3种抗瘤中药制剂影响Hela细胞免疫抑制分子分泌的研究

河北医科大学硕士学位论文3种抗瘤中药制剂影响Hela细胞免疫抑制分子分泌的研究姓名：张雯珂申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：郝淑维;崔澂200803013种抗瘤中药制剂影响Hela细胞免疫抑制分子分泌的研究作者：张雯珂学位授予单位：河北医科大学相似文献(1条)1.学位论文吕克蔺黄芪制剂对Hela细胞生长增殖及其相关调控分子表达影响的实验研究2009目的：恶性肿瘤目前已成为危害人类生命健康最重要的疾病之一，每年约100万人因患癌症而死亡，对其发病机理及治疗的研究已取得一定的成绩，综合治疗原则已越来越受关注，尤其是我国传统中药制剂用于治疗和辅助治疗肿瘤的研究已成为新热点。以往的研究多是针对中药抑制肿瘤生长方面，而对某些中药促进肿瘤细胞生长增殖作用的研究报道较少。我们在预实验中发现，已作为益气类传统中药应用于临床，以及作为扶正祛邪类抗瘤中药制剂应用于辅助治疗肿瘤的黄芪制剂（AMB）可促进宫颈癌细胞生长增殖，提示黄芪及其提取物作为传统中药，能否应用于宫颈癌患者及具此类肿瘤诱发体质人群的其他疾病的治疗尚存在争议。本课题旨在通过实验探讨AMB对宫颈癌Hela细胞生长增殖及其相关调控分子表达的影响，为指导临床合理选用及慎用此种抗瘤中药制剂奠定实验基础和提供理论依据。br　　方法：确定最适宜的肿瘤细胞接种浓度及培养时间后，选用不同浓度的AMB作用于Hela细胞，以不经AMB作用的相应同步培养的Hela细胞作对照。MTT法测定AMB作用后对Hela细胞生长增殖变化的A492值。采用流式细胞计数法检测细胞周期及增殖凋亡状况，并计算出凋亡指数（AI）和增殖指数（PI）。培养细胞以HE染色进行常规病理观察；采用免疫细胞化学法测定Hela细胞中PCNA、Bax、Bcl-2br　　等增殖凋亡相关分子表达的变化，分别以矩形走行计数200个细胞，计算表达阳性细胞百分率表示阳性表达范围；并以图像分析系统所示阳性酶点（PED）表示阳性染色范围大小，以灰度值（GS）表示阳性染色强度（取值范围为0～255，其数值越大表示阳性染色越弱，数值越小表示阳性染色越强）。结果：br　　1AMB对Hela细胞生长增殖的影响br　　经MTT法确定实验用Hela细胞接种浓度为2×105/mL，培养时间为48h；与对照组（0.973±0.073）相比，2000mg/L、1000mg/L、500mg/L、250mg/LAMB、125mg/L可使Hela细胞生长增殖的A492值呈递进性显著增高（分别为1.427±0.158，P0.01；1.522±0.194，P0.01；1.275±0.125，P0.01；1.219±0.116，P0.01；1.098±0.114，P0.05），62.5mg/L及31.25mg/LAMB作用后的A492无显著变化（分别为1.052±0.111，1.020±0.089，均P0.05）。br　　2AMB对Hela细胞周期及增殖凋亡的影响br　　2.1对细胞周期的影响br　　与对照组（68.28％±2.01％）相比，2000mg/L、1000mg/L、500mg/L、250mg/L、125mg/L、62.5mg/L及31.25mg/LAMB可使Hela细胞G0/G1期的比例显著降低（分别为59.64％±2.77％，P0.05；58.96％±2.67％，P0.05；60.49％±2.89％，P0.05；63.84％±3.26％，P0.05；61.68％±3.15％，P0.05；57.83％±2.34％，P0.01；57.39％±2.46％，P0.01）。br　　与对照组（13.49％±1.96％）相比，2000mg/L、1000mg/L、500mg/L、250mg/L、125mg/L、62.5mg/L及31.25mg/LAMB可使Hela细胞S期的比例显著升高（分别为br　　19.35％±1.53％，P0.01；16.06％±0.82％，P0.05；16.33％±0.85％，P0.05；15.97％±0.74％，P0.05；17.79％±1.15％，P0.05；17.89％±1.21％，P0.05；17.65％±0.97％，P0.05）。2.2对增殖凋亡的影响br　　与对照组（5.41％±0.61％）相比，2000mg/L、1000mg/L、500mg/L、250mg/L、125mg/L、62.5mg/L及31.25mg/LAMB可使Hela细胞的AI值显著降低（分别为3.32％±0.05％，P0.01；4.22％±0.12％，P0.05；4.22％±0.12％，P0.05；2.88％±0.23％，P0.01；2.81％±0.20％，P0.01；4.29％±0.27％，P0.05；4.98％±0.20％，P0.05）。各组间均数的两两比较结果显示，2000mg/L组与31.25mg/L组分别与其他各组之间均有显著性差异；1000mg/L、500mg/L及62.5mg/L组两两之间无显著性差异；250mg/L组与125mg/L组之间无显著性差异。br　　与对照组的（29.85％±2.65％）相比，2000mg/L、1000mg/L、500mg/L、250mg/LAMB可使Hela细胞的PI值均明显增高（分别为37.16％±4.13％，42.75％±4.52％，36.68％±3.34％，36.56％±3.05％，均P0.05）。125mg/L、62.5mg/L及31.25mg/LAMB作用后无显著变化（分别为35.58％±2.96％，35.25％±3.14％，35.28％±3.22％，均P0.05）。各组间均数的两两比较结果显示，1000mg/L组与其他各组之间均有显著性差异；其他各组两两之间均无显著性差异。