化学与制药工程学院2019年8月18日药物分析主讲:罗容珍PharmaceuticalAnalysis第十四章维生素类药物的分析化学与制药工程学院2019年8月18日维生素类药物的分析维生素维持人类机体正常代谢功能所必须的一类活性物质,主要用于机体的能量转移和代谢调节,体内不能合成,须从食物中摄取。通俗来讲,即维持生命的物质,是维持人体生命活动必须的一类有机物质,也是保持人体健康的重要活性物质。维生素在体内的含量很少,但不可或缺。化学与制药工程学院2019年8月18日维生素类药物的分析维生素醇从化学结构上来讲,维生素类均属于有机化合物,但并非同一类化合物。酯酸胺酚醛各具有不同的理化性质和生理作用化学与制药工程学院2019年8月18日类别名称每日所需(mg)VitA1VitD0.025VitEVitK1VitB11.5VitB22VitB63VitB120.005VitH0.25VitC60生物素酶缺乏VC缺乏、酸化尿水溶性主要作用间歇性跛行周围神经炎核黄素缺乏症VB6依赖综合症、缺乏症恶性贫血、神经系统疾病脂溶性抗干眼病,VA缺乏症佝偻病,骨软化症抗出血维生素按溶解度分化学与制药工程学院2019年8月18日维生素类药物的分析方法生物法微生物法化学法物理化学法都是依据药物的化学结构、理化性质与生物特性来进行分析化学与制药工程学院2019年8月18日AB1CDEVitaminsContents主要讲解化学与制药工程学院2019年8月18日维生素A的分析维生素A是一种不饱和脂肪醇,在自然蜀中主要来源于鲛类海鱼肝脏中提取的脂肪油(鱼肝油)。鲛类海鱼?具有多种异构体,有不同的名称,其中活性最好的是维生素A1,也是通常所指的维生素A化学与制药工程学院2019年8月18日维生素A的分析维生素A具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯,具有多个异构体CH3CH2ORCH3H3CCH3CH3123456789化学与制药工程学院2019年8月18日维生素A的分析维生素A具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯,具有多个异构体维生素A醇(Retinol)CH3CH2OHCH3H3CCH3CH3123456789化学与制药工程学院2019年8月18日维生素A的分析维生素A具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯,具有多个异构体维生素A醋酸酯(VitaminAAcetate)CH3CH2OOCCH3CH3H3CCH3CH3123456789化学与制药工程学院2019年8月18日维生素A的分析维生素A具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯,具有多个异构体维生素A棕榈酸酯(VitaminAPalmitate)CH3CH2OOCC15H31CH3H3CCH3CH3123456789化学与制药工程学院2019年8月18日维生素A的分析维生素A具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯,具有多个异构体去氢维生素A(A2dehydroretinol)CH3CH2OHCH3H3CCH3CH3123456789化学与制药工程学院2019年8月18日维生素A的分析维生素A具有一个共轭多烯醇侧链的环已烯,具有多个异构体去水维生素A(A3anhydroretinol)123456789CH3H3CCH3CH3CH3CH2化学与制药工程学院2019年8月18日第一节VitACH3CH3CH3CH3CH2ORCH3912345678R=HRetinol(VitAalcohol)R=CCH3OVAacetateR=CC15H31OVApalmitate2-CisNeovitaminAa4-CisNeovitaminAb2,4-dicisNeovitaminAc6-CisIsovitaminAaVitA1VitA2H2VitA3VitA1去H2O化学与制药工程学院2019年8月18日第一节VitA二、主要性质溶解性:与三氯甲烷、乙醚、环已烷或石油醚能任意混合,在乙醇中微溶,在水中不溶。不稳定性:含有多个不饱和键,性质不稳定,易被被空气中氧或氧化剂氧化,易被紫外光裂解,特别是在加热和金属离子存在时更易氧化变质从而失活。紫外吸收:共轭多烯醇侧链结构,在325-328nm之间有最大吸收,可用于鉴别与三氯化锑呈色:三氯甲烷+三氯化锑=不稳定的蓝色化学与制药工程学院2019年8月18日第一节VitA二、鉴别试验VitASbCl3CHCl3(无水无醇)蓝色紫红色1.三氯化锑反应(Carr-Price反应)CH2OCROSbCl5CH2CH2[SbCl5RCOO]书上的有点小错误化学与制药工程学院2019年8月18日第一节VitA二、鉴别试验反应应在无水无醇条件下进行。因为水可使三氯化锑水解,而乙醇可以使碳正离子作用而使反应不能进行CH2OCROSbCl5CH2CH2[SbCl5RCOO]Notice化学与制药工程学院2019年8月18日第一节VitA2.UVVitAVitA3维生素A在无水乙醇盐酸溶液中溶解,立即进行UV扫描,在360nm处有一最大吸收峰.如1.水浴加热30s,迅速冷却,此过程发生脱水反应,扫描时出现三个吸收峰化学与制药工程学院2019年8月18日第一节VitA2.UVVitAVitA33.TLC:三氯化锑显色,磷钼酸显色维生素A去水维生素A最大吸收峰向长波方向移动:红移化学与制药工程学院2019年8月18日三、含量测定维生素A的测定CHP收载三种HPLC法UV三氯化锑法化学与制药工程学院2019年8月18日三、含量测定UV维生素A常混有杂质,包括多种异构体,氧化降解产物,合成中间体,副产物等以及常用稀释油类。都有紫外吸收,干扰测定。咋办呢?请用三点校正法!化学与制药工程学院2019年8月18日第一节VitAλmax(nm)换算因子λmax(nm)换算因子环己烷327.515301900326.517551900异丙醇3251600183032518201830溶剂VitAacetateVitAalcohol%cm1Ε%cm1Ε维生素A在325-328nm的波长范围内具有最大吸收,其最大吸收峰的位置随溶剂的不同而异。