ImageLab操作手册

 服务中心：800‐820‐5567 / 400‐820‐3630  ImageLab™中文操作手册 服务中心：800‐820‐5567 / 400‐820‐3630  ImageLab图像获取和分析软件搭配MolecularImagerChemiDoc™XRS+、MolecularImagerGelDoc™XR+、MolecularImagerChemiDoc™MP和GS-900图像系统，可应用于凝胶电泳和转印膜的数字图像获取和分析，而自动化的工作流程能加速图像获取及参数优化调整，并针对调整好的凝胶或转印膜图像进行系统性分析，进而得到所需的分析数据。一、软件操作窗口激活向导程序桌面主窗口工具栏分析工具栏状态栏 服务中心：800‐820‐5567 / 400‐820‐3630  1.主窗口工具栏文档管理分析数据ResultsData2.显示工具栏3.分析工具栏（1）图像获取工具（ImageTools）（2）电泳条及电泳条带工具（LaneandBandTools）（3）分子量工具（MWMolecularWeight）（4）自动定量工具（QuantityTools）（5）注释工具（AnnotationTools）（6）手动定量工具（VolumeTools）二、使用ImageLab软件进行化学发光图像获取流程1.建立图像获取流程：放大图片显示设置缩小全窗口大小图像转换改变图像色彩转换3D图像图像信息 服务中心：800‐820‐5567 / 400‐820‐3630  在应用（Application）对话框中选择印迹膜（Blot）及Chemi（化学发光）程序(1)在成像区域（ImagingArea）对话框中的下拉式选单中选择合适的样品大小（非必需）(2)选择图像曝光（ImageExposure）方法，可以自行评估曝光时间并以手动设定（ManualExposure），或是使用信号累积模式（SignalAccumulationMode，SAM）来进行评估。获取化学发光的图像流程中最重要的关键在于图像曝光时间的确定，过短的图像曝光时间可能会无法辨识到微弱的信号（高于背景值）；相对地，较长的图像曝光时间则是会造成条带信号过饱和而超出相机的检测范围。若使用ChemiDocXRS+获取化学发光样品的图像，需要在设定手动或信号累积模式（SAM）前先确认好适合的图像获取时间框架。2.手动曝光(1)选择手动设定曝光时间（Manuallysetexposuretime）并在读秒框中输入10秒。(2)选择高亮显示饱和像素（Highlightsaturatedpixels）。(3)把胶置于透射箱的中心位置。(4)在程序窗口中点击按钮。(5)观察显示器中样品的实时图像，打开照胶系统的门并移动样品直到位于视野的中心区域。 服务中心：800‐820‐5567 / 400‐820‐3630  (6)可利用照相机的变焦滑板调节图像获取区域的大小。(7)选择按钮来获取图像。若所需的图像出现在计算机的显示器上，确认图像中是否包含红色的饱和区域。如有饱和区域存在，请重新以较短的曝光时间参数来获取图像。如果无饱和区域存在，则可移动鼠标置于最暗的条带之上，在较低的右下角ImageLab窗口中观察信号的强度数值。如图中显示强度为1994，照相机能记录的最大值的32分之一（最大值为65,535）。用你的最初的10秒曝光再乘以30就可在照相机的最大动态范围附近图像获取你的样品。如果你只需针对单一图像的图像获取时间进行评估，可直接在手动曝光区域中输入300。3.信号累积模式（SignalAccumulationMode，SAM）如果预估方法不足以满足您的需求，可选择SAM按钮，再选择Setup按钮。一个新的对话框会跳出来，包含可以输入图像获取时间的参数位置。我们可以输入原本预测的300秒曝光时间上下的范围，可设定获取5个图像，推测能获取到接近优化的图像。而SAM设定的图像显示对话窗口，在您选择按钮后再点选按钮，窗口会显示相关进度图标来说明整体图像获取的时间。在250秒获取第一个图像，同时小缩图会出现在窗口的下方，以此类推整个过程将持续到获取所有的图像。 服务中心：800‐820‐5567 / 400‐820‐3630  将鼠标移动到图像上，就能实时地判定强度值，可再利用位于左边的图像转换窗口（ImageTransform）中的调节光标来改变图像的显现。若确定调整到符合您要求的图像时，点击按钮放弃其他不适合的图像来完成获取图像的程序。也可在SAM获取图像的过程中或之后来保存需要的图像，直接点选右键单点缩略图窗口内的图像即可保存图像。在决定获取图像的数量前，需要先确定增加SAM图像参数是否会影响背景值的变化。当获取的图像次数提高时，可能会造成接近背景值的信号难以辨识，若需要针对较弱的信号进行获取，仍然建议选择适当的曝光时间来进行图像获取。三、建立快速分析步骤（CreatingProtocols）1.启动分析精灵窗口--STEP1.GELIMAGING（1）选择应用的程序（Chooseanapplication） 服务中心：800‐820‐5567 / 400‐820‐3630  （2）选择图像获取区域（ChoosetheImagingArea）（3）选择图像获取曝光时间（ChooseImageExposureTime）（4）选择显示设置（ChooseDisplayOptions,HighlightsaturatedpixelsandImageColor）2.自动进行图像分析（AnalyzeImage）--STEP2.DETECTLANESANDBANDS 服务中心：800‐820‐5567 / 400‐820‐3630  设定DETECTLANESANDBANDS的参数（LowBandDetectionSensitivity（Lowsensitivity=25）、HighBandDetectionSensitivity（Highsensitivity=75）或自行设定灵敏度。