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重庆西南制药二厂有限责任公司页数共8页文件编码：SVP-09002-01-2012文件名称立式压力蒸汽灭菌器效果再验证方案制定人制定日期审核人审核日期QA审阅人审阅日期批准人批准日期受控状态分发号生效日期分发部门□质量部QA□质量部QC□技术部□综合部□供销部□设备工程部□动力车间□EHS部□财务部□生产部□一车间□二车间□三车间□制剂车间文件历史日期变更原因变更前文件版本号重庆西南制药二厂有限责任公司SVP-09002-01-2012立式压力蒸汽灭菌器效果再验证方案批准人批准日期第2页共8页验证小组人员名单组长姓名职务/职称职责培训签名李辉质量部负责验证方案和报告的审核工作；负责组织实施灭菌效果确认组员姓名职务/职称职责培训签名付娜QC负责验证方案和报告的起草；负责实施灭菌效果确认；负责进行检测；统计检测数据；陈静QC主管负责验证方案和报告的起草；负责实施灭菌效果确认；负责进行检测；统计检测数据；谢青QA协调验证工作重庆西南制药二厂有限责任公司SVP-09002-01-2012立式压力蒸汽灭菌器效果再验证方案批准人批准日期第3页共8页目录序号项目名称页码1目的………………………………………………………………………………………42验证类别………………………………………………………………………………43验证时间………………………………………………………………………………44验证依据…………………………………………………………………………………45验证内容…………………………………………………………………………………46接受标准…………………………………………………………………………………47验证的实施步骤…………………………………………………………………………48偏差及异常处理……………………………………………………………………89对验证方案的意见及批准………………………………………………………………8重庆西南制药二厂有限责任公司SVP-09002-01-2012立式压力蒸汽灭菌器效果再验证方案批准人批准日期第4页共8页1目的：提供足够的数据和文件依据，确认立式压力蒸汽灭菌器的可靠性，确保微生物学检验及环境监测数据的真实可靠。2验证类别：同步验证3验证时间：2012.12月-2013.014验证依据：《药品生产质量管理规范》（2010年修订）；《药品生产验证指南》（2003年修订）；《验证管理规定》SMP-10002-035.验证可接受标准验证项目验证可接受标准验证方法细菌挑战性试验灭菌后指示菌应全部死亡微生物限度检查121℃压力蒸汽灭菌化学指示卡变色反应灭菌后指示卡颜色应达到或深于标准颜色（黑色）目测法生物指示剂灭活实验灭菌后指示菌应全部被灭活培养法6.验证的实施步骤6.1试验条件6.1.1检测用仪表确认名称型号编号校验日期校验结论有效时间压力表结论：检查人/日期复核人/日期7.1.2检测用菌种、指示剂（卡）等的确认名称规格来源枯草芽孢杆菌大肠埃希菌沙门菌铜绿假单孢菌金黄色葡萄球菌嗜热脂肪芽孢杆菌生物指示剂枯草杆菌黑色变种芽胞菌片121℃压力蒸汽灭菌化学指示卡结论：检验人/日期：复核人/日期：重庆西南制药二厂有限责任公司SVP-09002-01-2012立式压力蒸汽灭菌器效果再验证方案批准人批准日期第5页共8页7.1.3菌培养物制备：分别取枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌1白金耳于装有9ml营养肉汤培养基的试管中，于30～35℃培养18～24小时后，出现浑浊，说明各种菌均有生长，即得枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌的培养物，备用。7.2取样方法：7.2.1取样点：立式压力蒸汽灭菌器内上、中、下三部位各取样点（见物品放置图）物品放置图7.2.2取样频次：每个试验进行三次。7.3生物指示剂灭活试验：7.3.1枯草杆菌黑色变种芽胞菌片(115℃灭菌20分钟)7.3.1.1验证方法：取9张枯草杆菌黑色变种芽胞菌片按物品放置图位置放于立式压力蒸汽灭菌器内，按立式压力蒸汽灭菌器标准操作程序，于115℃灭菌20分钟后，取出于30~35℃培养24~48小时。同时取两片未灭菌枯草杆菌黑色变种芽胞菌片作对照，分别于24小时和48小时观察，记录结果。