医用化学实验

医用化学实验生物化学教研室张丽娜实验课注意事项：不迟到，不早退，做好课前预习工作穿好白大褂使用煤气时注意安全试剂用后及时归位保持严肃认真的实验态度及时记录实验结果，按时完成实验报告实验报告格式：1、实验目的2、实验原理3、实验操作4、实验结果（真实、客观）5、讨论（实验报告的核心）6、意见与建议（可选择）实验一医化实验基本操作玻璃仪器的洗涤吸量管的使用注意：右手食指按住吸量管口溶液的混匀指弹混匀、搅拌混匀、倒转混匀、旋涡混合器混匀等实验二电离平衡与缓冲溶液实验目的1、掌握同离子效应的原理2、学习通过韩-哈方程式配制缓冲溶液3、观察稀释对缓冲溶液pH值的影响4、学习吸量管及pH计的使用1、同离子效应实验原理HAcH++Ac-NaAcNa++Ac-例：同离子效应使得HAc的电离度降低，溶液的pH升高•酸碱指示剂：红橙黄红淡红黄无色绿蓝3.14.481067.6甲基橙酚酞溴麝香草酚蓝pH=pKa+lg[盐][酸]韩-哈方程式也可表示为：（盐的摩尔数）（酸的摩尔数）n盐/V溶液n酸/V溶液当酸与盐混合前的浓度相等时：=pKa+lgV盐V酸pH=pKa+lgn盐n酸pH2、缓冲溶液缓冲溶液加水稀释时，盐浓度与酸浓度作相同比例稀释，因此，缓冲溶液的pH几乎不因稀释而改变。缓冲溶液的缓冲能力有一定限度，超过该限度缓冲溶液的pH也会发生较大改变实验操作1、同离子效应（1）各1支+NH3.H2O2ml+1滴酚酞1滴NH4Cl1滴H2O摇匀观察结果1ml=15滴（2）各1支+醋酸2ml+1滴甲基橙1滴NaAc1滴H2O摇匀观察结果2、缓冲溶液（1）0.1mol/LKH2PO40.1mol/LNa2HPO48ml2ml5ml5ml2ml8ml精密pH试纸检测pH计检测韩-哈方程式计算测完pH值后2管保留用吸量管进行操作大试管3支另取2支小试管，以上面试管2里的缓冲液进行实验2号缓冲液2ml1ml蒸馏水0ml1ml溴麝香草酚蓝各1滴（2）（3）另取3支小试管，以上面试管2里的缓冲液进行实验2号缓冲液2ml2ml2ml溴麝香草酚蓝各2滴，混匀NaOH3滴，摇匀，观察结果继续滴加，记录变色时所加NaOH滴数HCl3滴，摇匀，观察结果继续滴加，记录变色时所加HCl滴数2号管缓冲液测好pH后切勿立即倒去吸量管的使用pH计的使用注意事项：1、看清刻度，选择适当容量的吸量管2、左手洗耳球，右手吸量管；食指按住管口，稳住液面3、拿吸量管的时候，刻度面向自己4、读刻度时，眼睛与刻度线同一水平，以下凹面为准5、吸取另外一种试剂时，要润洗吸量管的使用实验三功能基反应实验目的1、掌握几功能基的主要化学性质2、了解乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象1、双键与卤素的加成反应实验原理C=C+Br2-CH-CH-BrBr红棕色的溴褪色，可用于鉴定有机物中是否存在不饱和键2、酚性羟基的反应OHONaNaOH+混浊澄清（1）苯酚的弱酸性（2）酚性羟基与FeCl3的显色反应苯酚FeCl3紫色络合物可用于鉴别酚和醇3、醛基的反应O||R-C-H+2Cu（OH）2O||R-C-OH+Cu2O↓+2H2O砖红色沉淀（班氏试剂）酮无此反应，故可用于鉴别醛和酮OCH2OHHHOHHOHHOHHOCHOHO-C-HCH2OHHOHCH2OHHOH-C-OHH-C-OHH-C-OHCH-C-OHH-C-HO-C-HCH2OHH-COHOHOHHHHHOHOH123456