高中生物实验知识点总结

高中生物实验知识点总结一、光学显微镜的结构、呈像原理、放大倍数计算方法结构：光学部分：目镜、镜筒、物镜、遮光器（有大小光圈）和反光镜（有平面镜和凹面镜）机械部分：镜座、倾斜关节、镜臂、载物台（上有通光孔、压片夹）、镜头转换器、粗、细准焦螺旋。注：目镜无旋转螺丝，镜头越长，放大倍数越小；物镜有旋转螺丝，镜头越长，放大倍数越大。呈像原理：映入眼球内的是倒立放大的虚像。（物镜质量的优劣直接影响成像的清晰程度）放大倍数：目镜和物镜二者放大倍数的乘积）注：显微镜放大倍数是指直径倍数，即长度和宽度，而不是面积。二、显微镜的使用：置镜（装镜头）→对光→置片→调焦→观察1．安放。显微镜放置在桌前略偏左，距桌缘8—10cm处，装好物镜和目镜（目镜5×物镜10×）2．对光。转动转换器，使低倍镜对准通光孔，选取较大光圈对准通光孔。左眼注视目镜，同时把反光镜转向光源，直至视野光亮均匀适度。调节视野亮度只可用遮光器和反光镜，光线过强，改用较小光圈或用平面反光镜；光线过弱，改用较大光圈或用凹面反光镜。选低倍镜→选较大的光圈→选反光镜（左眼观察）3．观察。将切片或装片放在载物台上，标本正对通光孔中心。转动粗准焦螺旋（顺时针），俯首侧视镜筒慢慢下降，直到物镜接近切片（约0.5cm），左眼观察目镜，（反时针）旋转粗准焦螺旋，使镜筒慢慢上升，看到物像时轻微来回旋转细准焦，直到物像清晰。（找不到物像时，可重复一次或移动装片使标本移至通光孔中心）。．观察时两眼都要睁开，便于左眼观察，右眼看着画图。侧面观察降镜筒→左眼观察找物像→细准焦螺旋调清晰4．高倍镜的转换。找到物像后，把要观察的物像移到视野中央，把低倍镜移走，换上高倍镜，只准用细准焦螺旋和反光镜把视野调整清晰，直到物像清楚为止。顺序：移装片→转动镜头转换器→调反光镜或光圈→调细准焦螺旋注：换高倍物镜时只能移动转换器，换镜后，只准调节细准焦和反光镜（或光圈）。问1：低倍镜换为高倍镜后，若看不到或看不清原来的像，可能原因？（ABC）A、物像不在视野中B、焦距不在同一平面C、载玻片放反，盖玻片在下面D、未换目镜问2：放大倍数与视野的关系：放大倍数越小，视野范围越大，看到的细胞数目越多，视野越亮，工作距离越长；放大倍数越大，视野范围越小，看到的细胞数目越少，视野越暗，工作距离越短。故装片不能反放。5．装片的制作和移动：制作：滴清水→放材料→盖片移动：物像在何方，就将载玻片向何处移。（原因：物像移动的方向和实际移动玻片的方向相反）6．污点判断：1）污点随载玻片的移动而移动，则位于载玻片上；2）污点不随载玻片移动，换目镜后消失，则位于目镜；换物镜后消失，则位于物镜；3）污点不随载玻片移动，换镜后也不消失，则位于反光镜上。7．完毕工作。使用完毕后，取下装片，转动镜头转换器，逆时针旋出物镜，旋进镜头盒；取出目镜，插进镜头盒，盖上。把显微镜放正。实验一：观察DNA、RNA在细胞中的分布（必修一P26）一．实验目的：初步掌握观察DNA和RNA在细胞中分布的方法二．实验原理：1．甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。2．盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色休中的DNA和蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。三．方法步骤：操作步骤注意问题解释取口腔上皮细胞制片载玻片要洁净，滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻刮几下取细胞将载玻片在酒精灯下烘干防止污迹干扰观察效果保持细胞原有形态消毒为防止感染，漱口避免取材失败固定装片水解将烘干的载玻片放入质量分数为8%的盐酸溶液中，用300C水浴保温5min改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，促进染色体的DNA与蛋白质分离而被染色冲冼涂片用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10S洗去残留在外的盐酸染色滴2滴吡罗红甲绿染色剂于载玻片上染色5min观察先低倍镜观察，选择染色均匀、色泽浅的区域，移至视野中央，调节清晰后才换用高倍物镜观察使观察效果最佳实验二检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质（必修一P18）一．实验目的：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质二．实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。1．可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu2O沉淀。如：葡萄糖+Cu(OH)2葡萄糖酸+Cu2O↓（砖红色）+H2O，即Cu(OH)2被还原成Cu2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。2．脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色）。淀粉遇碘变蓝色。3．蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。）三．实验材料1．做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）2．做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。3．做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。四、实验试剂斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/mLCuSO4溶液）、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/mLCuSO4溶液）、体积分数为50%的酒精溶液，碘液、蒸馏水。五、方法步骤：（一）可溶性糖的鉴定操作方法注意问题解释1.制备组织样液。（去皮、切块、研磨、过滤）苹果或梨组织液必须临时制备。因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。2.取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。3.向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂；切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu(OH)2在70~900C下分解成黑色CuO和水；甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无Cu(OH)2生成。4.