2D-DIGE(荧光差异双向电泳)

杨华丽November12th,20152-DDIGEContents2-DE12-DDIGE2Experiment32-DDIGEvideo41.2-DE1.2-DE1.2-DE2.2-DDIGE荧光差异双向电泳技术（twodimensiondifferencegelelectrophoresis,2D-DIGE）2D-DIGE技术是一种新出现的荧光标记的定量蛋白质组学技术，它比经典的2-DE具有更高的动力学范围和灵敏性，是2-DE技术的成熟与完善。它通过三色荧光染料分别对内标和生物样本进行标记，能够在一张2D胶上对两个样本的多种蛋白质进行分离，并分别单独成像，应用DeCyder2D软件分析图像，得到蛋白表达量的丰度变化，根据数据分析结果准确地发现差异蛋白。常规可检测到小于10%的蛋白表达差异而同时统计学可信度达到95%。2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGEVirtualeliminationofgel:gelvariationisinducedbiologicalchangewithstatisticalaccuracycapableofrevealingdifferencesinabundanceoflessthan10%betweensamples.2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE每个标记蛋白只携带一个染料标记，呈现一个蛋白质点2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE2.2-DDIGE12134562.2-DDIGE3.experiment3.experiment3.experiment3.experiment3.experiment3.experiment3.experiment3.experiment3.experiment3.experiment4.video2-DDIGEvideo5.question1.用三色荧光染料标记样品是否会改变蛋白质的分子质量和等电点。答：不会。这三种荧光染料是电荷和分子量匹配的，并且都是带一价正电荷，标记的是蛋白质赖氨酸的ε-氨基。由于ε-氨基上带有一价正电荷，当染料与蛋白质发生反应时就可以发生电荷取代，所以不会改变各蛋白质的等电点。虽然被标记蛋白质的分子质量有所改变，但样品中所有蛋白质的相对分子质量都等量增加了，所以依旧不会影响蛋白质的电泳结果2、在第14张PPT中，很明显可以看出样品4的量要远远大于样品2，但为什么又说它们的量是一样的呢？答：因为在胶A中样品1与2的量相对于内标几乎是没有变化的，我们可以粗略的认为它们三者均一样。在胶B中我们可以得出样品4与内标一样，而样品3相对于内标有所减少。由于胶A与胶B的内标又相同的，所以样品4与样品2的量也是一样的。