OHHHOHOHHOHOHCH2OHOCH2OHHOHHHOHOHCH2OHHO-C-HCH2OHOHCH2OHH-C-OHH-C-OHCH-C-OHHO-C-HH-CO123456***CH2OHHOHCH-C-OHHO-C-HOCH2OHH-C-OHCH2C=OCH2OH2,5成环2,6成环2,5成环2,6成环环式哈沃斯式4、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象•使三氯化铁溶液呈紫红色反应——具有烯醇式结构•与苯肼反应生成苯腙，颜色？•使红棕色溴的四氯化碳溶液褪色——具有双键结构OO||||CH3-C-CH2-C-O-C2H5说明乙酰乙酸乙酯是酮式和烯醇式两种异构体的混合物，两者之间相互转变，处于动态平衡。OO||||CH3-C-CH2-C-O-C2H5OHO|||CH3-C=CH-C-O-C2H5室温时酮型（93%）烯醇型（7%）凡两种或两种以上的异构体能互相转变，并以动态平衡存在的现象——互变异构现象5、尿素的化学性质H2N-C-NH2H2N-C-NH-C-NH2+NH3CuSO4OOOH2N-C-NH2O+OCH2N-C-NH-C-NH2OO150160~紫红色缩二脲（缩二脲反应）碱性OH-紫红色物质缩二脲反应：缩二脲+CuSO4（少量）1、烯基的反应实验操作+硬脂酸10滴+油酸10滴+植物油10滴逐滴加入5%Br2的CCl4溶液，不断振荡试管，记录结果不是溴水2、酚性羟基的反应（1）+液体苯酚2滴水5滴，摇匀+10%NaOH2滴摇匀，观察（2）+0.5%苯酚溶液10滴+0.5%水杨酸溶液10滴+苯甲醇10滴各加入1%FeCl31滴，观察结果3、醛基反应（大试管6支）试剂（滴）12345640%乙醛液5—————10%NaOH5—————丙酮液—4————1%葡萄糖——4———1%果糖———4——1%蔗糖————442mol/L盐酸—————10班氏试剂1010101010—1-5管于沸水中加热3分钟，观察结果；6号管加蒸馏水10滴，于沸水中加热10分钟，不时振荡，再加10%NaOH10滴，班氏试剂10滴混匀，于沸水中再加热3分钟，与5号管比较，记录结果4、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象（1）+10%乙酰乙酸乙酯2滴+2，4-二硝基苯肼10滴，振荡，观察结果，写出反应式（2）+10%乙酰乙酸乙酯10滴+1%FeCl31滴，观察结果再加溴水1滴，观察变化，并加以解释5、尿素的化学性质+尿素1匙小火加热，待尿素熔化红色石蕊试纸放置管口，观察变化继续加热待管内物质凝固后冷却试管，加水2ml玻棒搅动促溶，吸取上层溶液于另一试管中再加入10%NaOH、1%CuSO4各1滴，观察变化注意事项1、注意区分以下试剂：液体苯酚——5%苯酚溶液5%Br2的CCl4溶液——溴水2、液体苯酚预先加热，盛放其的试管也要预热3、缩二脲反应中试管冷却后再加水，并用玻棒轻轻搅动4、挥发性试剂全部摆放在边台上，用后及时归位实验三动物组织中核酸的提取与鉴定•实验目的：•1、掌握组织中的核酸的提取与鉴定•2、掌握离心机的使用•3、熟悉加样器的使用•实验原理•1、提取原理：•a:DNA和RNA大部分与Pro结合成核蛋白。•b:核蛋白可被三氯醋酸沉淀下来。