C-反应蛋白及临床应用

C-反应蛋白及临床应用洛阳市中心医院赵晓迎ProteinStructureCRP结构C反应蛋白的生理和生化在细胞因子IL-6家族诱导下，CRP在肝中合成迅速。正常合成率为l～10mg／d，急性炎症时每天合成超过lg/d。在急性相反应高峰时肝大量合成蛋白，其中20％是合成CRP。当IL-6刺激物缺乏时，在2～4h内合成率降至正常。循环中CRP半衰期约19h，但一旦它与配体结合，可快速的被清除。肝外合成对血清水平影响作用很小。CRP的生物学功能CRP的生物学功能-机理结合坏死的内源性物质在钙离子存在的情况下，CRP能结合坏死的内源性物质和效应细胞,当正常的脂质双层结构被破坏致使内部磷脂暴露时，CRP可发生与宿主细胞的结合。在系统性红斑狼疮的鼠模型中，注射CRP可改善SLE的状况。–人CRP基因的多态性导致的低基础水平表达增加了发生系统性狼疮的风险。–CRP量的减少可能与SLE发病机理有关。–CRP量的减少使结合的细胞碎片减少。CRP的生物学功能-机理结合外源性物质–细菌、真菌、寄生虫中的细胞壁磷酸胆碱。–CRP具有保护机体抗细菌感染的能力。–CRP保护机体抵抗致命性的细菌脂多糖和各种炎症介子的能力。CRP的生物学功能-机理结合配体的CRP激活下列生物系统，导致配体的消除：–CRP对补体系统的激活.–CRP结合IgGFcR，增强自然杀伤细胞的活性。–CRP的调理性质，调理即刺激细胞吞噬作用。–CRP和血小板激活因子(PAF)结合抑制PAF刺激的血小板聚集。CRP的生物学功能-机理CRP具有多效性的作用。–当抑制干扰素的合成时，CRP可诱导IL-1受体拮抗剂而增加抗炎细胞因子IL-10的释放.–CRP也可诱导炎症反应。CRP向上-调节内皮细胞粘附分子的表达，刺激许多细胞释放IL-8，增加血浆纤维蛋白酶原催化剂抑制剂-1的表达和活性、增加IL-1,IL-6,IL-18,和肿瘤坏死因子的释放.CRP诱导或抑制炎症反应依赖于环境。CRP功能识别和启动靶效应细胞及其产物并将其从组织中清除。吞噬溶解入侵微生物。急性相蛋白CRP合成的生物调控CRP基因位于1号染色体短臂，只有一个内含子，其分离编码信号肽的区域。肝脏CRP合成的调节主要发生在转录阶段。由IL-6诱导，IL-1可增加此作用。CRP启动子最近区为STAT3和Rel蛋白的结合部位。这些因子的相互作用增加DNA结合C/EBP家属成员的稳定性，从而有效地诱导了CRP基因的表达。神经元细胞、动脉硬化斑块、单核细胞和淋巴细胞也可以合成CRP。在这些部位的调节机制还不清楚。修饰的CRP(m-CRP)-ModifiedCRP目前认为m-CRP是原CRP的单体。与天然CRP不同,表现在分子大小,溶解度,抗原性,带电荷数等方面的差别.m-CRP具抗菌作用。m-CRP具有强大地诱发炎症的作用。方法灵敏度参考献试管内沉淀试验-JExpMed1930;52∶561毛细管内沉淀试验10～20mg/LAmJMed1950;8∶445改良平板双扩散法10～20mg/LIntArchAllergy1962改良琼脂柱扩散法3.0mg/LProcSocExpBiol1955改良单扩散法1.0mg/LActaPatholMicrobiolScand琼脂糖凝胶电泳法1.0mg/LClinChimActa1969放射电免疫扩散法10μg/LJClinLabInvest1973补体结合试验0.6mg/LProcSocExpBiol1954胶乳凝集试验1.0mg/LNature(London)1961高敏乳胶增强浊度0.35mg/mlDadeGermany2000荧光抗体法—Nature(London)1961放射免疫测定法3μg/LJLabClinMed1976检测方法CRP检测方法-免疫沉淀试验检测CRP原始方法.