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主讲：张磊蕾葡萄属落叶木质藤本植物，葡萄地上部分的茎细。节上具有卷须，可向上攀援。叶近圆型或卵型，3～5裂。葡萄原产于温带地区，不太抗寒。葡萄的根系抗寒力很弱，在－5～－7℃时即受冻。一、形态特征和生物学习性二、葡萄的组织培养1、选材接种：从生长旺盛的葡萄新梢顶端取1～2㎝的茎尖,消毒,分离出约2mm长的茎尖，接种到培养基上。2、培养基：MS培养基，再添加6-BA1～2mg/L，NAA0.01mg/L，LH100mg/L，蔗糖2%，琼脂0.6%，而B5培养基愈伤组织化严重，茎尖生长不好。3、苗分化：6-BA0.5mg/L，同时添加GA30.2，黑暗处理可促进幼茎的伸成，提高成苗率。4、根分化：将苗转入MS+IAA0.4mg/L+NAA0.05mg/L培养基中进行生根。三、脱毒与快繁葡萄受到26种病毒的危害,主要有卷叶病毒、栓皮病毒、扇叶病毒、黄脉病毒和斑点病毒等。由于病毒的危害，葡萄的长势减弱，产量降低，果实的糖分含量减少，风味变劣。葡萄卷叶病是危害最大的病毒病。（一）脱毒（1）将材料置于38℃，CO21200mg/L的人工空气侯箱内。经30min处理，较易从枝条尖端或休眠芽中除去扇叶病毒。其他病毒较难消除。（2）直接将葡萄蔓浸泡在50℃的温水中10～20min，可以治疗皮尔斯病。（3）将感染材料的修面芽插入健康指示植物的蔓中，然后在38℃的环境中保持2个月，以后取出枝条和接种芽继续生长。1、热处理脱毒：2、茎尖培养脱毒•在25℃，相对湿度80%，每日16h的长日照条件下水培生成新芽，剥离切取带1~3个叶原基0.2~0.3mm茎尖进行立体培养，即可获得脱毒苗。3、无病毒苗的鉴定•用抗血清法、电子显微镜检测法、ELISA法或指示植物进行病毒鉴定，以确保脱毒后的试管苗不含病毒。（二）快繁•1、材料与消毒•取经过脱毒的枝条稍1~2cm，用5%的次氯酸钠aq消毒2~3min，用无菌水冲洗3次，再在0.1%升汞aq中浸泡2min，用无菌水冲洗4次。把芽放在解剖镜下，无菌条件下，去除幼叶和叶原基，使生长点暴露。用刀切下含有1~2个叶原基，大小为0.2~0.3mm的生长点接种于培养基上。2、培养条件•培养基•茎尖分化与继代培养培养基：1/2MS+6-BA0.5mg/L+LH100mg/L+NAA0.01mg/L+GA0.2mg/L,2%蔗糖，0.6%琼脂，PH=5.8•生根培养基：1/2MS+IAA0.4mg/L+NAA0.05mg/L•温度：25±2℃•光照：1000lx，16小时3、生长与分化•接种成活的茎尖在一个月左右开始分化出芽和侧芽，两个月左右形成芽丛，即可进行大量增殖。每月继代一次，每个芽丛切成10个。4、生根培养•剪取2~3cm长的无根幼苗，插于上述培养基上，1~2周内幼苗生根，一个月形成发达的根系，同时长出5~6片新叶，生根率达90%以上。5、试管苗的驯化与移栽•试管苗长出5~7片新叶时，把瓶子移入温室中，即时可打开培养瓶，历时7d。把苗从培养瓶中取出，洗净培养基，栽于经过干热灭菌处理的蛭石内，盘上塑料薄膜罩严，置于阳光下，20℃，自然条件下锻炼15d。移入土中。小结：葡萄的脱毒与快繁形态特征和生物学习性葡萄的组织培养选材接种培养基苗分化根分化脱毒与快繁脱毒快繁热处理脱毒茎尖培养脱毒无病毒苗的鉴定材料与消毒培养条件生长与分化生根培养试管苗的驯化与移栽08生物教育张磊蕾