匀速运动细胞组成的液柱流动室LaserFlowCell孔径50-200m检测区离喷口200m有分选功能激光光源单波长、高强度、高稳定性多采用氩离子激光器或氦氖激光器一般选配2-4根激光，488nm、633nm和355nm、407nmUV激光2、光学系统PMTPMTPMTPMTDichroicFiltersBandpassFiltersLaser1234Flowcell激光、透镜组、光电倍增管等。光收集系统：光电倍增管（PMT）3、电子系统488nmlaser+-ChargedPlatesSinglecellssortedintotesttubesFALSSensorFluorescencedetector（一）分选的基本原理4、细胞分选系统细胞分选系统二、基本工作原理FACSCalibur光路图前向散色光FSC三、散射光的测定侧向散色光SSC信号检测--散色光FSC（小角散射)光它反应细胞的相对大小和截面积的大小SSC(90度角散射光)代表细胞的颗粒度和精细结构的变化荧光FL:细胞被染上荧光部分数量的多少全血细胞流式FSC-SSC图利用前向角和测向角散射光可以把外周血白细胞分成三群，淋巴细胞、单核细胞和粒细胞。二维点图DotPlot便于数据统计不同的细胞群可以用不同的颜色标记主要表达方式四、数据的显示和分析一、淋巴细胞及其亚群的分析五、流式细胞的应用二、淋巴细胞功能分析三、白血病免疫分型四、肿瘤耐药基因分析五、在AIDS病检测中的分析六、自身免疫性疾病相关HLA抗原分析T细胞分化抗原T细胞表面特异的表面抗原，WHO统称其为白细胞分化抗原（clusterdifferentiation，CD)CD3+代表总T细胞、CD3+/CD4+T辅助细胞、CD3+/CD8+T抑制细胞。应用这些细胞的单克隆抗体与T细胞表面抗原结合后，再与荧光标记二抗(兔或羊抗鼠IgG)反应，在流式细胞仪中计数CD阳性细胞的百分率。参考值流式：CD3+61％-85％CD3+CD4+(Th)28-58％CD3+CD8+(Ts)19-48％Th/Ts0.9-2.0临床意义CD3+减低自身免疫性疾病，如SLE,类风湿性关节炎。SLE全身性红斑狼疮其名可回溯于十九世纪，发现患者面部赤红的病症像狼咬过的伤痕，而拉丁文中狼为LUPUS狼疮，以后有位皮肤科医师观察到患者鼻梁和两颊有明显的红斑，其英文为ERYTHEMATOSUS红斑，系统性红斑狼疮SLE之后，发现这种疾病不仅影响皮肤，亦影响全身各个器官，再加上SYSTEMIC全身性从此正名为SYSTEMICLUPUSERYTHEMATOSUS，全身性红斑狼疮，简称为SLE。SLE一种累及多系统、多器官的，具有多种自身抗体的自身免疫性疾病。死亡主要原因：肾脏损害，狼疮脑病，感染网络小说《第一次亲密接触》痞子蔡轻舞飞扬临床意义CD3+CD4+减低恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷、艾滋病、免疫抑制剂使用CD3+CD8+减低自身免疫性疾病、变态反应性疾病Th/Ts比值增高：自免、病毒感染、变态反应减低：艾滋病（小于0.5），恶性肿瘤进行期和复发时B细胞分化抗原B细胞受抗原刺激后可分化成产生抗体的浆细胞，是体内唯一能产生抗体的细胞。应用CD19、CD20和CD22等单克隆抗体分别与B细胞表面抗原结合，采用流式技术进行检测，分别求出CD19、CD20和CD22等细胞阳性的百分率和B淋巴细胞数。临床意义流式CD19+：11.74±3.37%升高：急、慢性性淋巴细胞白血病和Burkitt淋巴瘤降低：无丙种球蛋白血症、使用化疗或免疫抑制剂临床常用免疫学检查包括一、血清免疫球蛋白检测二、血清补体检测三、细胞免疫检测四、肿瘤标志物检测五、自身抗体检测六、感染免疫检测肿瘤标志物肿瘤标志物（tumormarker、TM）：在肿瘤发生和发展过程中，由肿瘤细胞所产生或机体在肿瘤细胞刺激下产生的，与肿瘤存在相关的物质，存在于血液、细胞、组织液、体液中。2008年城乡居民前十位疾病死亡