7.3.1.2结果判定：当加入未灭菌枯草杆菌黑色变种芽胞菌片的培养肉汤经培养后显混浊，而灭菌后的枯草杆菌黑色变种芽胞菌片的培养肉汤经培养后清亮，无混浊，说明枯草杆菌黑色变种芽胞菌全部被灭活。7.3.1.3验证结果：315467892重庆西南制药二厂有限责任公司SVP-09002-01-2012立式压力蒸汽灭菌器效果再验证方案批准人批准日期第6页共8页7.3.2嗜热脂肪芽孢杆菌生物指示剂(121℃灭菌15分钟)7.3.2.1验证方法：取9瓶嗜热脂肪芽孢杆菌生物指示剂按物品放置图位置放于立式压力蒸汽灭菌器内，按立式压力蒸汽灭菌器标准操作程序，于121℃灭菌15分钟后，取出于54℃培养48小时。同时取2支未灭菌的嗜热脂肪芽孢杆菌生物指示剂作对照。7.3.2.2结果判定：当未灭菌的嗜热脂肪芽孢杆菌生物指剂经培养后由紫色变为黄色、而灭菌后的仍为紫色时，说明嗜热脂肪芽孢杆菌全部被灭活。7.3.2.3.1验证结果：检测结果灭菌时间及温度123456789阳性对照12121℃15分钟第一次第二次第三次结论：检查人/日期复核人/日期7.4121℃压力蒸汽灭菌化学指示卡变色反应试验：取样点标准培养后现象结论第一次第二次第三次1培养基清亮、无混浊23456789阳性对照1号培养基混浊2号检验人/日期：复核人/日期：重庆西南制药二厂有限责任公司SVP-09002-01-2012立式压力蒸汽灭菌器效果再验证方案批准人批准日期第7页共8页7.4.1验证方法：将每组9张“121℃压力蒸汽灭菌化学指示卡”按物品放置图位置放于立式压力蒸汽灭菌器内，按立式压力蒸汽灭菌器标准操作程序，于121℃灭菌15和30分钟各一次后，取出与化学指示卡自带标准颜色（黑色）比较。7.4.2结果判定：121℃压力蒸汽灭菌化学指示卡灭菌后颜色如达到或深于标准颜色（黑色），则本试验合格。7.4.3验证结果：7.5细菌挑战性试验：7.5.1验证方法：将枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌的培养物各9支培养物按物品放置图位置放于立式压力蒸汽灭菌器内，按立式压力蒸汽灭菌器标准操作程序，于121℃灭菌30分钟后，取出，即得枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌的灭菌培养物。取各灭菌培养物1ml，置直径90mm的灭菌平皿中，将预先准备好的营养琼脂培养基熔化，冷至约45℃时，倾注上述平皿各约15-20mL，混匀待凝。将各凝固平板倒置于30～35℃培养箱中培养，分别于24小时和48小时观察，记录结果，每管平行测定2份。同时用两个灭菌平皿各加注0.9%的无菌氯化钠溶液1mL作为阴性对照；并用大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌作阳性对照。7.5.2结果判定：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门菌、铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌培养物灭菌后，经培养应无菌生长，则细菌挑战性试验合格。7.5.3验证结果：检测结果灭菌培养物123456789阳性对照12检测结果灭菌时间及温度123456789121℃15分钟第一次第二次第三次121℃30分钟第一次第二次第三次结论：检查人/日期复核人/日期重庆西南制药二厂有限责任公司SVP-09002-01-2012立式压力蒸汽灭菌器效果再验证方案批准人批准日期第8页共8页枯草芽孢杆菌第一次第二次第三次大肠杆菌第一次第二次第三次沙门菌第一次第二次第三次铜绿假单孢菌第一次第二次第三次金黄色葡萄球菌第一次第二次第三次结论：检查人/日期复核人/日期8.异常及偏差处理在本方案实施过程中发生的任何偏差或异常情况均应详细记录，并清楚说明引起偏差或异常情况的原因及纠正结果，执行偏差管理规程SMP-01008-03。对于不需修改验证方案的调整，经验证小组组长批准后，允许经过调整后继续进行验证工作，但必须记录调整的原因、方式及过程。需要修改验证方案时，应按照《验证管理规程》中的规定重新起草验证方案，进行审批后，方可正式实施。验证小组组长应保证验证结论的准确无误。9.对验证方案的意见及批准意见或建议验证委员会成员会签