掌握光学显微镜的使用方法

实验一细胞形态、细胞器的显微结构的观察一、实验目的1.了解普通光学显微镜的工作原理，掌握光学显微镜的使用方法。2.熟悉光学显微镜下细胞的基本形态与结构。二、实验原理经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成像。显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微镜的分辨力（resolution）有关，分辨力是指显微镜（或人的眼睛距目标25cm处）能分辨物体最小间隔的能力，分辨力的大小决定于光的波长和镜口率以及介质的折射率，用公式表示为：R=0.61λ/N．A．N．A．＝ｎsinα/2式中：n=介质折射率；α=镜口角（标本对物镜镜口的张角），N.A.=镜口率（numericaperture）。镜口角总是要小于180˚，所以sina/2的最大值必然小于1。制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78，所用介质的折射率越接近玻璃的越好。对于干燥物镜来说，介质为空气，镜口率一般为0.05~0.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近1.5。普通光线的波长为400~700nm，因此显微镜分辨力数值不会小于0.2μm，人眼的分辨力是0.2mm，所以一般显微镜设计的最大放大倍数通常为1000X。三、实验用品各种组织切片可直接进行解剖及观察并具有正像立体感的体视显微镜；能观察活细胞的相差显微镜、暗场显微镜；对于双折射物质进行结构研究的偏光显微镜；组织培养中长工作距离的倒置显微镜；图像具有浮雕感的微分干涉显微镜；具有高分辨率可进行显微断层扫描的激光共聚焦显微镜。四、方法与步骤（一）光学显微镜的构造1.机械系统用于固定材料和观察方便。2.光学系统由物镜和目镜组成，是显微镜的主体，为了消除球差和色差，目镜和物镜都由复杂的透镜组构成；3.照明系统包括光源和聚光器（二）显微镜的使用1.聚光器的调节2.光阑的调节3.工作距离4.油镜的使用（三）观察标本（四）电镜照片——细胞（Cell）植物细胞(plantcell)动物细胞(animalcell)细胞核（nucleus）线粒体（Mitochondrion）外膜内膜膜间隙基质高尔基体（Golgicomplex）电镜模型内质网(endoplasmicreticulum,ER)电镜照片粗面内质网电镜模型核糖体（ribosome）溶酶体(lysosome)溶酶体时酸性细胞器,含有一系列消化降解酶(degradativeenzymes);分为初级溶酶体和次级溶酶体。过氧化物酶体(peroxisomeormicrobody)是一种简单的膜包围的小泡,具多种功能,含有50多种酶降解大分子,最终产生H2O2。在植物种参与光呼吸反应和种子萌发。细胞骨架微管微丝中等纤维中心粒（centriole）叶绿体(chloroplast)液泡五、实验报告简述显微镜的主要结构和操作要领。绘图比较所观察到的不同的细胞形态与结构。