如何看抗体检测结果及检测应用

以人为本以正兴邦如何看抗体检测结果及抗体检测应用隋海亮2014年7月5日文档密级：内部公开以人为本以正兴邦1一、猪瘟ELISA原理——阻断（竞争）ELISA抗体抗原加入样品洗涤+酶标记物洗涤+底物蓝色淡蓝色终止读数阻断（竞争）ELISA原理例如：CSFV-Ab、PRV-gI、PRV-gB以人为本以正兴邦2猪瘟疫苗的免疫评估—关注两点阳性率：猪瘟抗体（阻断率（Blocking）≥40%，判为阳性结果；30%＜Blocking＜40%，判为可疑结果；Blocking≤30%，判为阴性结果）；免疫合格率：阻断率（Blocking）≥50%的，即为免疫合格。免疫合格的比例即为免疫合格率。以人为本以正兴邦3变异系数：CoefficientofVariation(CV)变异系数计算的是平均个体的变化，以平均滴度的背离的百分数来表示公式如下标准偏差（STDEV）CV=X100%平均阻断率CV≤40%,显示了群内猪只有一个均衡的、相似反应CV≥60%,显示了群内猪只滴度反应变化高于正常估计值以人为本以正兴邦4猪瘟检测的应用免疫评估：商品猪：猪瘟二免后4-6周，要求：阳性率≥80%,CV≤40%种猪群（公猪和母猪）：猪瘟免疫后4-6周，要求：免疫合格率≥80%（严格一点，要≥90%）,CV≤40%后备猪（全群检测）：进入隔离舍后1-2周、进入配种舍前1个月（6-6.5月龄），要求：Blocking≥40%，阴性猪补打疫苗，3周后复检，不合格淘汰。以人为本以正兴邦5猪瘟检测的应用仔猪首免日龄的确定：选30-60头仔猪，日龄和体重相近，每窝1-2头，确认没有野毒感染的风险，不接种猪瘟疫苗连续采血：出生后7天、14天、21天、28天、35天、42天检测抗体水平要求：CSFAbBlock≤30%仔猪占20%-40%时为首免日龄(依据感染压力和平均阻断率而定)。以人为本以正兴邦6二、蓝耳ELISA原理——间接ELISA抗体抗原加入样品洗涤+酶标记物洗涤+底物蓝色无色终止读数间接ELISA原理以人为本以正兴邦7结果判断结果判定：蓝耳抗体（S/P≥0.4，判为阳性结果；S/P0.4，判为阴性结果）免疫猪群0.4＜S/P≤2.5；对于过高抗体种猪，隔离饲养，2周后采血检测，若抗体处于上升趋势的种猪则淘汰非免疫猪群S/P值≥0.4淘汰或隔离饲养以人为本以正兴邦8应用公猪季度性监测全部公猪，一年4次要求：S/P≥2.5公猪暂停使用(1-2个月)或PCR确认感染状态母猪季度性监测母猪要求：S/P应主要在2.5≥S/P≥0.4(90%母猪抗体在免疫后转阳)后备母猪和后备公猪在引进种群前1个月，全群监测要求：S/P≥2.5和S/P≤0.4暂停引入繁殖群以人为本以正兴邦9应用动态检测4周龄、10周龄猪群，每次20-30样本主要是：分析蓝耳感染状态，判断猪群是否稳定，(对于不稳定群体,延迟转群或免疫等)，如果S/P≥2.5的比例超过5%，则判断该场蓝耳不稳定，有感染；没有则稳定。以人为本以正兴邦10三、伪狂犬伪狂犬gE：结果成立条件：阴性对照平均值-阳性对照平均值必须大于或等于0.3；否则试验无效。判定结果：如果S/N值低于或等于0.60，样品应判定为阳性；如果S/N值大于0.70，样品应判为阴性；处于0.6~0.7的样品判定为可疑，间隔两周时间可重新检测。伪狂犬病毒gE片段gB片段疫苗病毒片段以人为本以正兴邦11猪群PRV感染状况的普查采样要求公猪群：全部采样生产母猪群：随机采样30个样本15周龄后的生长猪（母源抗体消失）：随机采样20-30个样本检测方法IDEXXPRVgIELISAS/N≤0.6阳性，S/N＞0.7阴性0.6S/N≤0.7隔离2周后重复检测普查结果分析：低感染群：种猪阳性率10%以下，可做净化高感染群：种猪阳性率10%以上，低于30%，可做净化；高于30%，通过疫苗控制，来稳定猪群以人为本以正兴邦12伪狂犬疫苗的免疫评估—针对阴性场商品猪群免疫疫苗后4-6周，随机采样20-30份要求：gE抗体检测全部为阴性；gB抗体检测阳性率≥95%以人为本以正兴邦13伪狂犬的评级标准：伪狂犬gE抗体全阴性，则为阴性场伪狂犬gE抗体阳性，但检测15周龄猪，gE抗体转阴，则为阳性稳定场伪狂犬gE抗体阳性，但检测15周龄猪，gE抗体阳性率达到20%以上，则为阳性不稳定稳定场以人为本以正兴邦14应用—净化母猪群,公猪群(全部)过去6-12个月没有使用全病毒灭活苗或非gE基因缺失弱毒疫苗若S/N≤0.6则淘汰（对于怀孕母猪:可以先隔离,产后2周淘汰）;若0.6S/N≤0.7淘汰或隔离2周后重复检测,阳性者淘汰;间隔6,12个月重复检测全群,若前后两次检测全部为阴性，则后续检测不需要全群采样,可以按季度检测:每群随机采样15-20份;若季度检测时出现阳性猪只,其所在猪舍则需要全部检测,阳性淘汰以人为本以正兴邦15商品群随机抽样检测（如5周、15周龄猪）或设立非免疫的哨兵猪（非免疫猪）:20-30头/批作为哨兵猪（监测PRVgE和PRVgB抗体,评估但不涉及淘汰）以人为本以正兴邦