试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中，加热约2分钟，观察到溶液颜色：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不朝向实验者。也可用酒精灯对试管直接加热。防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤；缩短实验时间。（二）脂肪的鉴定操作方法注意问题解释花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中，用吸水纸吸去装片中的水。干种子要浸泡3~4小时，新花生的浸泡时间可缩短。因为浸泡时间短，不易切片，浸泡时间过长，组织较软，切下的薄片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，染色1分钟。染色时间不宜过长。用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。用吸水纸吸去薄片周围酒精，滴上1~2滴蒸馏水，盖上盖玻片。滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。装片不宜久放。时间一长，油滴会溶解在乙醇中。实验一观察DNA和RNA在细胞中的分布实验原理：DNA绿色，RNA红色分布：真核生物DNA主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA；RNA主要分布在细胞质中。实验结果:细胞核呈绿色,细胞质呈红色.实验二物质鉴定还原糖+斐林试剂～砖红色沉淀脂肪+苏丹III～橘黄色脂肪+苏丹IV～红色蛋白质+双缩脲试剂～紫色反应1、还原糖的检测（1）材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。（2）试剂：斐林试剂（甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液），现配现用。（3）步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL（斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入）→水浴加热2min左右→观察颜色变化（白色→浅蓝色→砖红色）★模拟尿糖的检测1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液2、检测方法：斐林试剂（水浴加热）或班氏试剂或尿糖试纸3、结果：（用斐林试剂检测）试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。2、脂肪的检测（1）材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。（2）步骤：制作切片（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央↓染色（滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精）↓制作装片（滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片）↓镜检鉴定（显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒）3、蛋白质的检测（1）试剂：双缩脲试剂（A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液）（2）步骤：试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL，摇匀→加双缩尿试剂B液4滴，摇匀→观察颜色变化(紫色)考点提示：（1）常见还原性糖与非还原性糖有哪些？葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。（2)还原性糖植物组织取材条件？含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。（3)研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。（4）斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？混合后使用；产生氢氧化铜；氢氧化铜不稳定。（5)还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为：浅蓝色棕色砖红色（6）花生种子切片为何要薄？只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。（7）转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？切片的厚薄不均匀。（8）脂肪鉴定中乙醇作用？洗去浮色。（9）双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？先加A液的目的。怎样通过对比看颜色变化？不能混合；先加A液的目的是使溶液呈碱性；先留出一些大豆组织样液做对比。实验三观察叶绿体和细胞质流动1、材料：新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶，口腔上皮细胞临时装片2、原理：叶绿体在显微镜下观察，绿色,球形或椭球形。用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色,细胞质接近无色。知识概要：取材制片低倍观察高倍观察考点提示：（1)为什么可直接取用藓类的小叶，而不能直接取用菠菜叶？因为藓类的小叶很薄，只有一层细胞组成，而菠菜叶由很多层细胞构成。（2）取用菠菜叶的下表皮时，为何要稍带些叶肉？表皮细胞除保卫细胞外，一般不含叶绿体，而叶肉细胞含较多的叶绿体。（3)怎样加快黑藻细胞质的流动速度？最适温度是多少？进行光照、提高水温、切伤部分叶片；25℃左右。（4）对黑藻什么部位的细胞观察，所观察到的细胞质流动的现象最明显？叶脉附近的细胞。（5）若视野中某细胞中细胞质的流动方向为顺时针，则在装片中该细胞的细胞质的实际流动方向是怎样的？仍为顺时针。（6）是否一般细胞的细胞质不流动，只有黑藻等少数植物的细胞质才流动？否，活细胞的细胞质都是流动的。（7）若观察植物根毛细胞细胞质的流动，则对显微镜的视野亮度应如何调节？视野应适当调暗一些，可用反光镜的平面镜来采光或缩小光圈。（8）在强光照射下，叶绿体的向光面有何变化？叶绿体的受光面积较小有一面面向光源。实验四观察有丝分裂1、材料：洋葱根尖（葱，蒜）2、步骤：（一）洋葱根尖的培养（二）装片的制作制作流程：解离→漂洗→染色→制片1.解离:药液:质量分数为15%的盐酸,体积分数为95%的酒精(1:1混合液).时间:3~5min.目的:使