br　　3AMB对Hela细胞生长增殖相关调控分子表达的影响br　　3.1对Bax蛋白表达的影响br　　3.1.1Bax的阳性表达率：与对照组（36.17％±3.05％）相比，2000mg/L、1000mg/L、500mg/L、250mg/L、125mg/L、br　　62.5mg/L及31.25mg/LAMB均可使Hela细胞中Bax的阳性表达率明显降低（分别为14.24％±1.76％，19.70％±1.89％，21.21％±2.17％，23.67％±2.29％，25.06％±2.31％，28.45％±2.42％，30.52％±2.33％，均P0.05。相关分析显示，阳性表达率与浓度之间呈显著负相关（r=-0.815，P=0.000）。3.1.2Bax阳性表达的PED值：与对照组（481.49±58.34）相比，2000mg/L、1000mg/L、500mg/L、250mg/L、125mg/L、62.5mg/L及31.25mg/LAMB均可使Hela细胞Bax阳性表达的PED值明显降低（分别为246.57±36.78，P0.01；257.09±40.00，P0.01；289.34±39.63，P0.01；376.69±28.71，P0.01；334.46±33.38，P0.01；386.31±54.91，P0.05；392.86±42.01，P0.05）。相关分析显示，PED值与浓度之间呈显著负相关（r=-0.714，P=0.000）；PED值与阳性表达率之间呈显著正相关（r=0.946，P=0.000）。br　　3.1.3Bax阳性表达的GS值：与对照组GS（121.13±7.97）相比，2000mg/L、1000mg/L、500mg/L、250mg/LAMB可使Hela细胞Bax阳性表达的GS值明显增高（分别为159.03±20.82，146.45±12.17，143.37±11.31，152.81±14.40，均P0.05）；125mg/L、62.5mg/L及31.25mg/LAMB作用后GS值无显著变化（分别为127.01±5.49，128.62±9.66，123.90±9.50，均P0.05）。相关分析显示，GS值与浓度之间呈显著正相关（r=0.636，P=0.001）。br　　3.2对Bcl-2蛋白表达的影响br　　3.2.1Bcl-2的阳性表达率：与对照组（79.85％±2.47％）相比，2000mg/L、1000mg/L、500mg/L、250mg/LAMBbr　　可使Hela细胞中Bcl-2的阳性表达率明显增高（分别为96.02％±3.88％，89.73％±3.25％，92.34％±3.54％，94.65％±3.69％，均P0.05），125mg/L、62.5mg/L及31.25mg/LAMB作用后无显著变化（分别为84.22％±3.18％，82.56％±2.98％，80.32％±2.61％，均P0.05。相关分析显示，阳性表达率与浓度之间呈显著正相关（r=0.658，P=0.000）。3.2.2Bcl-2阳性表达的PED值：与对照组（718.40±94.94）相比，2000mg/L、1000mg/L、500mg/L、250mg/LAMB可使Hela细胞Bcl-2阳性表达的PED值明显增高（分别为1292.60±147.54，P0.01；1124.74±139.64，P0.01；1168.40±96.69，P0.01；866.54±72.40，P0.05）；125mg/L、62.5mg/L及31.25mg/LAMB作用后无显著变化（分别为852.63±81.65，859.31±74.02，753.34±72.95，均P0.05）。相关分析显示，PED值与浓度之间呈显著正相关（r=0.815，P=0.000）；PED值与阳性表达率之间呈显著正相关（r=0.688，P=0.000）。br　　3.2.3Bcl-2阳性表达的GS值：与对照组（133.56±2.89）相比，2000mg/L、1000mg/L、500mg/L、250mg/L组、125mg/L、62.5mg/L及31.25mg/LAMB均可使Hela细胞Bcl-2阳性表达的GS值明显降低（分别为90.06±7.10，96.78±5.55，103.47±5.19，104.37±5.38，100.00±8.71，97.01±8.96，108.84±5.17，均P0.01）。相关分析显示，GS值与浓度之间呈显著负相关（r=-0.535，P=0.007）。br　　3.3.对PCNA蛋白表达的影响br　　3.3.1PCNA的阳性表达率：与对照组（42.71％±2.01％）相比，2000mg/L、1000mg/L、500mg/L、250mg/L、125mg/Lbr　　及62.5mg/LAMB可使Hela细胞PCNA的阳性表达率明显增高（分别为69.28％±4.01％，64.56％±3.846％，62.27％±3.69％，54.02％±3.51％，57.34％±3.28％，48.40％±3.26％，均P0.05）。31.25mg/LAMB作用后无显著变化（为46.96％±2.04％，P0.05）。相关分析显示，阳性表达率与浓度之间呈显著正相关（r=0.810，P=0.000）。3.3.2PCNA阳性表达的PED值：与对照组（249.57±40.23）相比，2000mg/L、1000mg/L、500mg/L、250mg/L、125mg/L、62.5mg/L及31.25mg/LAMB可使Hela细胞PCNA阳性表达的PED值明显增高（分别为523.91±64.66，P0.01；497.94±42.76，P0.01；499.40±40.29，P0.01；449.03±46.85，P0.01；400.06±60.12，P0.01；339.89±45.39，P0.05；350.03±40.92，P0.05）。相关分析显示，PED值与浓度之间呈显著正相关（r=0.683，P=0.000）；P