将兔抗CRP血清吸入毛细管内。把它浸入被测血浆或血清内,因毛细管虹吸作用被吸入,与抗CRP血清形成接触界面。这种方法较粗糙,取得结果时间较长,也不太正确可靠.CRP检测方法-免疫浊度法可溶性CRP-Ag与可溶性抗CRP-Ab反应,形成可见的网络状沉淀性IC复合物点.IC复合物对光具有散射作用,使溶液具有肉眼尚不可见的浊度。在被测样品中加抗血清后一定时间,测定反应系统散射光强度或浊度变化,可对被检物及其浊度加以检测。根据仪器的光学系统,浊度法分为散射浊度法和透射浊度法两类。许多自动化生化分析仪和自动化免疫测定仪都可CRP测定项目。CRP检测方法-胶乳凝集试验(LAT)将强化的兔抗CRP抗体固定于胶乳微粒上。加入被测样品后与CRP在3分钟内形成肉眼可见的凝集物。胶乳强化浊度法的灵敏度优于传统浊度法,试剂稳定性佳。检测方法-标记免疫测定ELISA和免疫发光法和化学发光法等都可用于CRP的测定。化学发光法的灵敏度和定量精确度可与RIA媲美,而无同位素污染,试剂稳定,分析速度快。CRP-POCT(床边试验)法－ELISA干片法。–把磷脂酰胆碱(PC)化学交联固定于载体。–被测CRP与载体的PC结合。–被酶标记的抗CRP单抗结合。–可灵敏、特异性检测CRP,约5分钟可得结果.。检测方法-胶乳增强试验（shCRP）：常规CRP检验方法可在感染或组织损伤时检测出CRP10mg/L。该检测方法具有较高的灵敏度。这个水平（0.1～10mg/L）的C反应蛋白又被称为超敏C反应蛋白（hsCRP）。CRP检测的评估1、半定量：胶乳凝集试验等已弃用。2、定量：–散射免疫比浊法、透射免疫比浊法：是目前常用方法。检测限度为5～150mg／L，CV＜5%。–胶乳增强试验-shCRP检测：很大程度提高了敏感度。酶免疫分析和荧光免疫分析：有潜在的灵敏度优势。–胶乳增强试验-shCRP检测方法很大程度提高了敏感度。CRP检测对标本的采集也无特殊要求。高浓度的类风湿因子可产生CRP假性升高。CRP筛查的费用远小于其他心血管检查的费用。临床应用____参考范围CRP参考范围中值成人和儿童0.068～8.2mg/L0.58mg/L新生儿，脐血≤0.6mg/L出生后第4天至1个月的婴儿≤1.6mg/L分娩母亲≤47mg/L临床意义器质性疾病的筛选–急性或慢性炎症如伴有细菌感染。–自身免疫或免疫复合物病。–组织坏死和恶性肿瘤。临床意义—感染的诊断与鉴别CRP在细菌感染发生后6～8h即开始升高，24～48h达到高峰，在感染消除后其含量急骤下降，一周内可恢复正常。CRP在病毒感染时无显著升高。革兰阴性感染：可发生最高水平的CRP，有时高达500mg／L。革兰阳性菌感染和寄生虫感染：通常引起中等程度的反应，典型的是在100mg／L左右。病毒感染：引起的反应最轻，通常不超过50mg／L，极少超过100mg／L。在细菌感染的急性期，CRP显著升高，寡聚腺苷合成酶正常；在病毒感染时CRP水平正常或轻微升高，寡聚腺苷合酶水平升高。临床意义C反应蛋白是心血管疾病最强的危险指标，C反应蛋白水平可预测将来心肌梗塞及中风的危险性。–C反应蛋白含量2.1mg/L的人与1mg/L者比较:•将来发生心肌梗塞的危险性为后者的2.9倍；•发生缺血性中风的危险性为后者的1.9倍；•发生外周动脉血管性疾病的危险性为后者的4.1倍。