如下:应用三点校正法时要注意化学与制药工程学院2019年8月18日第一节VitAAnm测定原理杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线,且随波长的增大吸收度减小;(假设)物质对光的吸收具有加和性。(真理)化学与制药工程学院2019年8月18日第一节VitA第一法——等波长差法λ2λ1λ3nmA328340316A1A2A3Aλ1Aλ2Aλ3X1X2X3121KAAλλ设:231KAAλλ已知Aλ1=A1-X1=A1-(mλ1+C)Aλ2=A2-X2=A2-(mλ2+C)Aλ3=A3-X3=A3-(mλ3+C)VitA醋酸酯Y=mX+C化学与制药工程学院2019年8月18日第一节VitA第一法——等波长差法λ2λ1λ3nmA328340316A1A2A3Aλ1Aλ2Aλ3X1X2X3321)(1AAAAγβαλ校正后A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)VitA醋酸酯经过一系列变换,得出下式通过实验求出A1、A2、A3,再用纯品求出K1、K2,再转换波长为chp2010药典规定化学与制药工程学院2019年8月18日第二法——等吸收比法第一节VitAAλ2λ1λ3nm310325334Aλ2=Aλ3=6/7Aλ1A1A2A3Aλ2Aλ1Aλ3FLDMEKFLFMDLEM2313λλλλA325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334VitA醇波长为chp2010药典规定化学与制药工程学院2019年8月18日测定方法一、基本步骤第一步:选择A(A328或A328(校正后))选择依据——所选A值中杂质的干扰已基本消除第二步:求%cm1ΕLCAcm(%)%)(1样第三步:求效价(每克供试品所含维生素A的国际单位数)换算因数)效价(样样%)(cm1)(Eg/IU规定具体步骤测定A化学与制药工程学院2019年8月18日测定方法λmax(nm)换算因子λmax(nm)换算因子环己烷327.515301900326.517551900异丙醇3251600183032518201830溶剂VitAacetateVitAalcohol%cm1Ε%cm1Ε1IU=0.344μgVitA醋酸酯1gVitA醋酸酯=106μg/0.344(μg/IU)=2.907×106IUVitA醋酸酯换算因子=2.907×106IU/1530=1900化学与制药工程学院2019年8月18日第四步:求标示量(百分)测定方法%标示量标示量%=1001001900LWWDAWhy?化学与制药工程学院2019年8月18日第四步:求标示量测定方法这是因为标示量是以效价的形式存在的化学与制药工程学院2019年8月18日第四步:求标示量测定方法%100100%%11%11WWEDLEAcmcm标示量换算因子标示量换算因子)效价(样样%)(1)(/cmEgIU测定含量单位质量1g对应的效价效价占单位样品质量的百分比效价占单位质量的百分比经过变形可得下式化学与制药工程学院2019年8月18日第四步:求标示量测定方法%标示量标示量%=1001001900LWWDA这是因为标示量是以效价的形式存在的化学与制药工程学院2019年8月18日二、第一法——纯度高的VitAacetate测定方法合成VitA天然鱼肝油iAnm360340328316300ml/IU159S处测、、、、分别于溶液~环己烷①②λmax应为328nm。若λmax不在326~329nm之间,则不能用本法测定,改为第二法③nm328AA计算,选择AA值的选择测量吸光度判断化学与制药工程学院2019年8月18日λ(nm)300316328340360Aλ/A328nm0.5550.90710.8110.299测定方法A.若【(Aλ/A328nm)-规定值】≤(±0.02)——A328不校正B.若【(Aλ/A328nm)-规定值】有超过(±0.02)者A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)%3%,3%100)(328328328AA-A校正A328不校正◊%3%,15%100)(328328328AA-A校正A=A328校正◊%3%,15%100)(328328328AA-A校正第二法◊化学与制药工程学院2019年8月18日测定方法三、第二法——VitAalcohol皂化法6/7法①样品前处理蒸去醚水解OH-酯乙醚提取VA醇,洗涤,过滤异丙醇溶解残渣在300,310,325,334nm处分别测Ai②λmax应为325nm。若λmax不在323~327nm之间,则供试品中杂质含量过高,改为色谱法将未皂化部分纯化后进行测定。③325300AA计算,选择A化学与制药工程学院2019年8月18日测定方法A.若(A300/A325)≤0.73%3%,3%100)(332525325AA-A校正A325不校正◊%3%,3%100)(332532525AA-A校正A=A325校正◊A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334B.若(A300/A325)0.73色谱法纯化后再测化学与制药工程学院2019年8月18日测定方法应用示例一VitAD胶丸中VitA的含量测定精密称取本品(规格10,000VitAIU/丸)装量差异项下(平均装量0.07985g/丸)的内容物0.1287g至50ml量瓶中,用环己烷稀释至刻度,摇匀;精密量取2.0ml,置另一50ml量瓶中,用环己烷稀释至刻度,摇匀。以环己烷为空白,测定最大吸收波长为328nm,并在下列波长处测得吸收度如下,计算VitA的标示量百分含量。λ(nm)300316328340360A0.3740.5920.6630.5530.228化学与制药工程学院2019年8月18日测定方法λ