3.分子量分析（AnalyzeMolecularWeight）--STEP3.ANALYZEMOLECULARWEIGHT设定AnalyzeMolecularWeightSettings的MolecularWeightStandard（PrecisionPlusProtein™Standards、PrestainedSDS-PAGEStandardsBroadRange、PrestainedSDS-PAGEStandardsLowRange或PrestainedSDS-PAGEStandardsHighRange）、StandardLanes及RegressionMethod参数。4.报告输出设定（ReportSettings）--STEP4.SPECIFYCONTENTOFREPORTS5.结果（ResultsOverview）及报告（Report） 服务中心：800‐820‐5567 / 400‐820‐3630   （1）数据显示信息（DisplayingData）（2）分析表格设定（AnalysisTableOptions）（3）Lane信息（LaneProfile） 服务中心：800‐820‐5567 / 400‐820‐3630  （4）标准曲线（StandardCurve）四、建立图像分析步骤（CreatingImagesAnalyzingProtocols）1.图像分析（AnalyzingImages）（1）分析工具AnalysisToolBox（A）自动分析（AutoAnalysis）点选进入DetectionSettings窗口 服务中心：800‐820‐5567 / 400‐820‐3630   设定Detectlanesandbands的参数（LowBandDetectionSensitivity（Lowsensitivity=25）、HighBandDetectionSensitivity（Highsensitivity=75）或自行设定灵敏度），接着再设定MolecularWeightAnalysisSettings的MolecularWeightStandard、StandardLanes及RegressionMethod参数。2.图像工具（ImageTools）将图像进行水平或垂直延伸（Flip）、左右旋转90°或自由旋转（Rotate）、裁切（Crop）、反转（InvertData）及合并（Merge）。3.Lanes及Bands工具（LaneandBandTools）（1）LaneTab使用自动（Automatic）或手动（Manual）搜寻Lane功能 服务中心：800‐820‐5567 / 400‐820‐3630    （A）针对所有的Lanes（AllLanes）进行大小调整（Resize）、（Adjust）及删除（Delete）等参数调整。（B）针对单一Lane（SingleLane）进行增加（Add）、弯曲（Bend）、移动（Move）、宽度（Width）及删除（Delete）等参数调整。（C）利用LaneBackgroundSubtraction进行背景值之扣抵，并可点选（ApplytoselectedLane）针对单一Lane进行调整。-可以使用圆盘大小RollingDisk参数设定可接受的最低限制（1-99mm）来去除背景值。（2）BandsTab使用DetectBands进行自动搜寻Bands功能或手动进行增加（Add）、删除（Delete）及（Adjust）等参数调整。4.分子量分析工具（MolecularWeightAnalysisTools）此工具能通过已知的标准品侦测相对的分子量或basepairs。5.定量工具（QuantityTools）（1）相对定量（RelativeQuantityTab） 服务中心：800‐820‐5567 / 400‐820‐3630  从图像中选择已知的标准品（referenceband）及其标准品浓度（以R表示），其分析结果可从Analysistable观察。（2）绝对定量（AbsoluteQuantityTab）选择已知标准品浓度的bands（至少两个以上,以R表示），并设定合适的回归参数计算所得之标准曲线来推算目标bands的绝对浓度（回归参数设定如Linear(较常用)、Point-to-Point或Cubicspline）。RegressionMethodMinimumnumberofstandardbandsMinimumnumberwithForceThroughOptionLinear21Point-to-Point21CubicSpline54 服务中心：800‐820‐5567 / 400‐820‐3630   6.注释工具（AnnotationTools）可以使用AddAnnotations工具增加文字批注及箭头批注，并可调整批注相对位置（Alignment）、文本属性、颜色及旋转方向等参数7.体积工具（VolumeTools）按下选择较适合的Band型态,选取想要定量分析的Band位置,并在Band上点击左键两下可将样品定义为标准品或待测物种,并分别定义其定量依据（如kb,ppm,mg/ml…）建议用RectTool方形,先框出适当的方形,并用复制方式将分析的Band框出后（C+rl+C+左键/即可以复制） 服务中心：800‐820‐5567 / 400‐820‐3630  在Band上点击左键两下可将样品定义为标准品或待测物（1）VolumeBackgroundSubtraction-Local（Localbackgroundsubtraction）通过我们所圈选unknownvolume和standardvolume的pixels密度总和来进行背景值的扣抵。-Global（Globalbackgroundsubtraction）通过整片胶片背景平均的密度来进行背景值的扣抵。