•c:10%NaCl溶液从沉淀中提取核酸，生成核酸•的钠盐•d:乙醇把核酸钠沉淀下来核苷→（B-R）磷酸（P）2、鉴定原理核酸→核苷酸→基碱（B）戊糖（R）核酸的基本组成单位嘌呤（AG）嘧啶核糖（CU）脱氧核糖（CT）•a:磷酸+钼酸铵磷钼酸钼蓝•b:嘌呤+AgNO3絮状嘌呤银•c:核糖糠醛绿色化合物•d:脱氧核糖ω-羟基-γ-酮基戊醛•蓝色化合物氨基萘酚磺酸H+3，5-二羟基甲苯H+二苯铵操作步骤•1、提取步骤•制备肝组织匀浆：脱臼处死或断头处死剖腹取全部肝组织生理盐水冲洗血污，吸干净三氯醋酸2ml分散匀浆机匀浆•分离提取于全部匀浆内加入生理盐水2ml，玻棒混匀静置3min，3000rpm3min,弃上清沉淀加入10%NaCl2ml，沸水浴3min,玻棒搅拌取出冷却，3000rpm3min取上清，逐滴95%酒精2管，混匀静置5min，3000rpm5min弃上清，得白色核酸钠•核酸的水解：•短试管内加入5%H2SO43.5ml•玻棒搅匀•沸水浴中10min•成分的鉴定管号水解液5%H2SO4浓氨水5%AgNO3测定管20d—2~3d10d对照管—20d2~3d10d沸水浴3~5min，观察结果，静置15min,观察结果嘌呤的鉴定•磷酸的鉴定管号水解液5%H2SO4钼酸铵试剂氨基萘酚磺酸测定管10d—5d20d对照管—10d5d20d放置3min，沸水浴3~5min，观察颜色差异•核糖的鉴定管号水解液5%H2SO43，5-二羟基甲苯测定管4d—6d对照管—4d6d沸水浴5~10min，观察颜色差异•脱氧核糖的鉴定管号水解液5%H2SO4二苯胺试剂测定管20d—30d对照管—20d30d沸水浴5~10min，观察颜色差异注意事项•1、做鉴定部分时尽量用大试管，所有标•号朝试管上方•2、玻璃棒搅拌要轻柔•3、胶头滴管使用要注意顺序，避免污染移液枪的使用1、看清最大刻度，选择适当容量的移液枪（最大刻度和读数的关系）2、先调好刻度3、打至第一档吸入试剂4、打出试剂时要按至第二档5、使用加样器时要慢、稳，不要有气泡出现•离心机的使用台秤平衡对称插入定时定速实验四蛋白质呈色反应、沉淀反应及等电点的测定•实验目的：•1、掌握双缩脲法、茚三酮法、Folin法定性检查蛋白质的方法•2、验证几种蛋白质沉淀反应的现象及酸碱性环境的影响•3、了解蛋白质等电点测定一、蛋白质的呈色反应•实验原理：•双缩脲反应：含有—CO—NH—、—CS—NH—、—CH2—NH—等基团的化合物在浓碱液中与硫酸铜生成紫红色复合物。•茚三酮反应：含有自由氨基的化合物与茚三酮共热，生成紫色化合物。•Folin法：酚性羟基在碱性环境中，与酚试剂生成钼蓝操作步骤（1）+1：10鸡蛋白2滴1%CuSO41滴+10%NaOH5滴混匀，观察颜色（2）+1：10鸡蛋白4滴+蒸馏水10滴+0.1%茚三酮乙醇8滴，混匀，观察颜色蒸馏水6滴+10%NaOH3滴，酚试剂1滴，混匀，观察颜色+1：10鸡蛋白2滴+0.25%白明胶0.25%酚溶液0.25%酪氨酸二、蛋白质的沉淀反应•实验原理：•1、盐析：破坏水化膜，中和电荷•常用中性盐：（NH4）2SO4、Na2SO4、NaCl2、重金属盐类沉淀：条件：PHPI，蛋白质带负电荷重金属离子：Cu2+、Hg2+、Pb2+、Ag+3、生物碱试剂沉淀：条件：PHPI，蛋白质带正电荷生物碱试剂：钨酸、苦味酸、鞣酸操作见讲义三蛋白质等电点的测定•在某一PH下，蛋白质带正电荷和负电荷数相等，容易彼此结合形成沉淀，此PH值称为等电点。•操作见讲义注意事项•1、酪氨酸和酪蛋白，酚溶液和酚试剂勿混淆•2、等电点测定时用大试管•3、先做第二个盐析实验