–在痛疼开始后数小时内，CRP升高，3~4d达高峰，在CK-MB回到正常后7-10d也降至正常。临床意义－自身免疫或免疫复合物病。系统性红斑狼疮、多肌炎、系统性硬化症CRP无明显改变，所以可用于与风湿性疾病鉴别。若存在发热为并发感染而非疾病的恶化。临床意义-癌症已升高或正在升高的CRP预示着不良的预后及常提示转移。结肠癌是导致死亡人数第二多的癌症。研究显示，血液C-反应蛋白含量最高的那些人患结直肠癌的危险，是C-反应蛋白含量最低者的两倍.临床意义评估疾病活动性和疗效监控–CRP为10～50mg／L表示轻度炎症。–CRP升至100mg／L表示较严重的疾病，它的严重程度在必要时需静脉注射。–CRP100mg／L表示严重的疾病过程并常表示细菌感染的存在。临床意义-抗生素的治疗监测系列血浆CRP的测定，可用来作为下列情况的治疗监测：–在许多感染时最有效使用抗生素治疗。–根据CRP水平的变化来决定抗炎药物的剂量。–在CRP下降至正常时，中断抗菌素治疗。–在高危人群缺少微生物学诊断时，为抗生素治疗的指引。临床意义-抗生素的治疗监测临床意义-外科患者施行手术后24～72h,血中CRP水平明显升高,约在第5～7天恢复正常。–凡骤升后持续高水平多预示合并感染。–对中、大手术患者,在术前和术后3～7天各作常规检测一次。–凡术后5～7天CRP仍持续高水平者,理应怀疑合并感染,并配合治疗作随访监测。临床意义-内科–肺炎:CRP＞100mg/L，强烈提示细菌感染，如化脓性支气管炎或肺炎;典型的病毒性肺炎不会超过50mg/L。–心血管病，在痛疼开始后数小时内，CRP升高，3-4d达高峰，在CK-MB回到正常后7-10d也降至正常。–代谢综合征代谢综合征分组，根据CRP水平可将为•低危险组，1mg/Ｌ•中危险组，1～3mg/Ｌ•高危险组，3mg/Ｌ临床意义-妇产科–盆腔炎和子宫附件炎.CRP值升高–盆腔肿块和子宫肌瘤通常多为阴性。–诊断胎膜早破宫内感染.胎膜早破时，如母亲CRP在产前6-19h超过50mg/L可作为出现AIS的标准；产后第一天出现的AIS的CRP将比正常分娩时高出2-3倍。–无并发症的CT和NG感染不会引起CRP升高。但扩散到盆腔可引起急时相反应。临床意义-儿科新生儿浓毒血症:–出生3天前CRP＞10mg/L表示感染.–如果CRP在24h内没有超过10mg/L，多无新生儿感染.小儿发热:–患病超过12h，CRP显著＞40mg/L，ESR显著＞30mm/h应关注为细菌性感染。脑膜炎:–CRP＞20mg/L提示为细菌感染的可能；–＞100mg/L时具有细菌感染诊断价值。–结脑CRP在20-60mg/L。–成功的治疗可使CRP在一周内降至正常。小结CRP是一五球体结构的高度保守的急时相蛋白。CRP为一模式识别分子，与特殊的分子结构结合而发挥作用。为宿主先天性免疫应答的一部分，在机体平衡和自身保护中起着重要贡献。血CRP浓度的升高在为炎症和组织损伤的标志。CRP生物学的作用似乎相当复杂的，且为多效的。CRP与许多疾病的发病机理有关。CRP对机体许多疾病的早期诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后评估以及指导临床抗菌素的合理应用等有重要的意义。CRP的检测，对于普通的炎症用常敏CRP检测即可，而对于心血管疾病、代谢综合征、自身免疫性疾病、新生儿疾病检测等则需用超敏CRP检测方法方可。